В повседневной суете кожа человека подвержена различным повреждениям. Это связано с прямым контактом ее с окружающей средой. В коже хорошо развиты процессы репаративной регенерации, в основе которых лежат механизмы миграции и митотического деления эпидермальных клеток и клеток дермы (фибробластов) [2]. Проблемой восстановления поврежденных тканей занимаются с давних пор и получены важные результаты.
Однако, в последнее время участились случаи термического поражения кожи из-за взрывов, пожаров, и это требует быстрой и качественной терапии. Целью нашего исследования явилось изучение репаративной возможности покровных тканей при термических ожогах в условиях воздействия биологически активных веществ (БАВ) пуповинной крови [1,5].
Объектом исследования явились крысы-самки популяции Вистар со средней массой 200-215 г. Все манипуляции проводили под гексеналовым наркозом
(80 мг/кг, в/б) [3]. Термические ожоги вызывали путем наложения 30 сек на кожу межлопаточной области спины волосяного покрова, нагретой в течение 1 мин (100° С) медной монеты, присоединенной к паяльнику, диаметром соприкосновения 2 см2. Через сутки на месте ожогов возникали раны в виде изъязвлений, заполненных некротическими массами, что соответствует III АБ степени ожога у человека [4].
Начиная со 2-го дня эксперимента, на раневую поверхность ежедневно наносили синтомициновую эмульсию и приготовленную свежую пуповинную кровь. В качестве контроля использовали крыс с ожоговыми ранами, не получавших мазевые аппликации (без воздействия), и животных, которым на раны наносили ВЭО. С интервалом 3-6 дней измеряли площадь раневой поверхности путем зарисовки краев раны на приложенном к ней стерильном предметном стекле и применяли методику компьютерной гистоморфометрии на автоматизированном морфометрическом комплексе «Морфолог». Статистическую обработку результатов всех исследований проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Различия средних считали значимыми при уровне вероятности не менее 95 % (в таблицах отмечены звездочками - * - 95%, **- 99%,***-99,9%).
Характер течения репаративного процесса оценивали визуально в дни измерений площади ран, а также по результатам гистологического исследования кожи, иссеченной из краев раны в конце 3-й недели. На автоматизированном морфометрическом комплексе «Морфолог» оценивали толщину росткового слоя ЭП в краях эпителизации ран по результатам не менее чем 30 для каждой группы животных и клеточную плотность дермы. Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Различия средних считали значимыми с уровнем вероятности не менее 95% (в таблицах отмечены звездочкой).
При аппликациях мазей с биологически активными веществами пуповинной крови рожениц [6] на раневую поверхность уже в начале 2-й недели после нанесения термического ожога имела место более выраженная в сравнении с контрольными группами животных, тенденция к уменьшению площади раневой поверхности (табл. 1, стр. 7).
Полная эпителизация раневой поверхности ранее всего наблюдалась у отдельных животных при аппликации синтомициновой эмульсией.
Одной из причин более быстрого заживления ожоговых ран при использовании аппликаций с БАВ пуповинной крови человека является, на мой взгляд, их стимулирующее влияние на клеточную пролиферацию в эпителии кожи, на что косвенно указывают результаты измерения толщины росткового слоя Эп в краях эпителизации.
Так, через 3 недели после начала эксперимента у животных без воздействия и при аппликации пуповинной крови этот показатель составил соответственно 23,8 ± 0,8 мкм и 22,2 ± 0,8 мкм. Толщина росткового слоя Эп после использования синтомициновой эмульсии в этот же период наблюдения составила 33,6 ±1,0 мкм. Вероятность различий с показателями в контрольных группах животных составила 99,9%.
