Клинической практикой востребованы инновационные способы лабораторной диагностики социально значимых заболеваний, в первую очередь таких, как ишемическая болезнь сердца и сахарный диабет.
Одним из наиболее востребованных методов выявления повышенного уровня глюкозы крови, являющегося маркерным для метаболического синдрома и сахарного диабета является определение гликозилированного гемоглобина. Гликозилированный гемоглобин образуется в результате медленной неферментативной реакции между гемоглобином А, содержащимся в эритроцитах и глюкозой крови и характеризует средний уровень глюкозы на протяжении в среднем 60 суток.
Унифицированный метод определения суммарной фракции гликозилированного гемоглобина (Glycohemoglobin HbA1-Test) на основе катион-обменных смол разработан и успешно реализован компанией «HUMAN» (Германия). Принцип метода основан на образовании смеси цельной крови с лизирующим раствором, содержащим детергент и борат-ионы в высокой концентрации. В процессе гемолиза достигается устранение лабильных Шиффовых оснований. Затем гемолизат в течение 5 минут смешивается со слабосвязанной катион-обменной смолой. За это время связывается фракция НвА0. Для отделения смолы от супернатанта, в котором содержится НвА1, используется специальный сепаратор. Процентное содержание гликозилированного гемоглобина от общего содержания гликозилированного гемоглобина в крови рассчитывается после измерения оптической плотности гликогемоглобиновой фракции и общего гемоглобина при длине волны 415 нм или Нg 405 нм, относительно стандартного раствора гликогемоглобина.
При всех преимуществах метода (простота, надёжность, воспроизводимость), катион-обменный экспресс-метод HbA1-Test не позволяет выявлять стабильную форму гликозилированного гемоглобина (НbА1с). Эту проблему успешно решает БИО-ЛА-ТЕСТ компании «LACHEMA» (Чехия), принцип которого основан на том, что стабильная форма гликозилированного гемоглобина содержит 1-дезокси-1-(N-валил)-фруктозу, которая дегидратируется фосфорной кислотой с образованием цветного комплекса, имеющего абсорбционный максимум при 443 нм. Определению не мешает ни лабильная форма гликогемоглобина, ни фетальный гемоглобин.
Учитывая высокую потребность практического здравоохранения в недорогих и, в то же время, комплаентных и надёжно воспроизводимых диагностических экспресс-методах, нами предложен индексирующий коэффициент (kS) пересчёта количественного результата суммарных фракций гликозилированного гемоглобина НbА1 в стабильную фракцию гликозилированного гемоглобина НbА1с.
Для оценки надёжности метода проведено сравнительное определение стабильной фракции гликогемоглобина (НвА1с) методом фирмы «ЛАХЕМА» и фракции НвА1 фирмы«Human» у 40 больных сахарным диабетом 2 типа, 20 больных хронической ишемической болезнью сердца и 15 признанных здоровыми лиц, в возрасте от 35 лет до 70 лет. Статистическая значимость и воспроизводимость результатов исследования проверялась методами непараметрической
статистики.
В результате исследования установлено: стабильная фракция гликозилированного гемоглобина НbА1с может быть статистически значимо воспроизведена путем индексации суммарной фракции гликозилированного гемоглобина НbА1; первичная воспроизводимость результатов составляет не менее 95,5% для лиц, признанных здоровыми, больных хронической ишемической болезнью сердца и больных сахарным диабетом 2 типа; первичная воспроизводимость результатов составляет не менее 95,5% для лиц, в возрастном диапазоне 35-70 лет.
Так, у лиц, признанных здоровыми, расчётное значение kS составило 1,273 ± 0,033 (Wald-Wolfowitz runs test, р = 0,014), у больных хронической ишемической болезнью сердца расчётное значение kS составило 1,273 ± 0,049 (Wald-Wolfowitz runs test, р = 0,029), и больных сахарным диабетом 2 типа расчётное значение kS составило 1,273 ± 0,036 (Wald-Wolfowitz runs test, р = 0,021). Это позволяет рассматривать показатель kS как константный, применимый для исследований как у больных, так и здоровых лиц.
Полученные результаты свидетельствуют, что в организме взрослого человека соотношение суммарных фракций гликозилированного гемоглобина НbА1 и стабильной фракции гликозилированного гемоглобина НbА1с является константным, и не зависит от возраста, половой принадлежности, наличия ишемической болезни и сахарного диабета. Расчётное константное значение kS имеет значение 1,27.
Таким образом, полученные в результате исследования результаты позволяют оптимизировать технологию определения НbА1с. Для этого достаточно катион-обменным методом количественно определить суммарные фракции гликозилированного гемоглобина НbА1, и проиндексировать полученное значение на 1,27.
Предлагаемый метод надёжен, прост в выполнении и может быть использован в поликлиниках, стационарах терапевтического, реанимационного и хирургического профиля как скрининговый метод для выявления нарушений углеводного обмена.