Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Никитина А.С. 1 Попова О.И. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Пятигорская ГФА Минздравсоцразвития России», Пятигорск

В статье изложены результаты изучения тритерпеновых соединений травы иссопа лекарственного, культивируемого в условиях Ставропольского края. Хроматографические исследования спиртовых и хлороформных извлечений из травы иссопа лекарственного показали наличие двух соединений тритерпеновой природы – урсоловой и олеаноловой кислот. Наилучшее разделение тритерпеноидов происходило в системе петролейный эфир – хлороформ – кислота уксусная (10:4:0,4). Определение содержания тритерпеновых соединений проводили спектрофотометрическим методом, основанным на реакции с кислотой серной концентрированной, с последующим измерением оптической плотности. Спектры поглощения продуктов взаимодействия концентрированной кислоты серной и тритерпеноидов идентифицировали по характерному максимуму при 310 нм. Содержание тритерпеновых кислот в траве иссопа лекарственного составляет 0,98±0,002 %.

Статья в формате PDF

331 KB

иссоп лекарственный

тритерпеновые соединения

урсоловая кислота

олеаноловая кислота

хроматография

спектрофотометрия

1. Евтушенко Н.С. Исследование хроматографического поведения моно- и бициклических терпеноидов с целью выбора оптимальных условий хроматографирования препаратов их содержащих / Н.С. Евтушенко, В.Л. Багирова, А.М. Шлянкевич // Современные методы анализа фармацевтических препаратов: сб. науч. тр. ВНИИФ. – М., 1988. – Т. 26. – С. 76–81.

2. Зотов Е.П. Тритерпеноиды и стероиды Hissopus seravshnicus и Hissopus ferganensis / Е.П. Зотов, Р.Л. Хазанович / Хим.-фармац. журн. – 1975. – №2. – С. 259–260.

3. Починок Л.Н. Методы биохимического анализа растений. – Киев, 1976. – 534 с.

4. Сур С.В. Методы выделения, идентификации и определения терпеновых соединений // Хим.-фармац. журн. – 1990. – №5 – С. 45–50.

5. Тритерпеноиды родов сем. Lamiaceae флоры России: обзор разнообразия; состав у D. multicolor Kom / А.Д. Зорина [и др.] // Раст. ресурсы. – 2002. – №3. – С. 60–65.

6. Чагоян А.А. Противоопухолевая активность некоторых видов сем. Lamiaceae / А.А. Чагоян, Г.Б. Оганесян // Раст. ресурсы. – 1996. – Т.32, Вып.4. – С. 59–63.

Лекарственные препараты на основе растительного сырья в настоящее время успешно применяются при лечении большинства заболеваний, так как они обладают рядом преимуществ перед синтетическими лекарственными средствами - широкий выбор терапевтически активных природных соединений в лекарственных растениях, возможность их комбинированного использования, меньшая частота побочных эффектов и противопоказаний. Особый интерес представляют эфирно-масличные растения семейства яснотковые. Они содержат комплекс биологически активных веществ - эфирные масла, иридоиды, тритерпеноиды, полисахариды, фенольные соединения и другие. Многие виды семейства яснотковые накапливают значительное количество тритерпеноидов, которые близки структурно и генетически к стероидам. Особый интерес представляют пентациклические тритерпеновые кислоты - урсоловая и олеаноловая. В сырье некоторых видов иссопа обнаружены урсоловая и олеаноловая кислоты [2]. Урсоловая и олеаноловая кислоты проявляют гепатопротекторную и противовирусную активность (вирус ВИЧ, Эпштейн-Барра, гриппа А и Б), ингибируют рост опухолей. Урсоловая кислота обладает противовоспалительным свойством. По данным испанских ученых она действует не по стероидному механизму и, таким образом, не влияет на водно-солевой обмен подобно глюкокортикоидам и производным глициретовой кислоты [6]. Большинство эфирно-масличных растений семейства яснотковые в настоящее время применяются в качестве отхаркивающих, противовоспалительных, ранозаживляющих и седативных средств. Несмотря на это, многие виды растений семейства яснотковые недостаточно изучены в химическом отношении и имеют ограниченные сведения по фармакологической активности [2, 5].

Целью настоящих исследований явилось изучение качественного состава тритерпеновых соединений иссопа лекарственного и определение количественного содержания тритерпеновых кислот в сырье исследуемого вида.

Объектом исследований являлся иссоп лекарственный (Hyssopus officinalis L.) - культивируемое многолетнее растение, полукустарник с деревянистым стержневым корнем одревесневшими у основания стеблями, высотой 30-80 см. Ввиду того, что растение на территории Северо-Кавказского региона не произрастает, на экспериментальных участках лаборатории лекарственных растений Ставропольского НИИ сельского хозяйства (СНИИСХ) на протяжении пяти лет проводятся исследования по культивированию нескольких ботанических форм иссопа лекарственного (розовая, синяя и белая окраска венчика). Сырье заготавливалось в течение 2004-2006 гг. Для изучения динамики накопления основных групп биологически активных веществ траву иссопа лекарственного заготавливали в различные фазы вегетации растения - бутонизации, массового цветения и плодоношения.

