Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Тарасов Д.Б. 1 Бышевский А.Ш. 1 Волосатов А.А. 1 Сулкарнаева Г.А. 1 Шаповалов П.Я. 1 Шаповалова Е.М. 1 Шумкова М.В. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России

Дополнительное введение высоких доз холестерола с рационом ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови до уровня начальной стадии ДВС крови. Избыток кобаламина в дозах, адекватных малым лечебным, ограничивает эти сдвиги, а в дозах, адекватных высоким – усиливает их, и ограничивает вызываемое введением холестерола снижение толерантности к тромбину. Сдвигам скорости внутрисосудистого свертывания сопутствует ускорение липидпероксидации, снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов и активация фибринолиза. Всё это обусловливает необходимость изучения эффектов разных доз кобаламина на НВСК и ТкТР в клинике, особенно при состояниях с гипертромбинемией. Состояние гемостаза зависит от обеспеченности организма кобаламином, влияющим на тромбоцитопоэз, активность тромбоцитов и плазминовой системы, особенно на фоне атеросклеротических изменений в сердечно-сосудистой системе.

Статья в формате PDF

273 KB

кобаламин

гемостаз

липидпероксидация

гиперхолестеролемия

1. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П. Балуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг и др. – Томск, 1980. – 310 с.

2. Баркаган З.С., Рудницкая Т.А., Колпаков М.А. Нарушение обмена гомоцистеина у больных сахарным диабетом 2 типа / Тромбоз, гемостаз и реология. – 2006. – № 3(27). – С. 20–24

3. Баркаган З.С., Момот А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза. – Барнаул, 1998. – С. 83–84.

4.  Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция. – Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство, 1978. – 124 с.

5. Бышевский А.Ш., Мохнатов В. Метод определения антиплазмина в сыворотке крови / Система свертывания крови и фибринолиза. – Киев: Здоровья. – 1969. – С. 220–221.

6. Бышевский А.Ш. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина: а.с. № 1659855, регистрация 1.03. 1991, публикация – Бюлл. № 24, 30.06. 1991.

7. Бышевский А.Ш. Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш. Бышевский, Л.В. Михайлова, Р.Г.Алборов и др. // Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003.

8. Гланц С.А. Медикобиологическая статистика. – М.: Практика, 1998. – 112 с

9. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови. – М.: Медицина. – 1975. – 488 с.

10. Лавров Б.А., Терентьева Е.Л. Содержание лимонной кислоты в крови крыс при длительной даче больших доз витамина Д // Вопр. питания. – 1963. – № 3. – С. 68–72.

11. Момот А.П., Елыкомов В.А., Баркаган З.С. Методика и клиническое значение фенантролинового теста // Клин. лабор. Диагностика. – 1999. – № 4. – С. 17–20.

12. Комплексный анализ липидов крови спектрофотометрическим, флуорометрическим и кинетическим методами / В.Н. Ушкалова, Н.В. Иоанидис, З.М. Деева и др. // Лаб. дело. – 1987. – № 6. – С. 446–460.

13. Шараев П.Н. Витамины и здоровье. – Ижевск: Экспертиза, 2004. – 108 с.

14. Шаповалова Е.А. Механизмы гемостатических сдвигов при отсутствии и избытке витаминов с антиоксидантыми свойствами в рационе питания (экспериментальное исследование): автореф. дис. … д-ра биол. наук. – Челябинск, 2010. – 48 с.

15. Cetin O. Bekpinar, Unlucerci Y.e.a. Hyperhomocysteinemia in chronic renal failure patients: relation to tissue factor and platelet aggregation // Clin. Nephrol. – 2006. – № 65(2). –P. 97–102.

16. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry // Pract. Physiol. Chem. – Phyladelphia. – 1923. – P. 953.

17. Herrmann W., Schorr H., R Obeid e.a. Vitamin B12-status, particularly holotranscobalamin II and methylmalonic acid concentrations, and hyperhomocysteinemia in vegetarians // Am. J. Clin. Nutr. – 2003. – № 78(1). – Р. 131–136.

