Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,222

WAY OF CORRECTION OF IMMUNOLOGICAL COMPLICATIONS AFTER SPLEEN REMOVAL

Maslyakov V.V. 1 Gromov M.S. 1 Kirichuk V.F. 1 Polykov А.В. 1
1 The Saratov branch of Samara medical institute «RЕАVIZ», Saratov
Проведено изучение состояния иммунного статуса в отдаленном послеоперационном периоде 50 пациентов после удаления селезенки по поводу ее травмы. Проводился анализ гуморального и клеточного звена системы иммунитета. В результате проведенного исследования установлено, что в клеточном звене системы иммунитета происходит снижение количества зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-киллеров. Вместе с тем отмечается повышение количества Т-цитотоксических лимфоцитов, В-лимфоцитов. В гуморальном звене систем иммунитета отмечается снижение количества иммуноглобулинов, за исключением IgA, интерлекинов, за исключением ИЛ-4. На основании проведенного исследования с целью коррекции выявленных иммунологических нарушений применяли полиоксидоний в дозе 12 мг. В результате проведенных исследований установлено, что применение этого препарата улучшает показатели как клеточного, так и гуморального звена системы иммунитета у пациентов после удаления селезенки. В связи с этим физиологически оправданным препаратом для коррекции иммунологических нарушений после спленэктомии рекомендуем полиоксидоний.
Studying a condition of the immune status in the remote postoperative period of 50 patients after spleen removal concerning its trauma is carried out. The analysis of a humoral and cellular link of system of immunity was carried out. As a result of the carried-out research it is established that in a cellular link of system of immunity there is a decrease in quantity of mature T-lymphocytes, T-helperov and T-killers. At the same time, increase of quantity of T-cytotoxic lymphocytes, В-lymphocytes is noted. In a humoral link the system of immunity is noted decrease in quantity of antibodies, except for IgA, IL, behind an exception IL-4. On the basis of the carried-out research for the purpose of correction of the revealed immunological violations applied polioksidoniya in a dose of 12 mg. As a result of the carried-out researches it is established that application of this preparation improves indicators both cellular, and a humoral link of system of immunity at patients after spleen removal. In this regard physiologically justifiable preparation for correction of immunological violations after a splenektomiya we recommend polioksidoniya.
a spleen
spleen removal
immunity stimulators
1. Barta I. Selezenka. M.: Maditsina, 1976. рр. 5–40.
2. Vinogradov V.V., Denisenko V.I. Geterotopicheskaj autolintrassplantathij selezenochnoi tkani posle cplenectomii – Khirurgij. 1986. no.2. рр. 87–90.
3. Pavlova I.E. Osobennosti funktcionirovanij immunnoi sistemy posle splenektomii u patcientov s zabolevanijmi krovi I travmami selezenki: avtoref. dis. … d-ra med. nauk. Spb, 2007. 5–34 р.
4. Chumanov A.Yu. Khirurgicheskoe lechenie povrezhdenii selezenki s uchetom izmenenii immunnogo statusa: avtoref. dis. … kand. med. nauk. M., 2011. 12 р.
5. Schapkin Yu.G., Kirichuk V.F., Maslyakov V.V. Immnnyi status v otdalennom posleoperatsionnom periode u patsientov, operirovannykh po povodu povrezhdenii selezenki – Khirurgij, 2006. no. 2. pp. 27–34.
6. Musavi M., Dayem H.A., Whitl A. Function of splenic omental implants in man after traumatic rupture of the spleen –The 32 nd World Congress of Surgery, Sidney, 1987. pp. 49.
7. Okita K., Komaga K., Okaja K. Effect of splenectomy in tumor-beaking and gastric cancer patients – Gann., 1977. Vol. 680. pp. 731–736.
8. Vobofil Z. Segmntare resktion der verletzter human-mils – Chirurg., 1982. Bd. 53. no. 11. pp. 692–696.
9. West K.W., Grosteld J.L. An autopsy method for evaluafing trauma – Wel. J. Surg., 1985. Vol. 115. no. 4. pp. 447–451.

