Scientific journal

Fundamental research

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

В современном обществе хроническая обструктивная болезнь легких, наряду с артериальной гипертонией, ишемической болезнью сердца и сахарным диабетом, входит в группу ведущих хронических заболеваний; на их долю приходится более 30% среди всех других форм патологии человека. Всемирная организации здравоохранения (ВОЗ) относит ХОБЛ к заболеваниям с высоким уровнем социального бремени, широко распространенным как в развитых, так и в развивающихся странах. По прогнозу на период до 2020 г., составленному экспертами ВОЗ, ХОБЛ станет не только одной из самых распространенных болезней человека, но войдет в число лидирующих причин смертельных исходов. В то же время ожидается снижение уровня летальности от инфаркта миокарда, онкологических заболеваний, туберкулеза и т.д. [5].

Согласно рекомендациям Американского торакального общества и Европейского респираторного общества ХОБЛ определяется как заболевание, которое можно предупредить и лечить, характеризующееся не полностью обратимой бронхиальной обструкцией. Ограничение воздушного потока обычно прогрессирует и связано с абнормальным воспалительным ответом дыхательных путей на повреждающие частицы или газы, причем основной причиной которого является курение. Хотя ХОБЛ поражает легкие, она также приводит к значимым системным проявлениям [1].

Важной особенностью условий возникновения ХОБЛ у конкретного индивидуума является длительное (исчисляемое порой десятилетиями) действие этиологических факторов (факторов риска). К внешним факторам риска относятся табакокурение, социально-экономический статус, профессия, загрязнение окружающей среды, рецидивирующая бронхолегочная инфекция, перинатальная патология и детские болезни, питание. К внутренним факторам относятся генетическая предрасположенность, пол, бронхиальная гиперреактивность, гипериммуноглобулинемия E, бронхиальная астма. При этом обычно совместное действие и внутренних, и внешних факторов формирует заболевание [2, 6].

Хроническая обструкция легких, как и любое мультифакториальное заболевание, характеризуется не только разнообразием этиологических факторов, но и рядом патогенных показателей, составляющих ее основу. Со стороны функционирования рибосомального аппарата клетки, данная патология мало изучена. Рибосомные гены содержат наследственную информацию о рибосомах, которые, в свою очередь, обеспечивают синтез белка. Интенсивность синтеза белка влияет на пролиферацию клеток, которая, в свою очередь, определяет скорость роста тканей. Геномная доза рибосомных генов определяет потенциальные возможности общей интенсивности синтеза белков в клетке [3]. Недостаточность изу­чения вовлеченности вышеперечисленных факторов в патогенез ХОБЛ определило проведение настоящего исследования.

Целью нашего исследования являлось изучение основных показателей функциональной активности рибосомных генов (ФАРГ), а также характер их взаимосвязей при хронической обструктивной болезни легких.

Материал и методы исследования

Материалом для исследования послужили лимфоциты 186 лиц, страдающих хронической обструкцией легких в возрасте от 50 до 70 лет и контрольной группы в числе 53 практически здоровых лиц, жителей города Курска и Курской области. Средний возраст лиц, страдающих ХОБЛ, составил 63,25 ± 3,21. Среди обследованных женщины составили 42,11%, мужчины 57,89%.

Метафазные пластики получали путем культивирования лимфоцитов периферической крови по стандартной методике [4]. Фиксацию проводили на 72 часу культивирования, после чего окрашивали раствором нитрата серебра. Активность рибосомных генов оценивали визуально полуколичественным способом и выражали в условных единицах (усл. ед.).

Активность рибосомных генов определяли по интенсивности окраски серебром ядрышкообразующих районов индивидуальных акроцентрических хромосом
(13-15 D и 21, 22 G). Для каждого индивидуума анализировали 20 метафазных пластинок. Визуальная оценка этого показателя производилась по 5-балльной системе, согласно критериям, предложенным в лаборатории общей цитогенетики РАМН: «0» баллов - окраска отсутствует; 1 балл - окраска слабая (зерно серебра много меньше ширины хроматиды); 2 балла - средняя окраска (зерно серебра примерно соответствует ширине хроматиды); 3 балла - интенсивная окраска (зерна серебра больше ширины хроматиды); 4 балла - высокоинтенсивная окраска (зерна серебра, выпавшие на каждой хроматиде, значительно шире ее и слипаются, вместе образуя общий конгломерат). Также отдельно оценивалась активность рибосомных генов, расположенных в хромосомах группы D и группы G. Число активных рибосомных цистронов (RC) определяли по количеству окрашенных хромосом. Подсчитывали число ассоциаций акроцентрических хромосом на одну клетку и число хромосом, вступивших в ассоциации.