Хлороформные и спиртовые извлечения из сырья иссопа лекарственного показали положительную качественную реакцию Либермана-Бурхарда на тритерпеновую систему ядер. Положительной была также реакция Лафона (табл. 1).

Исследование хлороформных и спиртовых извлечений проводили методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Silufol» и «Sorbfil» в различных системах растворителей: гексан - этилацетат (2:1), хлороформ - этилацетат (9:1), петролейный эфир - хлороформ - кислота уксусная (10:4:0,4). Хроматографирование хлороформных и спиртовых извлечений проводили со стандартами - урсоловой и олеаноловой кислотами.

После хроматографирования влажные пластинки опрыскивали 20 %-м раствором кислоты серной, затем нагревали в сушильном шкафу в течение 8-10 минут при температуре 110 °С. Зоны адсорбции веществ тритерпеновой природы и свидетелей окрашивались в розово-вишневый цвет, переходящий в голубой [1, 4].

Таблица 1

Результаты хроматографического исследования хлороформных и спиртовых извлечений травы иссопа лекарственного

Эксперименты показали, что в хлороформных и 70 %-х спиртовых извлечениях, полученных из травы иссопа лекарственного, присутствуют олеаноловая и урсоловая кислоты. Наилучшее разделение тритерпеноидов происходило в системе петролейный эфир - хлороформ - кислота уксусная (10:4:0,4).

Определение содержания тритерпеновых соединений проводили спектрофотометрическим методом, основанным на реакции с кислотой серной концентрированной, с последующим измерением оптической плотности [3, 4]. Сырье предварительно измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1,0 г измельченного сырья (точная навеска) помещали в колбу вместимостью 250 мл, прибавляли 100 мл спирта этилового 40 %, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 60 минут. После охлаждения до комнатной температуры спиртовое извлечение аккуратно сливали. Сырье в колбе заливали 50 мл хлороформа, нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 60 минут, затем охлаждали. Хлороформное извлечение фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, а извлечение хлороформом повторяли, собирая фильтрат в ту же мерную колбу. Доводили хлороформом до метки, перемешивали.

10 мл хлороформного извлечения упаривали до сухого остатка, растворяли в 10 мл кислоты серной концентрированной (точно измеренный объём), периодически взбалтывая. Полученный раствор термостатировали при 70 °С в течение 60 минут. После охлаждения 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводили до метки кислотой серной концентрированной.

Стандартный раствор урсоловой кислоты готовили по следующей методике. Около 0,004 г (точная навеска) урсоловой кислоты растворяли в 10 мл (точный объем) кислоты серной концентрированной, периодически взбалтывая. Полученный раствор термостатировали при 70 °С в течение 60 минут, 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводили до метки тем же растворителем. Максимум оптической плотности полученного раствора измеряли на спектрофотометре СФ-56 в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 310 нм. Расчёт содержания суммы тритерпеновых кислот (X, %) в пересчёте на урсоловую кислоту проводили по формуле:

где D_x - оптическая плотность испытуемого раствора; D_ст - оптическая плотность стандартного раствора урсоловой кислоты; a_x - масса сырья, г; a_ст - масса урсоловой кислоты, г

Спектры поглощения продуктов взаимодействия концентрированной кислоты серной и тритерпеноидов идентифицировали по характерному максимуму при 310 нм (рисунок).

Параллельно измеряли оптическую плотность стандартного раствора урсоловой кислоты. В качестве раствора сравнения использовали кислоту серную концентрированную. Результаты измерений статистически обработаны.

Содержание тритерпеновых кислот в траве иссопа лекарственного составляет 0,98 ± 0,002 %.

УФ-спектры стандартного раствора урсоловой (1) и олеаноловой (2) кислот
и извлечения иссопа лекарственного (3)

Таблица 2 

Содержание тритерпеновых кислот в траве иссопа лекарственного (n = 6) 

Установлено присутствие олеаноловой и урсоловой кислот в траве иссопа лекарственного, культивируемого в Ставропольском крае. Определено количественное содержание тритерпеновых кислот в пересчёте на урсоловую кислоту в траве иссопа лекарственного - 0,98 ± 0,002 %.

Рецензент -

Молчанов Г.И., д.фарм.н., профессор, кафедры социально-гуманитарных наук Пятигорского филиала ГОУ ВПО Северо-Кавказского ГТУ, г. Пятигорск.

Работа поступила в редакцию 10.10.2011.

Библиографическая ссылка