Известно, что селезенка не является жизненно важным органом. Однако она относится к периферическим лимфоидным тканям. В ней концентрируются супрессорные, хелперные и часть эффекторных клеток, здесь же происходит процесс активного антителообразования и продукция гуморальных медиаторов [1]. В селезенке содержится приблизительно 25% лимфоцитов типа Т и около 60% лимфоцитов типа В [1]. В ней протекают оба этапа дифференцировки антителообразующих клеток из костномозговых предшественников, в то время как для Т-лимфоцитов антигеннезависимый этап дифференцировки из костномозговых предшественников осуществляется в тимусе, а антигеннезависимый - в селезенке [6, 7, 8]. В селезенке осуществляется синтез IgM, IgC, вырабатывается С3- и С4-фрагментов комплемента [9]. Кроме того, в этом органе происходит синтез компонентов комплемента, которые включаются в альтернативный путь его активации [6]. Также в селезенке содержится большое количество пропердина [7]. Кроме того, селезенке принадлежит активное участие в процессе опсонизации - изменения клеточной поверхности патогена или других частиц, что приводит к захвату опсонированных клеток фагоцитами. По мнению процесс опсонизации связан с наличием иммуноглобулинов, причем из них хорошо опсонирует только IgG. В системе комплемента эту функцию выполняет практически один компонент - С3b, который присутствует в этом органе [8]. В настоящее время травма этого органа занимает одно из ведущих мест в хирургии, при этом наиболее часто выполняют спленэктомию [5]. Вместе с тем известно, что удаление этого органа приводит к развитию различных осложнений, связанных с иммунологическими нарушениями [3, 4]. С целью коррекции этих осложнений предложено применять иммуностимуляторы [4].

Цель исследования: изучить влияние полиоксидония и имунофана для коррекции иммунологических осложнений после спленэктомии.

Материалы и методы исследования

В работе проведен анализ изменений в иммунном статусе 50 пациентов с закрытыми травмами селезенки. Распределение пациентов по полу и возрасту представлено в табл. 1.

Таблица 1 Пациенты с травмой селезенки

Возраст, лет

Мужчины

Женщины

21-30

13

6

31-40

10

8

41-50

9

4

Всего:

32

18

Группу сравнения составили 30 относительно здоровых донора-добровольца того же возраста и пола. Сроки после операции составили от 5 до 9 лет.

При изучении иммунного ответа организма определялись следующие показатели: субпопуляции Т- и В-лимфоцитов: количество в периферической крови лимфоцитов, несущих медиаторы CD3 (зрелые Т-лимфоциты); CD4 (Т-хелперы); CD8 (цитотоксические Т-клетки); CD16 (натуральные киллеры); CD20 (В-клетки), а также соотношение CD4/CD8. Изучение названных показателей выполнялось с помощью проточной цитофлюрометрии с моноклональными антителами.

Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводилось турбодидометрическим методом. Для этого исследования применяли 3,5%-й раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 Д (США) в фосфатном буфере (pH 8,4). Результаты учитывали на спектрометре СФ-46 при длине волны 450 нм и выражали в условных единицах. Общее содержание IgG, M, A - по методу простой радиальной иммуннодиффузии по Mancini и соавторам, а также IgE, определяемый по методу ИФА. Содержание С3-, С4-компонентов комплемента, ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, интерферона-γ (ИНФγ), ИЛ-4, ИЛ-10 в плазме крови определяли с помощью набора реагентов ProCon (ООО «Протеиновый контур» г. Санкт-Петербург. Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов периферической крови оценивалось по фагоцитарному индексу (ФИ) и фагоцитарному числу (ФЧ). Активность кислородсодержащих систем нейтрофилов оценивалась по реакции восстановления нитросинего тетразолия спонтанного (НСТ-сп.) и стимулированного (НСИ-ст.) зимозаном. Полиоксидоний применялся ежедневно внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки, имунофан в дозе 50 мкг, оба препарата общим курсом 9 инъекций.