Во всех случаях в зоне раны отмечены признаки воспаления: расширение сосудов дермы под раневой поверхностью и ее клеточная инфильтрация, выраженные, однако, неодинаково в различных группах. В обеих контрольных группах и у животных, получавших ВЭО, отмечалось большое количество серозно-гнойного экссудата, содержащего преимущественно нейтрофилы и локализованного под поверхностными некротическими массами и вблизи края эпителизации. При использовании синтомициновой эмульсии полнокровие сосудов было менее выражено, гнойный экссудат отсутствовал.
Результаты анализа клеточного состава дермы под раневой поверхностью через 3 недели после нанесения ран (табл. 2, стр. 7) коррелируют с указанными выше особенностями течения раневого процесса при использовании разных аппликаций.
Так, в сравнении с животными контрольных групп, суммарное число клеточных элементов в дерме, подсчитанное на поле зрения микроскопа, значимо снижается при аппликации синтомициновой эмульсией. При этом наблюдается отчетливо выраженный сдвиг в сторону клеток фибробластического ряда, что в совокупности свидетельствует о более быстром разрешении в этих условиях воспалительного процесса, развивающегося в месте ожога.
Таким образом, накожные аппликации в составе мягких лекарственных форм оказывают ранозаживляющее действие, модифицируя течение воспалительного процесса в сторону активизации фибробластической реакции [3].
Таблица 1. Динамика изменений площади ожоговых ран (в см2) при использовании разных аппликаций (п=12)
|
Экспери ментальные группы |
Дни наблюдений после начала аппликации |
||||
|
До аппликации |
3-й |
12-й |
18-й |
28-й¹ |
|
|
Без воздействия |
5,78±0,23 |
5,45±0,30 |
2,52±0,25 |
1,32±0,07 |
0,85±0,12 |
|
Пуповинная кровь с БАВ |
6,01±0,20 |
5,48±0,19 |
2,07±0,20 |
1,18±0,08 |
1,00±0,21 |
|
Синтомициновая эмульсия |
6,46±0,26 |
4,79±0,24* |
1,52±0,11** |
0,66±0,05** |
0,27±0,10** |
|
ВЭО |
6,01±0,20 |
5,48±0,19 |
2,07±0,20 |
1,18±0,08 |
1,00±0,21 |
Примечание: * - на данный срок наблюдения п=8.
Таблица 2. Клеточная плотность (М±т) и соотношение различных типом клеток (в %) на единицу площади дермы через 3 недели после нанесения ожоговой раны и разных аппликаций
|
Группы животных |
Клеточная плотность |
Доля клеток |
|
|
Воспалительного инфильтрата |
Фибробластического ряда |
||
|
Без воздействия |
78,9±3,3 |
72,9 % |
27,1 % |
|
ВЭО |
87,3±-6,3 |
67,5 % |
32,5 % |
|
Пуповинная кровь с БАВ |
83,3± 5,7 |
60,9 % |
39,1 % |
|
Синтомициновая эмульсия |
47,4±3,5* |
48,4 % |
51,6 % |
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
- Владимирская Е.Б., Майорова С.А., Румянцев С.А.,Румянцев А.Г. Биологические основы и перспективы терапии стволовыми клетками. - М.: ИД МЕДПРАК-ТИКА-М, 2005. - 393 с.
- Данилов Р.К., Графова Г.Я., Хилова Ю.К и др. Морфофункциональные особенности регенерации кожи крыс после огнестрельного повреждения // Морфология. -1998. - Т. 113. - № 3. - С. 41.
- Ефимов Е.А. Посттравматическая регенерация кожи (экспериментальное исследование). - М.: Медицина, 1975. - 167 с.
- Ноздрин В.И., Белоусова Т.А., Альбанова В.И., Лаврик О.И. Гистофармакологические исследования кожи. - М.: Изд. ЗАО «Ретиноиды», 2006. - 376 с.
- www.cellules souches.fr.
- Smith A.M., Revel M.L´Utilisation des cellules souches embryonnaires pour la recherché therapeutique. Paris: BIO-7/00/GT-1/2 (Rev.3) 2001. - 20 p.