Известно, что селезенка не является жизненно важным органом. Однако она относится к периферическим лимфоидным тканям. В ней концентрируются супрессорные, хелперные и часть эффекторных клеток, здесь же происходит процесс активного антителообразования и продукция гуморальных медиаторов [1]. В селезенке содержится приблизительно 25% лимфоцитов типа Т и около 60% лимфоцитов типа В [1]. В ней протекают оба этапа дифференцировки антителообразующих клеток из костномозговых предшественников, в то время как для Т-лимфоцитов антигеннезависимый этап дифференцировки из костномозговых предшественников осуществляется в тимусе, а антигеннезависимый - в селезенке [6, 7, 8]. В селезенке осуществляется синтез IgM, IgC, вырабатывается С3- и С4-фрагментов комплемента [9]. Кроме того, в этом органе происходит синтез компонентов комплемента, которые включаются в альтернативный путь его активации [6]. Также в селезенке содержится большое количество пропердина [7]. Кроме того, селезенке принадлежит активное участие в процессе опсонизации - изменения клеточной поверхности патогена или других частиц, что приводит к захвату опсонированных клеток фагоцитами. По мнению процесс опсонизации связан с наличием иммуноглобулинов, причем из них хорошо опсонирует только IgG. В системе комплемента эту функцию выполняет практически один компонент - С3b, который присутствует в этом органе [8]. В настоящее время травма этого органа занимает одно из ведущих мест в хирургии, при этом наиболее часто выполняют спленэктомию [5]. Вместе с тем известно, что удаление этого органа приводит к развитию различных осложнений, связанных с иммунологическими нарушениями [3, 4]. С целью коррекции этих осложнений предложено применять иммуностимуляторы [4].
Цель исследования: изучить влияние полиоксидония и имунофана для коррекции иммунологических осложнений после спленэктомии.
Материалы и методы исследования
В работе проведен анализ изменений в иммунном статусе 50 пациентов с закрытыми травмами селезенки. Распределение пациентов по полу и возрасту представлено в табл. 1.
Таблица 1 Пациенты с травмой селезенки
|
Возраст, лет |
Мужчины |
Женщины |
|
21-30 |
13 |
6 |
|
31-40 |
10 |
8 |
|
41-50 |
9 |
4 |
|
Всего: |
32 |
18 |
Группу сравнения составили 30 относительно здоровых донора-добровольца того же возраста и пола. Сроки после операции составили от 5 до 9 лет.
При изучении иммунного ответа организма определялись следующие показатели: субпопуляции Т- и В-лимфоцитов: количество в периферической крови лимфоцитов, несущих медиаторы CD3 (зрелые Т-лимфоциты); CD4 (Т-хелперы); CD8 (цитотоксические Т-клетки); CD16 (натуральные киллеры); CD20 (В-клетки), а также соотношение CD4/CD8. Изучение названных показателей выполнялось с помощью проточной цитофлюрометрии с моноклональными антителами.
Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводилось турбодидометрическим методом. Для этого исследования применяли 3,5%-й раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 Д (США) в фосфатном буфере (pH 8,4). Результаты учитывали на спектрометре СФ-46 при длине волны 450 нм и выражали в условных единицах. Общее содержание IgG, M, A - по методу простой радиальной иммуннодиффузии по Mancini и соавторам, а также IgE, определяемый по методу ИФА. Содержание С3-, С4-компонентов комплемента, ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, интерферона-γ (ИНФγ), ИЛ-4, ИЛ-10 в плазме крови определяли с помощью набора реагентов ProCon (ООО «Протеиновый контур» г. Санкт-Петербург. Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов периферической крови оценивалось по фагоцитарному индексу (ФИ) и фагоцитарному числу (ФЧ). Активность кислородсодержащих систем нейтрофилов оценивалась по реакции восстановления нитросинего тетразолия спонтанного (НСТ-сп.) и стимулированного (НСИ-ст.) зимозаном. Полиоксидоний применялся ежедневно внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки, имунофан в дозе 50 мкг, оба препарата общим курсом 9 инъекций.
Статистическая обработка полученных данных проводилась при помощи непараметрического метода U-критерия теста Mann - Whitney (пакет программ Statistica 6.0.). При этом были вычислены основные вероятностные характеристики случайных величин: среднее значение; нижний (25%) и верхний (75%) квартили, которые имели достоверность не менее 95% (p-значение < 0,05).
