Scientific journal

Fundamental research

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

Лепра - хроническое заболевание, характеризующееся широким иммунологическим спектром: больные с туберкулоидным типом имеют выраженный клеточный иммунитет, в то время как пациенты с лепроматозным типом заболевания отличаются его явной недостаточностью и повышенным, по сравнению с нормой, уровнем иммуноглобулинов [Sheela R. et al., 1995], среди которых доминирует IgG класс.

Научная информация о спектре антител этого класса у больных лепрой крайне немногочисленна и противоречива. Одни авторы считают, что антительный ответ доминирующего класса иммуноглобулинов обеспечивается тремя из 4 изотипов - JgG_1, JgG₂, JgG₃ независимо от Т-клеточной активности [Dhandayuthapani S. et al., 1992; Hussain R. et al., 1994, 1995]. Другие, напротив, установив разницу в распознавании антигенов М. leprae иммуноглобулинами субклассов IgG₁ и IgG₃ при полярных формах - ТТ и LL, их продукцию связывают с дифференцированной Т-клеточной активностью [Sheela R. et al., 1995; Snapper G.M. & Mend J.J., 1993].

Учитывая малоизученностъ данного вопроса и, предполагая, что отдельные изотипы иммуноглобулинов IgG класса могут являться одним из критериев излеченности специфического процесса и прогнозирования его возможной активации, мы поставили перед собой задачу исследовать спектр иммуноглобулинов IgG типа у больных лепрой, находящихся в активной стадии заболевания.

Материалы и методы

Нами в ИФА были исследованы в динамике образцы сывороток кровиот 18 пациентов лепроматозным типом лепры в активной стадии заболевания, получающих лечение в клинике НИИ по изучению лепры г. Астрахани. Для определения референтных величин оптического сигнала изучаемых показателей была исследована кровь от 850 здоровых доноров, не имевших контакта с больными лепрой.

Для ИФА за основу был взят непрямой вариант иммуноферментного анализа для определения антител в сыворотке крови [Воллер А. и соавт., 1977]. В качестве специфических антигенов применяли синтетический DiS-BSA (дисахарид - полусинтетический аналог фенольного видо-специфического антигена М.leprae, коньюгированный с бычьим сывороточным альбумином) и нативные (протеиновые) УЗД М.leprae (ультразвуковой дезинтеграт М.leprae) и УЗД М. lufu (ультразвуковой дезинтеграт М.lufu) [Дегтярев О. В., 2005].

В исследованиях использовали коммерческие очищенные моноклональные мышиные античеловеческие иммуноглобулины, конъюгированные с пероксидозой хрена фирмы ICN: изотип JgG₁ клон (НР 6069); изотип JgG₂ клон (НР 6017); изотип JgG₃ клон (НР 6047); изотип JgG₄ клон (НР 6025) в скриниг- титре 1 : 400. Величину оптического сигнала определяли на фотометре Униплан АО «Пикон» (Россия) при длине волны 492 нм. Данные обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Исследование сывороток крови доноров позволило нам выявить интервалы колебаний концентрации иммуноглобулинов субкласса IgG и их средний уровень у здоровых людей, не имевших контакта с больными лепрой, который был принят нами за норму (табл.1).

Таблица 1. Уровень продукции иммуноглобулинов субкласса IgG у здоровых лиц.

Анализ результатов, полученных при исследовании сывороток крови пациентов, находящихся в активной стадии заболевания показал, что спектр антительного ответа по подклассам иммуноглобулинов у этих больных гетерогенен и коррелирует с клинической симптоматикой и бактериальной нагрузкой. Так, у семи пациентов в сравнении со здоровыми донорами выявлено значительное увеличение концентрации иммуноглобулинов субкласса IgG₁,: на DiS-BSA - до 0,70 (М = 0,49 ± 0,006, t = 6,0, р < 0,01); на протеиновые антигены 0,80 (М = 0,53 ± 0,008, t = 2,77, р < 0,05) единиц оптической плотности (ОП). Уровень IgG₂ на оба антигена у них практически приближался к норме и был равен для DiS-BSA - 0,01-0,18 (0,095 ± 0,03; t = 0,03), для протеиновых антигенов - 0,10 - 0,25 (0,175 ± 0,03; t = 0,47). IgG₃ у этой группы больных был стабильно повышен ко всем использованным нами антигенам: для синтетического ОП составила 0,30-0,90 (0,6±0,009; t=4,2; р < 0,01), для протеиновых - 0,22-0,50 (0,46 ± 0,008; t =3,57; р < 0,01). Эти семеро пациентов отличались высоким бактериоскопическим индексом и не имели выраженных специфических осложнений.

