Успешное развитие сферы производства препаратов и продуктов функционального питания с пробиотическими свойствами сопряжено с актуальной проблемой получения эффективных ключевых составляющих - высокоактивных штаммов лакто- и бифидобактерий. Микроорганизмы-пробионты, перспективные для последующего включения в состав индигенной микрофлоры биотопов, должны обладать рядом свойств, позволяющих конкурировать с условно-патогенными и патогенными микроорганизмами и колонизировать определенный биотоп макроорганизма. Одним из важных факторов эффективной колонизации макроорганизма является контактное воздействие микрофлоры, связанное с адгезией бактериальных клеток к эпителию, так как адгезивная активность (АА) штаммов-пробионтов является ключевым признаком, обеспечивающим пролонгирование лекарственного действия пробиотика.
Целью нашего исследования явилось изучение адгезивного потенциала лакто- и бифидобактерий в смоделированной in vitro системе «микроорганизмы-пробионты - кишечные энтероциты» с последующим отбором перспективных адгезивно-активных штаммов.
В качестве объектов исследований были выбраны производственные штаммы родов Lactobacterium и Bifidobacterium: L. fermentum 90T-C4, L. plantarum 8P-A3, L. acidophilum K3-III24, L. acidophilum 100 АШ, L. delbrueckii subsp. bulgaricum 8-79 и B. bifidum 1, B. bifidum ЛBA-3, B. bifidum 791, B. adolescentis MC-42. Адгезивную активность микроорганизмов - пробионтов определяли методом цитадгезии на энтероцитах кишечника аутбредных крыс [Горская Е. М. и др., 1989, 1990]. Для выделения лакто- и бифидобактерий, прочно зафиксированных на эпителиальных клетках тонкого кишечника крыс, использовали оригинальный верографин-фикколовый тест [Махрова Т.В., 2004].
Оценка использованного нами метода определения адгезивности лакто- и бифидобактерий показала, что для успешной реализации репродуктивного колонизационного процесса в полостях макроорганизма необходима селекция промышленных штаммов с целью отбора адгезивно-активных бактерий, так как механизм колонизационной резистентности макроорганизма связан с селективным преимуществом в эпитопах способных к адгезии мукозоассоциированных бактерий-пробионтов.
В результате проведенных исследований адгезивных свойств лакто- и бифидобактерий установлено, что исследуемые штаммы обладают разным исходным уровнем адгезивности. Анализ результатов среднего показателя адгезии (СПА), коэффициента участия энтероцитов в адгезивном процессе (КУЭ) и индекса адгезивности микроорганизмов (ИАМ) позволил отнести промышленные штаммы лактобактерий L. fermentum 90T-C4, L. plantarum 8P-A3 и бифидобактерий B. adolescentis MC-42, B. bifidum 1 к среднеадгезивным, остальные изученные нами штаммы лакто- и бифидобактерий в опытах in vitro обладают низкой АА в отношении энтероцитов аутбредных крыс.
Так как в основе биотехнологии препаратов с пробиотическими свойствами лежат процессы направленного использования жизнедеятельности микроорганизмов, мы на основании изучения производственно-ценных свойств исследуемых штаммов провели исследования по селективному отбору адгезивно-активных бактерий из культур L. fermentum 90T-C4, L. plantarum 8P-A3, B. adolescentis MC-42 и B. bifidum 1. После наслаивания клеточно-бактериальных суспензий на фиккол-верографин и центрифугирования получили клеточный осадок, состоящий из прошедших сквозь градиент концентрации энтероцитов с прочноадгезированными микроорганизмами. При сравнительной оценке результатов показателей АА бактерий клеточного осадка и бактерий, находящихся на верхних уровнях градиента, установлена статистическая значимость различий адгезивных свойств лакто- и бифидобактерий, полученных в смоделированной in vitro системе «микроорганизмы-пробионты - кишечные энтероциты» (р<0,01). С целью отработки метода и стандартизации учета результатов тестирования уровня адгезивной активности штаммов установлен оптимальный режим экспериментов. Полученные результаты исследований легли в основу разработки метода селекции промышленных штаммов лакто- и бифидобактерий с предварительным выявлением высокоадгезивных бактерий (СПА выше 10), многократным пассированием высокоадгезивных штаммов в селективных питательных средах и последующим изучением стабильности адгезивных свойств и необходимой репродукционной дозы полученных культур лакто- и бифидобактерий.
Таким образом, применяемая нами модель выделения адгезивно-активных штаммов лакто- и бифидобактерий модифицированным верографин - фикколовым методом является перспективной для разработки методологии получения производственно-ценных штаммов-пробионтов. Терапевтическая программа лечения дисбактериозов, основанная на применении пробиотиков с высоким содержанием консорции высокоадгезивных лакто- и бифидобактерий, позволит быстрее сформировать необходимый уровень индигенной микрофлоры в кишечном микробиоценозе.