Методы исследования: Выделение ДНК из клинического материала проводилось с помощью набора реагентов ЗАО «ВСМ». Для амплификации ДНК пародонтопатогенных бактерий использовали метод мультиплексной ПЦР, позволяющей использовать одновременно 4-6 перекрещивающихся праймеров нескольких возбудителей (Ashimoto A., et al, 1996). Маркерные пародонтопатогенные виды (по классификации ВОЗ) выявляли с помощью классического бактериологического исследования в анаэробных условиях (анаэростат «Биомерье»).
Результаты и обсуждение: Проведено исследование состава бактериальной флоры пародонтального кармана у 36 пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом в возрасте от 18 до 65 лет. Оказалось, что ПЦР дает более высокое число положительных реакций по сравнению с традиционным бактериологическим методом. Так , P. intermedia бактериологическим методом идентифицировано у 14 пациентов (38,8%), а с помощью молекулярно-генетического метода - у 22 (61,1%).P. gingivalis бактериологическим методом идентифицировано у 11 пациентов (30,5%), а с помощью ПЦР - у 20 человек (55,6%), A.actinomicetemcommitans выявили у 8 пациентов (22,2%) бактериологическим методом, а молекулярно-генетическим - у 14 (38,9%). Кроме того, с помощью ПЦР удалось выявить маркерыB.forsithus и T.denticola у 21 пациента (58,3%) и 19 пациентов (52,7%) соответственно. При бактериологическом исследовании данные пародонтопатогенные виды бактерий ранее в отечественной лабораторной практике не определялись. Совпадение положительных результатов, детектируемых ПЦР и бактериологическим методом, наблюдалось в 19,4% случаев. Таким образом, идентичность результатов при использовании этих двух методов наблюдалось в 75% случаев. У 6 обследованных человек (16,7%) положительные результаты были получены только в ПЦР, у 3 (8,3%) - только с помощью бактериологического метода. Для проверки специфичности системы для обнаружения пародонтопатогенных бактерий с помощью ПЦР мы провели исследование образцов клинических штаммов P. Intermedia, идентифицированных по культуральным и биохимическим свойствам. Выделенную из этих образцов ДНК амплифицировали и определяли видовую принадлежность методом обратной гибридизации. В результате установлено полное совпадение результатов с бактериологическим методом диагностики.
Выводы: Использование ПЦР позволяет исправить неточности диагностики бактериологическим методом. Высокая специфичность и чувствительность системы для обнаружения пародонтопатогенных бактерий с помощью ПЦР позволяет быстро идентифицировать пациентов из группы риска и дает ценную информацию для выбора эффективного способа антибактериального лечения.
Библиографическая ссылка
Плахтий Л.Я., Царев В.Н., Рындина Е.И., Бекмурзова А.И., Льянова Д.К., Цаллагов А.К. Эффективность применения метода обратной гибридизации днк для выявления пародонтопатогенных бактерий // Фундаментальные исследования. 2004. № 1. С. 80-80;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=2225 (дата обращения: 02.04.2025).