Для выбора методов статистического анализа проводилась проверка на нормальность распределения признака. Для этого использовали критерий Шапиро-Уилка, при р < 0,05. Так как в большинстве случаев значение р было больше критического, то при описании количественных признаков использовали параметры распределения, отличного от нормального: среднее значение, стандартную ошибку среднего значения, минимальное и максимальное значение признака, медиану, интервал варьирования признаков. Для оценки сложного взаимодействия характеристик проводили расчет коэффициентов корреляций по Спирману (r), являющиеся мерой линейной связи признаков, а также линейно-дискриминантной функции (ЛДФ).

Основные показатели комплекса функциональной активности рибосомных генов у больных с ХОБЛ и контрольной группы представлены в табл. 1 и 2 соответственно.

Средний показатель суммарной функциональной активности рибосомных генов по 10 хромосомам у больных с ХОБЛ составил 19,49 ± 2,00 у.е. (95% CI 19,20-19,78 у.е.), варьировался от 15,28 до 24,84 у.е. Значение медианы (Ме = 19,45 у.е.) практически совпадало со средним значением и находилось посередине межквартильного интервала (Q25 = 18 у.е., Q75 = 20,80 у.е.). При сравнении с медианным показателем контрольной выборки статистически значимых различий не обнаружено, хотя значение р было очень близко к критическому уровню (Z = 1,78, р = 0,08). При анализе характера распределения признака также наблюдалась относительная гомогенность (р = 0,07).

Показатель активности рибосомных генов по хромосомам группы D у больных с ХОБЛ был равен 11,62 ± 1,66 у.е. (95% CI 11,34-11,91 у.е.), варьировался от 6,90 до 16,20 у.е. и почти совпадал с медианным значением (Ме = 11,69 у.е.). Статистически значимых отклонений от популяционных характеристик ни при сравнении медиан (Z = 0,62, р = 0,54), ни при анализе дисперсии (р = 0,77) выявлено не было. Также их не было и при сравнительном анализе функциональной активности рибосомных генов по хромосомам группы G, средний показатель которой составил 7,84 ± 1,55 у.е. (95% CI 7,58-8,11 у.е.) и был ниже значения медианы (Ме = 7,95 у.е.). Медиана занимала срединное положение относительно квартильных значений (Q25 = 7,00 у.е., Q75 = 8,80 у.е.). Критерий Манна-Уитни составил Z = 1,52, при р = 0,13 и при сравнении дисперсии р = 0,20.

Основные показатели ФАРГ при ХОБЛ

Примечания: *p < 0,05, 10Ag-суммарная ФАРГ по 10 хромосом; D - показатель ФАРГ по D-хромосомам; G - показатель ФАРГ по G-хромосомам; RC - количество рибосомных цистронов; AsCr - количество ассоциаций хромосом; CrAs - количество хромосом в ассоциациях; AssInd - ассоциативный индекс.

Основные показатели ФАРГ контрольной группы

Примечания: *p < 0,05, 10Ag-суммарная ФАРГ по 10 хромосом; D - показатель ФАРГ по D-хромосомам; G - показатель ФАРГ по G-хромосомам; RC - количество рибосомных цистронов; AsCr - количество ассоциаций хромосом; CrAs - количество хромосом в ассоциациях; AssInd - ассоциативный индекс.

Средний показатель количества активных рибосомных цистронов у больных с ХОБЛ составлял 8,76 ± 0,64 (95% CI 8,65-8,87), незначительно отклонялся от медианного показателя (Ме = 8,60) и не отличался от количества активных рибосомных цистронов в контрольной выборке (Z = 1,13, при р = 0,26). Также относительно данных контроля у больных не были смещены ни границы нижнего и верхнего квартилей, ни значение минимального показателя (р = 0,33).

Усреднённое количество ассоциаций акроцентрических хромосом у больных с ХОБЛ составило 0,90 ± 0,34 (95% CI 0,84-0,95) на клетку, варьировалось от полного отсутствия до 1,70. Значение медианы (Ме = 0,90) совпадало со средним значением и практически не отклонялось ни к одному из квартилей (Q25 = 0,67 и Q75 = 1,08). При сравнении с контрольной выборкой установлены статистически значимые различия как для медианных значений (Z = 6,40, при р = 0,0001), так и для характеристик дисперсии (р = 0,0001).

Ассоциативный индекс хромосом в клетках больных с ХОБЛ был равен 68,68 ± 21,32% (95% CI 65,06-72,29%), медиана (Ме = 70%) была смещена в большую от среднего значения сторону (Q25 = 55 и Q75 = 80), а результаты сравнения с контрольной выборкой повторяли таковые по данным количества ассоциаций акроцентрических хромосом: медианный показатель был больше у больных с ХОБЛ (Z = 5,36, при р = 0,0001), также отличались и границы варьирования (р = 0,0004).