Статистическая обработка полученных данных проводилась при помощи непараметрического метода U-критерия теста Mann - Whitney (пакет программ Statistica 6.0.). При этом были вычислены основные вероятностные характеристики случайных величин: среднее значение; нижний (25%) и верхний (75%) квартили, которые имели достоверность не менее 95% (p-значение < 0,05).

Результаты исследования и их обсуждение

Состояние клеточного звена системы иммунитета у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде представлено в табл. 2.

Таблица 2 Показатели клеточного звена иммунитета у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде (M ± m)

Показатель

(Группа сравнения (n = 30)

После спленэктомии (n = 50)

p

%

абс. число

%

абс. число

CD 3

61 ± 0,3

1,6 ± 0,4·109

46 ± 0,1

0,7 ± 0,2·109

< 0,05

CD 4

48 ± 0,4

1,3 ± 0,3·109

26 ± 0,3

0,3 ± 0,8·109

< 0,05

CD 8

15 ± 0,6

0,4 ± 0,2·109

35 ± 0,1

10 ± 0,2·109

< 0,05

CD 16

15 ± 0,4

0,5 ± 0,3·109

10 ± 0,3

0,1 ± 0,2·109

< 0,05

CD 20

8 ± 0,1

0,3 ± 0,2·109

19 ± 0,2

0,7 ± 0,2·109

< 0,05

CD4/CD8 (у.е.)

1,6 ± 0,3

2,0 ± 0,3

< 0,05

Примечание. * здесь и далее p - по сравнению с группой сравнения.

Из данных, представленных в табл. 2, видно, что в группе пациентов после спленэктомии зарегистрировано статистически достоверное снижение количества зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-киллеров. Вместе с тем отмечается повышение количества Т-цитотоксических лимфоцитов, В-лимфоцитов.

Результаты гуморального звена системы иммунитета, полученные в группе пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде, представлены в табл. 3.

Из данных, представленных в табл. 3, видно, что у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде, происходит статистически достоверное снижение по сравнению с группой сравнения, практически всех показателей. Необходимо отметить, что в этой группе оставалось в пределах физиологически нормальной величины количество IgA и ИЛ-4.

Таблица 3 Показатели гуморального звена иммунитета у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде (M ± m)

Название показателей

Группа сравнения (n = 30)

После спленэктомии (n = 50)

р

Ig A, г/л

1,3 ± 0,2

1,4 ± 0,9

> 0,05

Ig G, г/л

6,3 ± 0,4

4,6 ± 0,2

< 0,05

Ig M, г/л

2,4 ± 0,3

0,3 ± 0,3

< 0,05

Ig E, г/л

1,4 ± 0,3

5,3 ± 0,6

< 0,05

Общее количество комплемента, МЕ/мл

221 ± 0,4

115 ± 0,2

< 0,05

С3 - фракция комплемента, г/л

12,5 ± 0,6

0,65 ± 0,4

< 0,05

С4 - фракция комплемента, г/л

0,18 ± 0,6

0,6 ± 0,3

< 0,05

С1-инг. нг/мл

220,4 ± 0,4

120 ± 0,1

< 0,05

ЦИК, у. е.

30 ± 0,4

46,7 ± 0,1

< 0,05

ФНОα, пг/мл

3,69 ± 0,2

1,2 ± 0,2

< 0,05

ИЛ1β, пг/мл

5,94 ± 0,1

3,21 ± 0,2

< 0,05

ИЛ-6, пг/мл

1,48 ± 0,2

0,22 ± 0,1

< 0,05

ИЛ-8, пг/мл

26,1 ± 0,2

21,7 ± 0,03

< 0,05

ИЛ-4, пг/мл

0,81 ± 0,1

0,80 ± 0,1

> 0,05

ИЛ-10, пг/мл

29,8 ± 0,3

20,1 ± 0,2

< 0,05

ИЛ-2, пг/мл

0,08 ± 0,1

0,01 ± 0,1

< 0,05

ИНФγ, пг/мл

4,02 ± 0,1

2,01 ± 0,01

< 0,05

Фактор Н, нг/мл

32,8 ± 0,3

21,1 ± 0,2

< 0,05

ФИ,%

53,2 ± 11

31 ± 0,2

< 0,05

ФЧ, абс.

