Хроматин из ядер клеток печени мышей фракционировали по прочности связывания с ядерным матриксом с помощью растворов с низкой ионной силой и предварительной активацией эндогенной Ca2+/Mg2+ ДНКазы [1;4]. В результате экстракции ТМ-буфером с добавлением NaCl возрастающей концентрации выделены следующие фракции хроматина: хроматин-1 (Хр-1), хроматин-2 (Хр-2), хроматин высоко солевой (Хр-ВС), хроматин (ядерный матрикс) (Хр-ЯМ). Первые две фракции составляют до 70 % хроматина ядра и представляют собой наиболее активный в транскрипционном отношении хроматин. Липиды экстрагировали методом Блайя-Дайера с применением смеси хлороформ-метанол (1:2, по объему) и разделяли с помощью двумерной хроматографии в тонких слоях силикагеля. Количественно липиды определяли спектрофотометрическим методом по содержанию неорганического фосфора [3].
Показано, что во фракции Хр-1 присутствуют фосфатидилхолин (27,1 %), фосфатидилинозит (15,1 %), сфингомиелин (6,2 %), фосфатидилэтаноламин (20,2 %), кардиолипин (16,1 %), лизоформы фосфатидилхолина (13,2 %). Во фракции Хр-2 на долю фосфатидилхолина приходится (34,2 %), фосфатидилинозита (11,0 %), фосфатидилсерина (3,9 %), сфингомиелина (17,6 %), фосфатидилэтаноламина (11,3 %), кардиолипина (8,8 %), количество лизоформ фосфатидилхолина составляет (13,2 %).
Показано, что во фракции Хр-ВС доля фосфатидилхолина понижается до 24 %, содержание фосфатидилинозита составляет (13,8 %), сфингомиелина (15,1 %), резко возрастает уровень фосфатидилэтаноламина до (39,5 %), кардиолипина до (11,9 %), лизоформы фосфатидилхолина не выявляются. Во фракции Хр-ЯМ фосфолипиды более разнообразны, чем в Хр-ВС и представлены фосфатидилхолином (27,1 %), фосфатидилинозитом (5,7 %), фосфатидилсерином (6,7 %), сфингомиелином (16,7 %), фосфатидилэтаноламином (16 %), кардиолипином (17,1 %), лизоформами фосфатидилхолина (4,6 %).
Таким образом, транскрипционно активный хроматин (ХР-1 и ХР-2) характеризуется большим разнообразием фосфолипидов, чем транскрипционно неактивный. Он характеризуется низким содержанием фосфатидилсерина, относительно высоким содержание фосфатидилхолин и его лизоформ.
- Бойков П. Я., Костюк В. Г., Терентьев А. А., Шевченко Н. А. Концентрирование протоонкогенов в ядрах гепатоцитов //Молекулярная биология. 1995. Т.29. №5. С. 1137-1144.
- Стручков В.А., Стражевская Н.Б., Структурные и функциональные аспекты ядерных липидов нормальных и опухолевых клеток //Биохимия. 2000.-Т.65. №5. С. 620-643.
- Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов /М.: Мир. 1975. 322 с.
- Борисова Н.П., Костюк В.Г., Шевченко Н.А., и др. Двойственный характер действия эндогенных ДНКаз на транскрипционно активный и неактивный хроматин //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. Т.135. №3. С.294-298.