Методы исследования: Выделение ДНК из клинического материала проводилось с помощью набора реагентов ЗАО «ВСМ». Для амплификации ДНК пародонтопатогенных бактерий использовали метод мультиплексной ПЦР, позволяющей использовать одновременно 4-6 перекрещивающихся праймеров нескольких возбудителей (Ashimoto A., et al, 1996). Маркерные пародонтопатогенные виды (по классификации ВОЗ) выявляли с помощью классического бактериологического исследования в анаэробных условиях (анаэростат «Биомерье»).
Результаты и обсуждение: Проведено исследование состава бактериальной флоры пародонтального кармана у 36 пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом в возрасте от 18 до 65 лет. Оказалось, что ПЦР дает более высокое число положительных реакций по сравнению с традиционным бактериологическим методом. Так , P. intermedia бактериологическим методом идентифицировано у 14 пациентов (38,8%), а с помощью молекулярно-генетического метода - у 22 (61,1%).P. gingivalis бактериологическим методом идентифицировано у 11 пациентов (30,5%), а с помощью ПЦР - у 20 человек (55,6%), A.actinomicetemcommitans выявили у 8 пациентов (22,2%) бактериологическим методом, а молекулярно-генетическим - у 14 (38,9%). Кроме того, с помощью ПЦР удалось выявить маркерыB.forsithus и T.denticola у 21 пациента (58,3%) и 19 пациентов (52,7%) соответственно. При бактериологическом исследовании данные пародонтопатогенные виды бактерий ранее в отечественной лабораторной практике не определялись. Совпадение положительных результатов, детектируемых ПЦР и бактериологическим методом, наблюдалось в 19,4% случаев. Таким образом, идентичность результатов при использовании этих двух методов наблюдалось в 75% случаев. У 6 обследованных человек (16,7%) положительные результаты были получены только в ПЦР, у 3 (8,3%) - только с помощью бактериологического метода. Для проверки специфичности системы для обнаружения пародонтопатогенных бактерий с помощью ПЦР мы провели исследование образцов клинических штаммов P. Intermedia, идентифицированных по культуральным и биохимическим свойствам. Выделенную из этих образцов ДНК амплифицировали и определяли видовую принадлежность методом обратной гибридизации. В результате установлено полное совпадение результатов с бактериологическим методом диагностики.
Выводы: Использование ПЦР позволяет исправить неточности диагностики бактериологическим методом. Высокая специфичность и чувствительность системы для обнаружения пародонтопатогенных бактерий с помощью ПЦР позволяет быстро идентифицировать пациентов из группы риска и дает ценную информацию для выбора эффективного способа антибактериального лечения.