Целью работы явилось изучение основных морфофункциональных особенностей плаценты человека, возникающие под влиянием эндогенной интоксикации материнского организма при ОПГ-гестозе.
Материалы и методы исследования
Материалом исследования служила плацента и кровь женщин с физиологическим течением беременности и при гестозе различной степени тяжести. Исследовано 62 плаценты и кровь от 163-х пациенток Электронно-микроскопические исследования проводили по общепринятым методикам. Кровь исследовалась в III триместре беременности (26-40 недель). Общее количество Т-лимфоцитов (реакция Е-РОК) и общее количество В-лимфоцитов (М-РОК) определяли по В.М. Никитину [9]. Постановка нагрузочного теста с теофиллином проводилась по Э.Г. Скрябиной, В.И. Чередеву [10]. Активность субпопуляций лимфоцитов определяли с помощью непрямой иммунофлуоресценции с моноклональными антителами к дифференцировочным антигенам поверхности клеток, используя набор моноклональных антител фирмы «Сорбент» [15]. Количественное определение иммуноглобулинов проводили методом одномерной радиальной иммунодиффузии в агаровом геле [5]. Антиоксидантную активность (АОА) и перекисное окисление липидов (ПОЛ) исследовали на хемилюминометре «EMILITE EL-1105» совмещенным с персональным компьютером [13]. Уровень R-белков определяли по торможению реакции гемагглютинации между анти-R-cывороткой (сывороткой полученной иммунизацией кроликов R-белками человека) и эритроцитами человека 0 (I) группы Rh [1], циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) методом осаждения 3,5% раствором полиэтиленгликоля [2]. Определение показателей общей и эффективной концентрации альбумина проводили флуоресцентным методом на анализаторе АКЛ-01 в соответствии с инструкциями для реактивов Научно-внедренческого центра «Зонд» [8]. Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (t)
Результаты исследования
В результате проведенного исследования установлено, что для всех форм гестоза характерно резкое снижение Т-супрессоров, В-лимфоцитов, приводящее к уменьшению суммарного содержания иммуноглобулинов А, G (p< 0,01). Наибольшее иммунодефицитное состояние имело место при нефропатии тяжелой степени, когда по сравнению с физиологической беременностью содержание Т-лимфоцитов снизилось на 25%, Т-супрессоров на 68%, В-лимфоцитов на 19% (p< 0,01). Изменилось и функциональное состояние этих клеток. Активность СД3+ (Т-клеток) понизилась на 63%, СД72+ (В-клеток) на 44% (p< 0,001). Содержание IĝМ в крови больных повысилось на 60% (p<0,001), что свидетельствует об активном развитии воспалительного процесса, в том числе и в плаценте.
При электронно-микроскопическом исследовании плаценты в синцитиотрофобласте отмечено большое число вакуолей, набухание митохондрий, с нарушением строения крист, резкое расширение канальцев эндоплазматической сети, увеличение размеров лизосом, уменьшение в ядре содержания конденсированного хроматина, просветление нуклеоплазмы, деструкция клеточных мембран. Некротические процессы часто завершались отмиранием отдельных участков синцитиотрофобласта с оголением базальной мембраны фетальных сосудов.
Проведение комплексной оценки показателей эндогенной интоксикации при гестозе позволило более глубоко подойти к изучению механизмов развития патологического процесса. К показателям уровня токсичности были отнесены - показатели процессов ПОЛ, титра R-белков, циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), содержание сывороточного альбумина (ОКА, ЭКА, ССА, иТ).
В последнее время в развитии гестоза важная роль отводится дисбалансу оксидантно-антиоксидантной системы, как фактору нарушения структурно-регуляторной функции клеток, формирования иммунологической недостаточности [4,17]. Нами отмечено нарастание содержания продуктов ПОЛ и снижение АОА в зависимости от тяжести гестоза. При нефропатии тяжелой степени уровень суммарной хемилюминесценции продуктов ПОЛ вырос в 2,3 раза, при этом АОА понизилась на 56% (р<0,001). Полученные данные свидетельствуют о патогенетической роли системы ПОЛ-АОА в развитии гестоза. Таким образом, показано, что антиоксидантная система не справляется с возросшей пероксидацией, которая стимулирует деструкцию мембран и связанных с ними рецепторов.
Накопление продуктов перекисного окисления индуцирует частичное протеолитическое расщепление дистальных участков клеточных рецепторов, что ведет к резкому увеличению уровня R-белков. Нарастание R -белков вызывает дальнейшую дезорганизацию и нарушение жизнедеятельности клеток, сопровождающуюся сдвигами биологического равновесия на организменном уровне.
Подтверждением стало отмеченное нами значительное увеличение уровня R-белков на всех стадиях заболевания. При нефропатии тяжелой степени титр R-белков по сравнению с физиологической беременностью увеличился в 4 раза (p<0,001).
Повреждение клеточных мембран способствует проникновение антигенов плода в организм матери, при этом образуются циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) [11,7].В наших исследованиях у больных страдающих нефропатией тяжелой степени содержание ЦИК увеличилось на 63% (p<0, 001). Известно, что ЦИК, малых и средних размеров долго циркулируя по кровотоку, поражают мембраны эритроцитов, сосудистотромбоцитарное звено и эндотелий сосудов. Циркулирующие иммунные комплексы откладываясь под базальной мембраной эпителия и субэпителиально в сосудах, вызывают воспаление спиральных артерий матки, фетальных сосудов плаценты. В процессе воспаления продукты активации комплемента повышают проницаемость сосудов, вызывая их расширение, индуцируя экспрессию на эндотелии молекул адгезии для лейкоцитов, привлекая нейтрофильные гранулоциты и макрофаги. Большую роль в развитии катаболических процессов играют лизосомальные ферменты, в частности, выделяемые специфическими гранулами нейтрофильных гранулоцитов, которые первыми появляются в очаге воспаления и активируют катаболические процессы. По ходу их развития и появления макрофагов высвобождается еще большее количество лизосомальных гидролаз, а также химических медиаторов воспаления. Химические медиаторы определяют дальнейшее течение воспаления, так как они создают предпосылки для развития гиперосмоса и гипоксии, оказывают свое повреждающее действие на эндотелий капилляров и венул [17].