5,81 ± 0,1

1,23 ± 0,03

< 0,05

НСТ-сп.,%

25,1 ± 0,2

23,6 ± 0,1

< 0,05

НСТ-ст.,%

31,4 ± 0,3

21,3 ± 0,1

< 0,05

При анализе клинических данных установлено, что в группе пациентов с ранее удаленной селезенкой наблюдается развитие заболеваний, которые могут быть связанны с изменениями в иммунном статусе: склонность к частым «простудным заболеваниям» - в 42,1% наблюдений, вовлечение в патологический процесс легких и брон- хов - в 42%, склонность к гнойничковым заболеваниям кожи - в 12,2% случаев.

Результаты, полученные в группе пациентов после спленэктомии и введения полиоксидония внутримышечно в дозе 12 мг, представлены в табл. 4.

Таблица 4 Показатели клеточного звена системы иммунитета в группе пациентов после введения полиоксидония в дозе 12 мг (M ± m)

Показатель

Группа сравнения (n = 30)

После спленэктомии (n = 25)

p

%

абс. число

%

абс. число

CD 3

61 ± 0,3

1,6 ± 0,4·109

60 ± 0,1

1,4 ± 0,4·109

> 0,05

CD 4

48 ± 0,4

1,3 ± 0,3·109

47 ± 0,2

1,3 ± 0,5·109

> 0,05

CD 8

15 ± 0,6

0,4 ± 0,2·109

15 ± 0,4

0,4 ± 0,2·109

> 0,05

CD 16

15 ± 0,4

0,5 ± 0,3·109

13 ± 0,5

0,1 ± 0,1·109

< 0,05

CD 20

8 ± 0,1

0,3 ± 0,2·109

5 ± 0,3

0,3 ± 0,1·109

> 0,05

CD4/CD8 (у.е.)

1,6 ± 0,3

1,5 ± 0,4

> 0,05

Из данных, представленных в табл. 4, видно, что в группе пациентов, которым вводили полиоксидоний в 12 мг, отмечается восстановление таких показателей клеточного звена системы иммунитета, как зрелые Т-лимфоциты (CD3); Т-хелперы (CD4). Данные показатели в анализируемой группе соответствовали результатам, полученным в группе относительно здоровых людей, и физиологически нормальным величинам. В то же время в обеих исследуемых группах зарегистрировано снижение показателей лимфоцитов несущих рецепторы CD16 - натуральные киллеры.

Результаты, полученные в гуморальном звене системы иммунитета после применения полиоксидония, представлены в табл. 5.

Таблица 5 Показатели гуморального звена системы иммунитета в группе пациентов после введения полиоксидония в дозе 12 мг (M ± m)

Название показателей

(Группа сравнения (n = 30)

После спленэктомии (n = 25)

р

Ig A, г/л

1,3 ± 0,2

1,4 ± 0,9

> 0,05

Ig G, г/л

6,3 ± 0,4

4,6 ± 0,2

< 0,05

Ig M, г/л

2,4 ± 0,3

2,3 ± 0,3

> 0,05

Ig E, г/л

1,4 ± 0,3

1,3 ± 0,6

> 0,05

Общее количество комплемента, МЕ/мл

221 ± 0,4

115 ± 0,2

< 0,05

С3 - фракция комплемента, г/л

12,5 ± 0,6

0,65 ± 0,4

< 0,05

С4 - фракция комплемента, г/л

0,18 ± 0,6

0,6 ± 0,3

< 0,05

С1-инг. нг/мл

220,4 ± 0,4

120 ± 0,1

< 0,05

ЦИК, у. е.