Результаты исследования и их обсуждение
Состояние клеточного звена системы иммунитета у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде представлено в табл. 2.
Таблица 2 Показатели клеточного звена иммунитета у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде (M ± m)
|
Показатель |
(Группа сравнения (n = 30) |
После спленэктомии (n = 50) |
p |
||
|
% |
абс. число |
% |
абс. число |
||
|
CD 3 |
61 ± 0,3 |
1,6 ± 0,4·109/л |
46 ± 0,1 |
0,7 ± 0,2·109/л |
< 0,05 |
|
CD 4 |
48 ± 0,4 |
1,3 ± 0,3·109/л |
26 ± 0,3 |
0,3 ± 0,8·109/л |
< 0,05 |
|
CD 8 |
15 ± 0,6 |
0,4 ± 0,2·109/л |
35 ± 0,1 |
10 ± 0,2·109/л |
< 0,05 |
|
CD 16 |
15 ± 0,4 |
0,5 ± 0,3·109/л |
10 ± 0,3 |
0,1 ± 0,2·109/л |
< 0,05 |
|
CD 20 |
8 ± 0,1 |
0,3 ± 0,2·109/л |
19 ± 0,2 |
0,7 ± 0,2·109/л |
< 0,05 |
|
CD4/CD8 (у.е.) |
1,6 ± 0,3 |
2,0 ± 0,3 |
< 0,05 |
||
Примечание. * здесь и далее p - по сравнению с группой сравнения.
Из данных, представленных в табл. 2, видно, что в группе пациентов после спленэктомии зарегистрировано статистически достоверное снижение количества зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-киллеров. Вместе с тем отмечается повышение количества Т-цитотоксических лимфоцитов, В-лимфоцитов.
Результаты гуморального звена системы иммунитета, полученные в группе пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде, представлены в табл. 3.
Из данных, представленных в табл. 3, видно, что у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде, происходит статистически достоверное снижение по сравнению с группой сравнения, практически всех показателей. Необходимо отметить, что в этой группе оставалось в пределах физиологически нормальной величины количество IgA и ИЛ-4.
Таблица 3 Показатели гуморального звена иммунитета у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде (M ± m)
|
Название показателей |
Группа сравнения (n = 30) |
После спленэктомии (n = 50) |
р |
|
Ig A, г/л |
1,3 ± 0,2 |
1,4 ± 0,9 |
> 0,05 |
|
Ig G, г/л |
6,3 ± 0,4 |
4,6 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
Ig M, г/л |
2,4 ± 0,3 |
0,3 ± 0,3 |
< 0,05 |
|
Ig E, г/л |
1,4 ± 0,3 |
5,3 ± 0,6 |
< 0,05 |
|
Общее количество комплемента, МЕ/мл |
221 ± 0,4 |
115 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
С3 - фракция комплемента, г/л |
12,5 ± 0,6 |
0,65 ± 0,4 |
< 0,05 |
|
С4 - фракция комплемента, г/л |
0,18 ± 0,6 |
0,6 ± 0,3 |
< 0,05 |
|
С1-инг. нг/мл |
220,4 ± 0,4 |
120 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ЦИК, у. е. |
30 ± 0,4 |
46,7 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ФНОα, пг/мл |
3,69 ± 0,2 |
1,2 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ИЛ1β, пг/мл |
5,94 ± 0,1 |
3,21 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ИЛ-6, пг/мл |
1,48 ± 0,2 |
0,22 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ИЛ-8, пг/мл |
26,1 ± 0,2 |
21,7 ± 0,03 |
< 0,05 |
|
ИЛ-4, пг/мл |
0,81 ± 0,1 |
0,80 ± 0,1 |
> 0,05 |
|
ИЛ-10, пг/мл |
29,8 ± 0,3 |
20,1 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ИЛ-2, пг/мл |
0,08 ± 0,1 |
0,01 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ИНФγ, пг/мл |
4,02 ± 0,1 |
2,01 ± 0,01 |
< 0,05 |
|
Фактор Н, нг/мл |
32,8 ± 0,3 |
21,1 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ФИ,% |
53,2 ± 11 |
31 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ФЧ, абс. |
5,81 ± 0,1 |
1,23 ± 0,03 |
< 0,05 |
|
НСТ-сп.,% |
25,1 ± 0,2 |
23,6 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
НСТ-ст.,% |
31,4 ± 0,3 |
21,3 ± 0,1 |
< 0,05 |
При анализе клинических данных установлено, что в группе пациентов с ранее удаленной селезенкой наблюдается развитие заболеваний, которые могут быть связанны с изменениями в иммунном статусе: склонность к частым «простудным заболеваниям» - в 42,1% наблюдений, вовлечение в патологический процесс легких и брон- хов - в 42%, склонность к гнойничковым заболеваниям кожи - в 12,2% случаев.