Ультраструктурное исследование показало, что в эндотелии фетальных сосудов плаценты сначала отмечаются признаки повышенной пиноцитозной активности, затем наступает выбухание тела клетки в просвет сосуда, появляются множественные перегибы ядерной мембраны. Усиленная везикуляция эндотелия указывает на активный транспорт жидкости через клетку.
Увеличение ЦИК в крови матери при гестозе, по мнению Л.К. Фазлеевой [14], Т.А. Старостиной и соавт. [11], может привести к развитию антителозависимого нефрита. В наших исследованиях нефротический синдром, развивающийся при гестозе, характеризовался гипоальбуминемией. При нефропатии тяжелой степени уровень сывороточного альбумина (ОКА) в крови женщин уменьшился на 22%, эффективная концентрация альбумина (ЭКА - концентрация свободных центров связывания альбумина) на 50%, связывающая способность альбумина (ССА - отношение ЭКА/ОКА) на 52% (p<0,001). Дефицит общей концентрации альбумина и его связывающей способности приводит к снижению транспорта метаболитов различного происхождения и его детоксикационной функции, что способствует нарастанию эндогенной интоксикации. Подтверждением стал рост индекса токсичности по альбумину (иТ -ОКА/ЭКА-1) при нефропатии тяжелой степени в 3 раза (p<0,001).
В зависимости от тяжести гестоза в плаценте отмечено нарастание доли фибриноида. Показано, что при водянке на апикальной поверхности синцитиотрофобласта, на месте его деструкции, происходит отложение отдельных нитей фибрина, перерастающих постепенно в однородный пласт. При нефропатии легкой и средней степени фибриноид заполняет большую часть синцитиотрофобласта, доходя до мембраны фетальных сосудов. При нефропатии тяжелой степени часть сосудов облитерировано. Отложение фибриноида в плаценте можно рассматриваться и как компенсаторный процесс, играющий роль иммунологического барьера, и как патологическое изменение, нарушающее плодово-материнский обмен через гемато-плацентарный барьер [6].
При развитии гестоза среди термальных ворсин плаценты обнаружены пролиферативные процессы, относящиеся к компенсаторно-приспособительным реакциям, благодаря которым поддерживается развитие плода. Это множество молодых ворсин, хорошо васкуляризованных концевых ворсин, образование синцитиокапиллярных мембран и синцитиальных узелков пролиферативного типа.
Таким образом, можно заключить, что наибольшая вовлеченность в патологический процесс структур плаценты при ОПГ-гестозе зависит от накопления продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), увеличения титра R-белков, содержания ЦИК на фоне общей эндогенной интоксикации, характеризующейся снижением антиоксидантной защиты и повышения индекса токсичности (иТ) по альбумину.
Литература
- Бартова Л.М., Кулагина Н.Н., Маргулис Г.У. Методические рекомендации по определению R-белков в сыворотке (плазме) крови. М.: НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалея, 1989. 8с.
- Вельбри С.К., Лиллеорг А.Л., Линдстрем С.Л. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характеристики патологических процесса //Лаб. дело. 1988. №5. С.7-11.
- Ветров В.В. Гомеостаз у беременных с гестозом //Акуш. и гинек. 1998. №2. С.12-14.
- Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. Итоги науки и техники //Биофизика. 1991. Т.29. С.252.
- Галицкий Я.Д. Усовершенствование определения иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в геле //Лаб. дело. 1987. №12. С.925-927
- Говалло В.И. Иммунология репродукции. М.: Медицина, 1987. 304с.
- Гончаревская З.Л. Клинико-иммунологические критерии в диагностике гестозов: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Москва, 1998. 25с.
- Грызунов Ю.А., Миллер Ю.И., Добрецов Г.Е., Пестова А.Б. Флуоресцентный способ определения массовой концентрации альбумина сыворотки крови человека //Клин. лаб. диагностика. 1994. № 5. С.27-30.
- Никитин В.М. Справочник иммунологических методов. Киев: Медицина, 1982. 79с.
- Скрябина Э.Г., Чередев В.И. Возможности и ограничения теста чувствительности Е-розеткообразования к теофиллину для диагностического состояния Т-системы человека //Лаб. дело. 1987. №1. С.5-8.
- Старостина Т.А., Белокриницкий Д.В., Кудряшова Н.М., Размахнина Н.И., Голощапова О.В., Середина Т.А. Циркулирующие иммунные комплексы и иммуноглобулины А, М, G в системе мать-плод при физиологической беременности и гестозе //Акуш. и гин. 1992. №2.С.19-21.
- Стрижакова Н.В., Дюгееев А.Н. Об итогах дискуссии по проблеме гестозов //Акуш. и гинек. 1989. № 9. С.73-75.
- Токмаков А.А. Применения люминола в аналитической биохимии //Успехи соврем. биол. 1993. Т.113. №2. С.247-251.
- Фазлеева Л.К. Циркулирующие иммунные комплексы в системе мать-плод //Акуш. и гин. 1984. №6 С.66-67.
- Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. 219с.
- Черных А.М. Воспаление (Очерки патологии и экспериментальной терапии). М.: Медицина, 1979. 488 с.
- Чудинова В.В., Алексеев С.М., Захарова Е.И., Евстигнеева Р.П. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия.