Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Жидкова Ю.Ю. 1 Пеньевская Н.А. 1 Воронков А.В. 2 Зайцев В.П. 2 Ушакова Л.С. 2 Леонова В.Н. 2 Мезенова Т.Д. 2

---

1 ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия»

2 Пятигорский медико-фармацевтический институт

Разработан композитный гель противорубцового действия, действующими компонентами которого являются меглумина акридонацетат (циклоферон), глицирам и масло шиповника. Идентификацию и количественное определение глицирама в геле противорубцового действия проводили методом тонкослойной хроматографии с последующей денситометрической обработкой хроматограмм (методом абсолютной калибровки по градуировочному графику зависимости «масса вещества – площадь пика» (линейная аппроксимация). Проведена валидация разработанной методики. Установлены параметры линейности (градуировочный график описывается уравнением S = (7,5 ± 0,8)∙103 m, коэффициент корреляции, правильности (определяли методом «введено-найдено», средний процент открываемости – 102,8 %) и сходимости разработанной методики (оценивали по результатам повторных определений содержания глицирама в геле). Проведено определение хроматографических характеристик. Полученные результаты свидетельствуют о достаточной специфичности, высокой чувствительности и эффективности хроматографической методики.

Статья в формате PDF

401 KB

гель

меглумина акридонацетат (циклоферон)

глицирам

масло шиповника

1. Циклоферон, раствор для внутреннего и внутримышечного введения 125 мг/мл. Изменение № 2: ФСП 42-0320-1700-06. – Введ. 2010. – 05.03. – ООО НТФФ «Полисан», Россия, 2010 . – 10 с.

2. Циклоферон, линимент 5 %: ФСП 42-1702-07. – Введ. 2008. – 14.03. – ООО НТФФ «Полисан», Россия, 2008. – 10 с.

3. Качественный и количественный анализ сырья и препаратов солодки / М.В. Егоров [и др.] // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. – 2005. – № 1. – С. 175–180.

4. Масло шиповника: ФС 42--2067-95. – Введ. 1995. – 08.11. – МЗ РФ Фармакопейный гос. комитет, Россия, 1995. – 6 с.

5. Красиков В.Д. Основы планарной хроматографии. – СПб.: Химиздат, 2005. – С. 106.

Одной из важных задач, определяющих границу между дерматологией и космецевтикой, является лечение и профилактика келоидных и гипертрофических рубцов.

Хирургическое лечение не всегда обеспечивает желаемые результаты. Поэтому комплексная терапия с использованием наружных лекарственных форм является перспективной. В связи с этим нами предлагается гель с меглумина акридонацетатом (циклофероном), глицирамом и маслом шиповника, обеспечивающий по предварительным исследованиям противорубцовый эффект.

Цель исследования – разработка методики идентификации и количественного определения глицирама в геле, содержащем кроме глицирама меглумина акридонацетат (циклоферон) и масло шиповника.

Результаты исследования и их обсуждение

Циклоферон, глицирам и масло шиповника имеют близкие максимумы светопоглощения в УФ области [1, 2, 3, 4], поэтому непосредственно каждое лекарственное вещество методом УФ-спектрофотометрии идентифицировать и количественно определить не представлялось возможным. В связи с этим нами была разработана методика идентификации и количественного определения глицирама методом тонкослойной хроматографии с последующей денситометрической обработкой хроматограмм.

Приготовление раствора геля. Около 0,5 г (точная навеска) геля помещали в коническую колбу вместимостью 50 мл, приливали 5 мл спирта этилового 95 %, тщательно перемешивали. Полученное извлечение отфильтровывали (фильтр «желтая лента») в мерную колбу вместимостью 25 мл. Далее в коническую колбу приливали новую порцию спирта этилового 95 % объёмом примерно 5 мл, взбалтывали и переносили на фильтр. Операцию повторяли еще трижды. Все извлечения собирали в мерную колбу. Раствор в мерной колбе доводили спиртом до метки, тщательно перемешивали. Раствор использовали для дальнейшего анализа.

Приготовление рабочего стандартного образца (РСО) глицирама. В качестве рабочего стандартного образца использовали субстанцию глицирама (ФСП 42-8145-06). 0,025 г (точная навеска) РСО глицирама помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в небольшом объеме спирта этилового 95 %, перемешивали до растворения. Раствор доводили спиртом этиловым 95 % до метки, тщательно перемешивали. Концентрация полученного раствора 1 мкг/мкл.