Результаты, полученные в группе пациентов после спленэктомии и введения полиоксидония внутримышечно в дозе 12 мг, представлены в табл. 4.
Таблица 4 Показатели клеточного звена системы иммунитета в группе пациентов после введения полиоксидония в дозе 12 мг (M ± m)
|
Показатель |
Группа сравнения (n = 30) |
После спленэктомии (n = 25) |
p |
||
|
% |
абс. число |
% |
абс. число |
||
|
CD 3 |
61 ± 0,3 |
1,6 ± 0,4·109/л |
60 ± 0,1 |
1,4 ± 0,4·109/л |
> 0,05 |
|
CD 4 |
48 ± 0,4 |
1,3 ± 0,3·109/л |
47 ± 0,2 |
1,3 ± 0,5·109/л |
> 0,05 |
|
CD 8 |
15 ± 0,6 |
0,4 ± 0,2·109/л |
15 ± 0,4 |
0,4 ± 0,2·109/л |
> 0,05 |
|
CD 16 |
15 ± 0,4 |
0,5 ± 0,3·109/л |
13 ± 0,5 |
0,1 ± 0,1·109/л |
< 0,05 |
|
CD 20 |
8 ± 0,1 |
0,3 ± 0,2·109/л |
5 ± 0,3 |
0,3 ± 0,1·109/л |
> 0,05 |
|
CD4/CD8 (у.е.) |
1,6 ± 0,3 |
1,5 ± 0,4 |
> 0,05 |
||
Из данных, представленных в табл. 4, видно, что в группе пациентов, которым вводили полиоксидоний в 12 мг, отмечается восстановление таких показателей клеточного звена системы иммунитета, как зрелые Т-лимфоциты (CD3); Т-хелперы (CD4). Данные показатели в анализируемой группе соответствовали результатам, полученным в группе относительно здоровых людей, и физиологически нормальным величинам. В то же время в обеих исследуемых группах зарегистрировано снижение показателей лимфоцитов несущих рецепторы CD16 - натуральные киллеры.
Результаты, полученные в гуморальном звене системы иммунитета после применения полиоксидония, представлены в табл. 5.
Таблица 5 Показатели гуморального звена системы иммунитета в группе пациентов после введения полиоксидония в дозе 12 мг (M ± m)
|
Название показателей |
(Группа сравнения (n = 30) |
После спленэктомии (n = 25) |
р |
|
Ig A, г/л |
1,3 ± 0,2 |
1,4 ± 0,9 |
> 0,05 |
|
Ig G, г/л |
6,3 ± 0,4 |
4,6 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
Ig M, г/л |
2,4 ± 0,3 |
2,3 ± 0,3 |
> 0,05 |
|
Ig E, г/л |
1,4 ± 0,3 |
1,3 ± 0,6 |
> 0,05 |
|
Общее количество комплемента, МЕ/мл |
221 ± 0,4 |
115 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
С3 - фракция комплемента, г/л |
12,5 ± 0,6 |
0,65 ± 0,4 |
< 0,05 |
|
С4 - фракция комплемента, г/л |
0,18 ± 0,6 |
0,6 ± 0,3 |
< 0,05 |
|
С1-инг. нг/мл |
220,4 ± 0,4 |
120 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ЦИК, у. е. |
30 ± 0,4 |
29,7 ± 0,1 |
> 0,05 |
|
ФНОα, пг/мл |
3,69 ± 0,2 |
3,69 ± 0,2 |
> 0,05 |
|
ИЛ1β, пг/мл |
5,94 ± 0,1 |
5,71 ± 0,2 |
> 0,05 |
|
ИЛ-6, пг/мл |
1,48 ± 0,2 |
1,35 ± 0,1 |
> 0,05 |
|
ИЛ-8, пг/мл |
26,1 ± 0,2 |
21,7 ± 0,03 |
< 0,05 |
|
ИЛ-4, пг/мл |
0,81 ± 0,1 |
0,80 ± 0,1 |
> 0,05 |
|
ИЛ-10, пг/мл |
29,8 ± 0,3 |
20,1 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ИЛ-2, пг/мл |
0,08 ± 0,1 |
0,08 ± 0,1 |
> 0,05 |
|
ИНФγ, пг/мл |
4,02 ± 0,1 |
4,01 ± 0,01 |
> 0,05 |
|
Фактор Н, нг/мл |
32,8 ± 0,3 |