18. Morel C.F., Lerner J.P., Rosenblatt D.S. Combined methylmalonic aciduria and homocystinuria (cblC): phenotype-genotype correlations and ethnic-specific observations // Mol. Genet. Metab. – 2006. – № 88(4). – P. 315–421.

19. Nadir Y., Hoffman R, Brenner B. Association of HC, vitamin B12, folic acid in patients with a thrombotic event or recurrent fetal loss // Ann. Hematol. – 2007. – № 86 (1). – P. 35–40.

Сведения о связи кобаламин-гемостаз ограничены, но позволяют утверждать:

1. Состояние гемостаза зависит от обеспеченности организма кобаламином (КБ), влияющим на тромбоцитопоэз, активность тромбоцитов и плазминовой системы, особенно на фоне атеросклеротических изменений в сердечно-сосудистой системе [2, 5, 17, 18].

2. Известны заболевания, протекающие с нарушениями гемостаза и дефицитом КБ [15, 19].

3. В эксперименте и клинике выявлено влияние КБ на некоторые про- и антикоагулянты, однако неясно, как влияет дефицит или дополнительное введение КБ на гемостаз в целом [13].

4. Данные о влиянии КБ на интегральные показатели гемостаза (непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину) единичны [14].

Следовательно, необходимо далее изучать связи между обеспеченностью организма КБ и гемостазом, обращая внимание на эффекты его дефицита и избытка при состояниях, протекающих с тромбофилией или кровоточивостью [14].

Цель работы - изучить влияние на НВСК, фибринолиз и толерантность к тромбину (ТкТР), на липидпероксидацию (ЛПО) и антиоксидантный потенциал (АОП) тромбоцитов при содержании животных на рационе с разными дозами КБ на фоне алиментарной гиперхолестеролемии разного уровня.

Опыты провели на нелинейных белых крысах (самцы, 180 ± 16 г), получавших сбалансированный пищевой рацион [4, 9, 10, 18]. Выбор крыс связан с тем, что большинство исследований по изучению гемостаза выполняли на этих животных [17]. В атерогенный рацион входил холестерол (ХЛ) по 0,2 г на особь в сут, чему предшествовало введение 6-метилтиоурацила (0,3 мг на особь в сут, 30 дней), который нарушает обмен липидов, снижая функциональную активность щитовидной железы, что ускоряет развитие гиперхолестеролемии и атеросклеротических сдвигов у крыс, устойчивых к избыточному поступлению с пищей ХЛ [4]. Контрольные группы получали рацион питания без 6-метилтиоурацила и холестерола.

 Пробы крови брали в шприц с 3,8%-м раствором цитрата натрия (9:1 по объему) из обнаженной яремной вены у наркотизированного диэтиловым эфиром животного, фиксированного на препаровочном станке. Рану закрывали 2-3 швами (кетгут). В плазме крови устанавливали уровень маркеров НВСК: продуктов деградации фибрина (ПДФ) [6], растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) [11], D-димеров («D-dimer test", Roche), фф. Р₃ и Р₄ в плазме по описанию [1]. Концентрацию в плазме осаждаемого тромбином фибриногена (ФГ) определяли спектрофотометрически [5], а Хагеман-зависимый фибринолиз по описанию [3]. Толерантность к тромбину (ТкТР) устанавливали согласно патенту [7]. Липидпероксидацию (ЛПО) в тромбоцитах и их антиоксидантный потенциал (АОП) оценивали, определяя уровень диеновых конъюгат (ДК) и продуктов, реагирующих с тиобарбитуратом (ТБК), период индукции (ПИ) и скорость окисления (СО) устанавливали по описанию [12] на флуориметре «Биан 130». Число n составляло 8-9 во всех группах и этапах.