30 ± 0,4

29,7 ± 0,1

> 0,05

ФНОα, пг/мл

3,69 ± 0,2

3,69 ± 0,2

> 0,05

ИЛ1β, пг/мл

5,94 ± 0,1

5,71 ± 0,2

> 0,05

ИЛ-6, пг/мл

1,48 ± 0,2

1,35 ± 0,1

> 0,05

ИЛ-8, пг/мл

26,1 ± 0,2

21,7 ± 0,03

< 0,05

ИЛ-4, пг/мл

0,81 ± 0,1

0,80 ± 0,1

> 0,05

ИЛ-10, пг/мл

29,8 ± 0,3

20,1 ± 0,2

< 0,05

ИЛ-2, пг/мл

0,08 ± 0,1

0,08 ± 0,1

> 0,05

ИНФγ, пг/мл

4,02 ± 0,1

4,01 ± 0,01

> 0,05

Фактор Н, нг/мл

32,8 ± 0,3

21,1 ± 0,2

< 0,05

ФИ,%

53,2 ± 11

31 ± 0,2

< 0,05

ФЧ, абс.

5,81 ± 0,1

1,23 ± 0,03

< 0,05

НСТ-сп.,%

25,1 ± 0,2

23,6 ± 0,1

< 0,05

НСТ-ст.,%

31,4 ± 0,3

21,3 ± 0,1

< 0,05

В результате изучения влияния полиоксидония на показатели гуморального звена системы иммунного статуса нами установлено, что по сравнению с данными, полученными в группе исследуемых без иммунизации, в основной группе зарегистрированы следующие изменения: количество IgE и IgM соответствовало нормальным величинам; нормализовалось количество ЦИК; количество ФНОα, ИЛ1β, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФγ стало соответствовать данным, полученным в группе сравнения здоровых людей. В то же время показатели IgG, общего количества комплемента, его С3- и С4-фракций, фактора Н, ФИ, ФЧ абс., НСТ-сп., НСТ-ст. не изменялись и оставались пониженными (см. табл. 5).

Таким образом, представленные результаты применения полиоксидония в дозе 12 мг после спленэктомии показывают, что применение того препарата физиологически оправдано. Это подтверждается восстановлением показателей клеточного звена системы иммунитета и основных показателей гуморального звена системы иммунитета, увеличивается секреция ИФНγ, продуцирующая Th1-клетками.

Для сравнения нами проведено изучение влияния имунофана в дозе 50 мкг на состояние клеточного и гуморального звена системы иммунитета в отдаленном послеоперационном периоде после спленэктомии.

Полученные данные клеточного звена системы иммунитета представлены в табл. 6

Таблица 6 Показатели клеточного звена системы иммунитета в группе пациентов после введения имунофана

Показатель

Результаты в группах

p*

(Группа сравнения (n = 30)

после спленэктомии (n = 25)

%

абс. число

%

абс. число

 

CD3

61 ± 0,3

1,6 ± 0,4∙109

56 ± 0,1

1,3 ± 0,4∙109

< 0,05

CD4

48 ± 0,4

1,3 ± 0,3∙109

45 ± 0,2

1,0 ± 0,5∙109

< 0,05

CD8

15 ± 0,6

0,4 ± 0,2∙109

15 ± 0,4

0,4 ± 0,2∙109

> 0,05

CD16

15 ± 0,4

0,5 ± 0,3∙109

13 ± 0,5

0,1 ± 0,1∙109

< 0,05

CD20

8 ± 0,1

0,3 ± 0,2∙109

5 ± 0,3

0,3 ± 0,1∙109

> 0,05

CD4/CD8

1,6 ± 0,3

1,3 ± 0,4

> 0,05

Как видно из данных, представленных в табл. 6, после введения имунофана изменений в клеточном звене системы иммунитета не получено, все показатели после введения этого препарата соответствовали данным, полученным в группе обследуемых без введения имунофана. Отсюда следует, что введение имунофана после спленэктомии не приводит к коррекции иммунологических нарушений в клеточном звене системы иммунитета.

Результаты изучения гуморального звена системы иммуннитета после введения имунофана представлены в табл. 7.