21,1 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ФИ,% |
53,2 ± 11 |
31 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ФЧ, абс. |
5,81 ± 0,1 |
1,23 ± 0,03 |
< 0,05 |
|
НСТ-сп.,% |
25,1 ± 0,2 |
23,6 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
НСТ-ст.,% |
31,4 ± 0,3 |
21,3 ± 0,1 |
< 0,05 |
В результате изучения влияния полиоксидония на показатели гуморального звена системы иммунного статуса нами установлено, что по сравнению с данными, полученными в группе исследуемых без иммунизации, в основной группе зарегистрированы следующие изменения: количество IgE и IgM соответствовало нормальным величинам; нормализовалось количество ЦИК; количество ФНОα, ИЛ1β, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФγ стало соответствовать данным, полученным в группе сравнения здоровых людей. В то же время показатели IgG, общего количества комплемента, его С3- и С4-фракций, фактора Н, ФИ, ФЧ абс., НСТ-сп., НСТ-ст. не изменялись и оставались пониженными (см. табл. 5).
Таким образом, представленные результаты применения полиоксидония в дозе 12 мг после спленэктомии показывают, что применение того препарата физиологически оправдано. Это подтверждается восстановлением показателей клеточного звена системы иммунитета и основных показателей гуморального звена системы иммунитета, увеличивается секреция ИФНγ, продуцирующая Th1-клетками.
Для сравнения нами проведено изучение влияния имунофана в дозе 50 мкг на состояние клеточного и гуморального звена системы иммунитета в отдаленном послеоперационном периоде после спленэктомии.
Полученные данные клеточного звена системы иммунитета представлены в табл. 6
Таблица 6 Показатели клеточного звена системы иммунитета в группе пациентов после введения имунофана
|
Показатель |
Результаты в группах |
p* |
|||
|
(Группа сравнения (n = 30) |
после спленэктомии (n = 25) |
||||
|
% |
абс. число |
% |
абс. число |
|
|
|
CD3 |
61 ± 0,3 |
1,6 ± 0,4∙109/л |
56 ± 0,1 |
1,3 ± 0,4∙109/л |
< 0,05 |
|
CD4 |
48 ± 0,4 |
1,3 ± 0,3∙109/л |
45 ± 0,2 |
1,0 ± 0,5∙109/л |
< 0,05 |
|
CD8 |
15 ± 0,6 |
0,4 ± 0,2∙109/л |
15 ± 0,4 |
0,4 ± 0,2∙109/л |
> 0,05 |
|
CD16 |
15 ± 0,4 |
0,5 ± 0,3∙109/л |
13 ± 0,5 |
0,1 ± 0,1∙109/л |
< 0,05 |
|
CD20 |
8 ± 0,1 |
0,3 ± 0,2∙109/л |
5 ± 0,3 |
0,3 ± 0,1∙109/л |
> 0,05 |
|
CD4/CD8 |
1,6 ± 0,3 |
1,3 ± 0,4 |
> 0,05 |
||
Как видно из данных, представленных в табл. 6, после введения имунофана изменений в клеточном звене системы иммунитета не получено, все показатели после введения этого препарата соответствовали данным, полученным в группе обследуемых без введения имунофана. Отсюда следует, что введение имунофана после спленэктомии не приводит к коррекции иммунологических нарушений в клеточном звене системы иммунитета.
Результаты изучения гуморального звена системы иммуннитета после введения имунофана представлены в табл. 7.