Статистический анализ проводили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [8], используя вариационную статистику для малых рядов, вычисляя среднюю арифметическую, среднюю ошибку, среднеквадратическое отклонение, доверительный коэффициент Стъюдента и степень вероятности (р). Различия считали достоверными при значениях степени вероятности < 0,05.

Использованы: тромбин, фибриноген (ФГ) бычьей крови, тромбопластин, каолин и буфер Михаэлиса («Технология-стандарт»), набор «D-dimer test» («Roche»), изопропанол, хлорбензол, бутанол и кальция хлорид х.ч., цианокобаламин (ЗАО «Уфавит»), казеин и крахмал маисовый пищевой, масло подсолнечное рафинированное, смесь Осборна-Менделя (все реагенты х.ч.реагенты), ледяная уксусная кислота, концентрированная серная кислота, уксусный ангидрид, абсолютный этанол. Число n во всех группах крыс равно 8.

Вначале изучили эффекты возрастающих доз ХЛ на НВСК, фибринолиз и ТкТР на фоне рациона с кобаламином в соответствии с суточной потребностью (1 мкг/кг - полноценный рацион). Подопытные группы получали ХЛ по 0,2, 0,4 или 0,8 г/кг в сут, пробы брали в конце 6-й и 8-й недели. Из данных таблицы следует, что введение ХЛ (0,2 г/кг) заметно повышает уровень всех плазменных маркеров НВСК (наименьшая доза, использующаяся при оценке влияния ХЛ на атерогенез) к концу 6-й и особенно 8-й недели. Активность фибринолиза не меняется, а ТкТР падает к концу опыта. Увеличение дозы ХЛ в рационе сопровождается пропорциональным ускорением НВСК (выше доза - выше уровни всех маркеров), снижается уровень ФГ, что указывает на его ускоренное потребление, усиливающееся с дозой ХЛ.

Падает и ТкТР, а фибринолиз меняется мало. Уровень липидпероксидов с увеличением дозы ХЛ и длительности введения также повышается, а АОП, напротив, падает.

Изменения НВСК, фибринолиза, ТкТР, ЛПО и АОП при введении возрастающих доз холестерола (0,2, 0,4 или 0,8 г/кг в течение 6 или 8 недель)

Во 2-й группе опытов изучали влияние ХЛ на те же показатели, увеличивая дозу КБ в рационе и длительность опыта (6 и 8 недель крысы получали ХЛ в дозах 0,4; 0,6 или 0,8 г на особь в сут на фоне КБ в дозах, превышающих суточную потребность в 2, 8 или 16 раз).

И в этом случае подтвердилось свойство ХЛ ускорять НВСК - достоверно вырос уровень в плазме маркеров НВСК и выявилось, что введение КБ при всех испытанных дозах ХЛ ограничивает эффекты липида на НВСК и ТкТР, а фибринолиз активируется при 8- и 16-кратной дозе КБ. Скорость ЛПО под влиянием КБ уменьшалась, а АОП возрастал.

Заключая, выделим основные положения:

1. Высокие дозы ХЛ в полноценном рационе ускоряют НВСК до степени, которую можно рассматривать как начальную стадию ДВС крови.

2. Избыток КБ в дозах, адекватных малым лечебным, ограничивает эти сдвиги, а в дозах, адекватных высоким лечебным, усиливает их, и независимо от дозы ограничивает вызываемое введением холестерола снижение толерантности к тромбину.

3. Сдвигам скорости НВСК при гиперхолестеринемии сопутствуют ускорение ЛПО, снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов и активация фибринолиза.

Рецензенты:

Ральченко И.В., д.б.н., профессор кафедры фармацевтической технологии и фармакогнозии с курсом ботаники ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздравсоцразвития России, г. Тюмен№

Цейликман В.Э., д.б.н., профессор, зав. кафедрой биохимии ГБОУ ВПО «Челябинская медицинская академия» Минздравсоцразвития России, г. Челябинск.

Работа поступила в редакцию 12.12.2012.

Библиографическая ссылка