Среднее количество ассоциирующих хромосом на клетку составляло 2,66 ± 0,64 (95% CI 2,55-2,77), совпадало с медианным значением (Ме = 2,67) и варьировалось от 0 до 4,5 взаимодействующих хромосом. Сравнительный с контрольной выборкой анализ распределения количества хромосом в ассоциациях показал наличие различий между группами, но принятого для исследования статистически значимого уровня они не достигали (р = 0,08). Также статистически значимых различий не выявлено и при сравнении медиан двух групп (Z = 1,33, при р = 0,19).

Многомерный анализ показателей комплекса функциональной активности рибосомных генов у больных с ХОБЛ и контрольной группы позволил получить значения парных коэффициентов корреляции и установить следующие статистические взаимосвязи (табл. 3 и 4).

Статистически значимые коэффициенты корреляций в группе больных ХОБЛ

Примечание. *р < 0,05.

Статистически значимые коэффициенты корреляций в группе контроля

Примечание. *р < 0,05.

Так, в отличие от контрольной выборки, показатель возраста коррелировал только с одной из рассматриваемых цитогенетических характеристик - с уровнем ФАРГ по хромосомам группы D, связь имела отрицательную направленность и невысокую выраженность (R = 0,18). В то время как связи суммарного уровня ФАРГ по 10 хромосомам дублируют аналогичные связи в контрольной группе, незначительно варьируют по степени выраженности: уровень сопряженности с показателем ФАРГ по хромосомам группы D был практически одинаков с контрольной группой (R = 0,62), уровень сопряженности с показателем ФАРГ хромосом группы G был ниже данных контроля и коэффициент корреляции составлял R = 0,54, вклад в общий уровень ФАРГ количества активных рибосомных цистронов был выше, чем в контроле (R = 0,58). Наблюдалась статистически значимая взаимосвязь с количеством ассоциаций акроцентрических хромосом (R = 0,26), которой не было в контрольной группе. В отличие от контрольной группы показатель количества ассоциаций акроцентрических хромосом коррелировал с количеством активных рибосомных цистронов (R = 0,23) и с показателем уровня ФАРГ по хромосомам группы D (R = 0,17). В то же время показатель количества хромосом в ассоциациях, в отличие от контрольной группы, образовывал статистически значимую взаимосвязь лишь с одним признаком - количеством ассоциирующих хромосом (R = 0,56).

Изменения в структуре цитогенетических показателей, а также разницу в характере корреляционных взаимосвязей рассматриваемых признаков на статистически значимом уровне подтверждают результаты проведенного дискриминантного анализа. В частности видно, что при ХОБЛ наиболее ценными признаками являются число ассоциаций хромосом, число хромосом в ассоциациях и количество рибосомных цистронов. Критерий Фишера составил 17,03, что значительно превышает теоретически ожидаемый показатель при данных степенях свободы, F_табл = 3,78 (табл. 5).

Величина ЛДФ количественных характеристик ФАРГ больных ХОБЛ и контрольной группы (F(3,271) = 17,03, p < 0,00002)

Рибосомные гены на молекулярном уровне обеспечивают работу белоксинтезирующего аппарата клетки. Интенсивность влияет на пролиферацию клеток, которая, в свою очередь, определяет скорость роста и восстановление клеток, тканей, органов, что определяет физиологические регенерационные возможности организма. Можно полагать, что потенциальная возможность любой ткани, и в частности легочной, к регенерации в значительной степени зависит от функциональной активности рибосомных генов.

В результате проведенного исследования, в группе больных ХОБЛ было выявлено увеличение функциональной активности рибосомных генов по таким показателям, как число ассоциаций акроцентрических хромосом и ассоциативный индекс, тогда как в группе контроля данные показатели были значительно ниже. ФАРГ по 10 хромосомам в группе больных ХОБЛ также характеризовалась повышенными значениями, в сравнении с контрольной группой.

Таким образом, полученные результаты отражают закономерность, согласно которой многие показатели функциональной активности рибосомных генов у больных хроническим бронхитом отличаются повышенными значениями, нежели чем в группе контроля. Вероятно, данная закономерность может отражать сопротивление организма на возрастающее число патогенных клеток легочной ткани, которые стимулируют процессы регенерации и восстановления клеток через повышение белоксинтезирующей способности.

• Полоников А.В., д.м.н., профессор, профессор кафедры биологии, медицинской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета, г. Курск;
• Королев В.А.,д.б.н., доцент, профессор кафедры биологии, медицинской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета, г. Курск.

Работа поступила в редакцию 30.04.2012.