Таблица 7 Показатели гуморального звена иммунитета в группе пациентов после введения имунофана (M ± m)

Название показателей

Группа сравнения (n = 30)

После спленэктомии (n = 25)

р

Ig A, г/л

1,3 ± 0,2

1,4 ± 0,9

> 0,05

Ig G, г/л

6,3 ± 0,4

6,2 ± 0,2

> 0,05

Ig M, г/л

2,4 ± 0,3

0,3 ± 0,3

< 0,05

Ig E, г/л

1,4 ± 0,3

5,3 ± 0,6

< 0,05

Общее количество комплемента, МЕ/мл

221 ± 0,4

200 ± 0,2

> 0,05

С3 - фракция комплемента, г/л

12,5 ± 0,6

11,5 ± 0,4

> 0,05

С4 - фракция комплемента, г/л

0,18 ± 0,6

0,16 ± 0,3

> 0,05

С1-инг. нг/мл

220,4 ± 0,4

120 ± 0,1

< 0,05

ЦИК, у. е.

30 ± 0,4

29,7 ± 0,1

> 0,05

ФНОα, пг/мл

3,69 ± 0,2

1,2 ± 0,2

< 0,05

ИЛ1β, пг/мл

5,94 ± 0,1

3,21 ± 0,2

< 0,05

ИЛ-6, пг/мл

1,48 ± 0,2

0,22 ± 0,1

< 0,05

ИЛ-8, пг/мл

26,1 ± 0,2

21,7 ± 0,03

< 0,05

ИЛ-4, пг/мл

0,81 ± 0,1

0,80 ± 0,1

> 0,05

ИЛ-10, пг/мл

29,8 ± 0,3

20,1 ± 0,2

< 0,05

ИЛ-2, пг/мл

0,08 ± 0,1

0,01 ± 0,1

< 0,05

ИНФγ, пг/мл

4,02 ± 0,1

2,01 ± 0,01

< 0,05

Фактор Н, нг/мл

32,8 ± 0,3

21,1 ± 0,2

< 0,05

ФИ,%

53,2 ± 11

31 ± 0,2

< 0,05

ФЧ, абс.

5,81 ± 0,1

1,23 ± 0,03

< 0,05

НСТ-сп.,%

25,1 ± 0,2

23,6 ± 0,1

< 0,05

НСТ-ст.,%

31,4 ± 0,3

21,3 ± 0,1

< 0,05

Из данных табл. 7 видно, что у пациентов после спленэктомии и введения имунофана отмечается восстановление таких показателей, как IgG, общего количества комплимента, его С3- и С4-фракций. Все остальные показатели не изменялись и соответствовали данным, полученным в группе пациентов после спленэктомии. Из этого можно сделать заключение, что введение имунофана не приводит к коррекции иммунологических нарушений у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде.

Таким образом, проведенные исследования показывают, что спленэктомия, выполненная по поводу травмы, в отдаленном послеоперационном периоде приводит к следующим изменениям в иммунном статусе организма: в клеточном звене к снижению количества зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-киллеров. Вместе с тем отмечается повышение количества Т-цитотоксических лимфоцитов, В-лимфоцитов. В гуморальном звене: происходит снижение всех исследуемых показателей, за исключением IgA и ИЛ-4. С целью коррекции этих изменений физиологически оправдано применение полиоксидония в дозе 12 мг.

Выводы

  1. Спленэктомия, выполненная по поводу травмы селезенки, в отдаленном послеоперационном периоде приводит к изменениям как в клеточном, так и в гуморальном звене системы иммунитета.
  2. С целью коррекции иммунологических осложнений после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде следует применять полиоксидоний в дозе 12 мг.

Рецензенты:

  • Александров Д.А., д.м.н., профессор кафедры хирургических болезней и онкологии ФПК и ППС ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского Минздравсоцразвития РФ», г. Саратов;
  • Пучиньян Д.М., д.м.н., профессор, заместитель директора по научной работе ФГБУ «Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии» Минздравсоцразвития России, г. Саратов.

Работа поступила в редакцию 09.04.2012.