Клинической практикой востребованы инновационные способы лабораторной диагностики социально значимых заболеваний, в первую очередь таких, как ишемическая болезнь сердца и сахарный диабет.
Одним из наиболее востребованных методов выявления повышенного уровня глюкозы крови, являющегося маркерным для метаболического синдрома и сахарного диабета является определение гликозилированного гемоглобина. Гликозилированный гемоглобин образуется в результате медленной неферментативной реакции между гемоглобином А, содержащимся в эритроцитах и глюкозой крови и характеризует средний уровень глюкозы на протяжении в среднем 60 суток.
Унифицированный метод определения суммарной фракции гликозилированного гемоглобина (Glycohemoglobin HbA1-Test) на основе катион-обменных смол разработан и успешно реализован компанией «HUMAN» (Германия). Принцип метода основан на образовании смеси цельной крови с лизирующим раствором, содержащим детергент и борат-ионы в высокой концентрации. В процессе гемолиза достигается устранение лабильных Шиффовых оснований. Затем гемолизат в течение 5 минут смешивается со слабосвязанной катион-обменной смолой. За это время связывается фракция НвА0. Для отделения смолы от супернатанта, в котором содержится НвА1, используется специальный сепаратор. Процентное содержание гликозилированного гемоглобина от общего содержания гликозилированного гемоглобина в крови рассчитывается после измерения оптической плотности гликогемоглобиновой фракции и общего гемоглобина при длине волны 415 нм или Нg 405 нм, относительно стандартного раствора гликогемоглобина.
При всех преимуществах метода (простота, надёжность, воспроизводимость), катион-обменный экспресс-метод HbA1-Test не позволяет выявлять стабильную форму гликозилированного гемоглобина (НbА1с). Эту проблему успешно решает БИО-ЛА-ТЕСТ компании «LACHEMA» (Чехия), принцип которого основан на том, что стабильная форма гликозилированного гемоглобина содержит 1-дезокси-1-(N-валил)-фруктозу, которая дегидратируется фосфорной кислотой с образованием цветного комплекса, имеющего абсорбционный максимум при 443 нм. Определению не мешает ни лабильная форма гликогемоглобина, ни фетальный гемоглобин.
Учитывая высокую потребность практического здравоохранения в недорогих и, в то же время, комплаентных и надёжно воспроизводимых диагностических экспресс-методах, нами предложен индексирующий коэффициент (kS) пересчёта количественного результата суммарных фракций гликозилированного гемоглобина НbА1 в стабильную фракцию гликозилированного гемоглобина НbА1с.
Для оценки надёжности метода проведено сравнительное определение стабильной фракции гликогемоглобина (НвА1с) методом фирмы «ЛАХЕМА» и фракции НвА1 фирмы«Human» у 40 больных сахарным диабетом 2 типа, 20 больных хронической ишемической болезнью сердца и 15 признанных здоровыми лиц, в возрасте от 35 лет до 70 лет. Статистическая значимость и воспроизводимость результатов исследования проверялась методами непараметрической
статистики.
В результате исследования установлено: стабильная фракция гликозилированного гемоглобина НbА1с может быть статистически значимо воспроизведена путем индексации суммарной фракции гликозилированного гемоглобина НbА1; первичная воспроизводимость результатов составляет не менее 95,5% для лиц, признанных здоровыми, больных хронической ишемической болезнью сердца и больных сахарным диабетом 2 типа; первичная воспроизводимость результатов составляет не менее 95,5% для лиц, в возрастном диапазоне 35-70 лет.
Так, у лиц, признанных здоровыми, расчётное значение kS составило 1,273 ± 0,033 (Wald-Wolfowitz runs test, р = 0,014), у больных хронической ишемической болезнью сердца расчётное значение kS составило 1,273 ± 0,049 (Wald-Wolfowitz runs test, р = 0,029), и больных сахарным диабетом 2 типа расчётное значение kS составило 1,273 ± 0,036 (Wald-Wolfowitz runs test, р = 0,021). Это позволяет рассматривать показатель kS как константный, применимый для исследований как у больных, так и здоровых лиц.
Полученные результаты свидетельствуют, что в организме взрослого человека соотношение суммарных фракций гликозилированного гемоглобина НbА1 и стабильной фракции гликозилированного гемоглобина НbА1с является константным, и не зависит от возраста, половой принадлежности, наличия ишемической болезни и сахарного диабета. Расчётное константное значение kS имеет значение 1,27.
Таким образом, полученные в результате исследования результаты позволяют оптимизировать технологию определения НbА1с. Для этого достаточно катион-обменным методом количественно определить суммарные фракции гликозилированного гемоглобина НbА1, и проиндексировать полученное значение на 1,27.
Предлагаемый метод надёжен, прост в выполнении и может быть использован в поликлиниках, стационарах терапевтического, реанимационного и хирургического профиля как скрининговый метод для выявления нарушений углеводного обмена.
Библиографическая ссылка
Остапенко В.А., Фирстова Л.П., Елисеева И.П., Елисеева Л.Н., Николаев Н.А., Колбина М.В., Елисеев П.Н., Фирстов Д.А. ОПТИМИЗАЦИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТАБИЛЬНОЙ ФРАКЦИИ ГЛИКОЗИЛИРОВАННОГО ГЕМОГЛОБИНА HbA1c МЕТОДОМ ИНДЕКСАЦИИ СУММАРНОЙ ФРАКЦИИ ГЛИКОЗИЛИРОВАННОГО ГЕМОГЛОБИНА HbA1 // Фундаментальные исследования. – 2008. – № 6. – С. 116-117;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=3265 (дата обращения: 23.11.2024).