Таблица 7 Показатели гуморального звена иммунитета в группе пациентов после введения имунофана (M ± m)
|
Название показателей |
Группа сравнения (n = 30) |
После спленэктомии (n = 25) |
р |
|
Ig A, г/л |
1,3 ± 0,2 |
1,4 ± 0,9 |
> 0,05 |
|
Ig G, г/л |
6,3 ± 0,4 |
6,2 ± 0,2 |
> 0,05 |
|
Ig M, г/л |
2,4 ± 0,3 |
0,3 ± 0,3 |
< 0,05 |
|
Ig E, г/л |
1,4 ± 0,3 |
5,3 ± 0,6 |
< 0,05 |
|
Общее количество комплемента, МЕ/мл |
221 ± 0,4 |
200 ± 0,2 |
> 0,05 |
|
С3 - фракция комплемента, г/л |
12,5 ± 0,6 |
11,5 ± 0,4 |
> 0,05 |
|
С4 - фракция комплемента, г/л |
0,18 ± 0,6 |
0,16 ± 0,3 |
> 0,05 |
|
С1-инг. нг/мл |
220,4 ± 0,4 |
120 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ЦИК, у. е. |
30 ± 0,4 |
29,7 ± 0,1 |
> 0,05 |
|
ФНОα, пг/мл |
3,69 ± 0,2 |
1,2 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ИЛ1β, пг/мл |
5,94 ± 0,1 |
3,21 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ИЛ-6, пг/мл |
1,48 ± 0,2 |
0,22 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ИЛ-8, пг/мл |
26,1 ± 0,2 |
21,7 ± 0,03 |
< 0,05 |
|
ИЛ-4, пг/мл |
0,81 ± 0,1 |
0,80 ± 0,1 |
> 0,05 |
|
ИЛ-10, пг/мл |
29,8 ± 0,3 |
20,1 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ИЛ-2, пг/мл |
0,08 ± 0,1 |
0,01 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
ИНФγ, пг/мл |
4,02 ± 0,1 |
2,01 ± 0,01 |
< 0,05 |
|
Фактор Н, нг/мл |
32,8 ± 0,3 |
21,1 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ФИ,% |
53,2 ± 11 |
31 ± 0,2 |
< 0,05 |
|
ФЧ, абс. |
5,81 ± 0,1 |
1,23 ± 0,03 |
< 0,05 |
|
НСТ-сп.,% |
25,1 ± 0,2 |
23,6 ± 0,1 |
< 0,05 |
|
НСТ-ст.,% |
31,4 ± 0,3 |
21,3 ± 0,1 |
< 0,05 |
Из данных табл. 7 видно, что у пациентов после спленэктомии и введения имунофана отмечается восстановление таких показателей, как IgG, общего количества комплимента, его С3- и С4-фракций. Все остальные показатели не изменялись и соответствовали данным, полученным в группе пациентов после спленэктомии. Из этого можно сделать заключение, что введение имунофана не приводит к коррекции иммунологических нарушений у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде.
Таким образом, проведенные исследования показывают, что спленэктомия, выполненная по поводу травмы, в отдаленном послеоперационном периоде приводит к следующим изменениям в иммунном статусе организма: в клеточном звене к снижению количества зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-киллеров. Вместе с тем отмечается повышение количества Т-цитотоксических лимфоцитов, В-лимфоцитов. В гуморальном звене: происходит снижение всех исследуемых показателей, за исключением IgA и ИЛ-4. С целью коррекции этих изменений физиологически оправдано применение полиоксидония в дозе 12 мг.
Выводы
-
Спленэктомия, выполненная по поводу травмы селезенки, в отдаленном послеоперационном периоде приводит к изменениям как в клеточном, так и в гуморальном звене системы иммунитета.
-
С целью коррекции иммунологических осложнений после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде следует применять полиоксидоний в дозе 12 мг.
Рецензенты:
-
Александров Д.А., д.м.н., профессор кафедры хирургических болезней и онкологии ФПК и ППС ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского Минздравсоцразвития РФ», г. Саратов;
-
Пучиньян Д.М., д.м.н., профессор, заместитель директора по научной работе ФГБУ «Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии» Минздравсоцразвития России, г. Саратов.
Работа поступила в редакцию 09.04.2012.