Методика идентификации и количественного определения глицирама в геле

Хроматографирование проводили на пластинках марки «Sorbfil ПТСХ-АФ-В-УФ» размером 10×15 см. В качестве подвижной фазы использовали систему н-бутанол – спирт этиловый 95 % – концентрированный раствор аммиака (6:1:3). Для детектирования нами предложено использовать 50 % раствор серной кислоты. Линию старта обозначали на расстоянии 1,5 см от края пластинки длиною 15 см.

На линию старта хроматографической пластинки наносили 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мкл раствора РСО с содержанием глицирама 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мкг соответственно. На этой же пластинке обозначали 4 линии контрольных треков, куда наносили по 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мкл спиртового извлечения геля. Пробы наносили при помощи микрошприца М-10Н. Пластинки помещали в камеру для хроматографирования. Высота подъема растворителя 8 см. Пластинки вынимали, высушивали при комнатной температуре, обрабатывали детектирующим реактивом методом опрыскивания и выдерживали в сушильном шкафу при температуре 100–105 °С в течение 30 мин. Наблюдали появление коричневых пятен. Пластинки сканировали при помощи планшетного сканера hp scanjet 3670 (разрешение 100 dpi) и далее осуществляли их цифровую обработку с помощью компьютерной программы «Видеоденситометр Sorbfil» (г. Краснодар). Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки по градуировочному графику зависимости «масса вещества – площадь пика» (линейная аппроксимация).

Определение хроматографических характеристик

Чувствительность аналитической реакции на пластинке, установленная по величине открываемого минимума (предела обнаружения) (мкг), которая визуально проявлялась после детектирования, составила 1 мкг глицирама в пятне.

Идентификацию глицирама в спиртовом извлечении из геля проводили по величине Rf пятна контрольного трека, которая соответствует Rf пятна стандартного образца (0,13 ± 0,01) (рис. 1, 2).

Эффективность пластинки определяли по числу теоретических тарелок пятен стандартных образцов. Данный показатель для глицирама составил около 250 теоретических тарелок. Полученные результаты свидетельствуют о достаточной чувствительности и эффективности хроматографической методики.

Для валидации методики количественного анализа определяли линейность, правильность и сходимость.

Линейность устанавливали по градуировочному графику, полученному при компьютерной обработке хроматограмм в координатах площадь пика (S) – масса (m, мкг). Под площадью пика в видеоденситометрии понимается интегральная характеристика, включающая собственно площадь пятна, его объём в пространстве и интенсивность его окраски [5]. Для этой цели использовали раствор РСО глицирама с концентрацией 1 мкг/мкл. Хроматограмму готовили, как указано выше. Диапазон масс глицирама в пятнах 1,0–5,0 мкг. По данным градуировочного графика рассчитывали статистические характеристики и коэффициент корреляции. Методом наименьших квадратов определяли значимость свободного члена линейной зависимости (а), величину углового коэффициента (b). Расчеты проводили с помощью программы Microsoft Excel. Градуировочный график описывается уравнением S = (7,5 ± 0,8)∙103 m, коэффициент корреляции r = 0,997.

Правильность методики определяли методом «введено – найдено». По градуировочному графику рассчитывали содержание глицирама на 5-ти уровнях концентраций стандартного образца и рассчитывали метрологические характеристики. Результаты приведены в табл. 1.

Рис. 1. Хроматограмма РСО глицирама

Рис. 2. Хроматограмма спиртового извлечения геля с глицирамом: 1 – глицирам

Рис. 3. Градуировочный график глицирама

Таблица 1

Оценка правильности определения глицирама

Сходимость методики оценивали по результатам повторных определений содержания глицирама в геле. Результаты и метрологические характеристики представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты определения глицирама в геле. Оценка сходимости

Выводы

1. Методом тонкослойной хроматографии с последующей денситометрической обработкой хроматограмм был идентифицирован и количественно определен глицирам в геле противорубцового действия.

2. Установлены параметры линейности, правильности и сходимости разработанной методики определения глицирама.

Власова И.В., д.х.н., доцент, профессор кафедры аналитической химии, ФГБОУ ВПО «Омский государственный университет им. Ф.М. Достоевского», г. Омск;

Андреева И.Н., д.фарм.н., профессор кафедры «Туризм», Институт сервиса и технологий, филиал ФГОУ ВПО «ДГТУ», г. Пятигорск.

Работа поступила в редакцию 17.10.2013.

Библиографическая ссылка