У четверых активных больных наблюдали высокий уровень иммуноглобулинов субкласса IgG₂: на DiS-BSA величина оптического сигнала повышалась до 0,5 (0,36 ± 0,003; t = 5,2;р < 0,01), на протеиновые антигены - до 0,48 ед. ОП (0,32 ± 0,009; t =2,3; р < 0,05); субкласса IgG₃ на DiS-BSA и на протеиновые антигены - до 0,50 (0,43 ± 0,007; t = 3,9; р < 0,05 и 0,4 ± 0,005; t = 3,5; р <0,05 соответственно) ед. ОП. У этих больных выявлен несколько повышенный уровень IgG₁ на все применяемые антигены, но статистически достоверно не отличавшийся от нормы. Уровень IgG₄ также как и у предыдущих 7 больных не отличался от показаний доноров. Эти пациенты также не имели выраженных специфических осложнений, их БИН был равен 0, а микобактерии лепры у них были обнаружены только в биоптатах кожи.

Трое больных из группы активных имели низкий антительный ответ к иммуноглобулинам субкласса IgG₁ и IgG₂ и на синтетический и на протеиновые антигены. Уровень оптического сигнала IgG₃ и IgG₄ на DiS-BSA и протеиновые антигены были стабильно высокими и составляли 0,82 ± 0,003 (t = 13,3; р < 0,01); 0,87 ± 0,004 (t = 12,0; р<0,01) и 0,78 ± 0,005 (t = 9,5; р < 0,01); 0,6 ± 0,003 (t = 10,2; р < 0,01) соответственно. Эти пациенты поступили в клинику НИИ по изучению лепры либо с уже сформировавшимися, либо с формирующимися специфическими осложнениями лепрозного процесса (хронический специфический полиневрит, нейротрофические язвы, остеомиелит).

У остальных четверых пациентов с активным течением процесса выявлен высокий уровень иммуноглобулинов субкласса IgG₄: на синтетический антиген - 0,45± 0,005 (t = 4,5; р<0,01), на протеиновые - 0,56 ± 0,007 (t = 5,5; р < 0,01)ед. ОП. Концентрация других изотипов была ниже или равна показателям доноров. Эти больные характеризовались наличием осложнений по типу лепрозной узловатой эритемы (ЛУЭ).

Таким образом, исследование спектра иммуноглобулинов класса IgG у серопозитивных больных в состоянии клинического регресса показало, что уровень их различных изотипов отражает течение специфического лепрозного процесса и коррелирует с наличием осложнений и бактериальной нагрузкой, что согласуется с выводами Hussain R. и соавт. (1995), и может служить индикатором прогрессирования заболевания.

Однако, в отличие от Skvaril F. и соавт. (1986), отдающих ведущую роль субклассам IgG₁ и IgG₂ в зависимости от бактериальной нагрузки, мы считаем, что наиболее показателен в этом отношении изотип IgG₃, концентрация которого остаётся высокой при отсутствии микобактерий в скарификатах и соскобах со слизистых оболочек носа (БИН=0), но наличии их в биоптатах кожи. С нашей точки зрения, субклассы IgG₁ и IgG₂, мало зависимы от бактериальной нагрузки и не имеют конкретного специфического клинико-лабораторного значения. Субкласс IgG₄, по нашим данным, присутствует в высоких концентрациях у больных со сформированными осложнениями лепрозного процесса, что, на наш взгляд, является прогностическим признаком развития аутоиммунных процессов при лепре. Это предположение косвенно подтвеждают Dhandauthapani S. и соавт. (1992), выявившие корреляцию между IgG₄ и IgE, появление которого характерно для наличии аллергических реакций. Умеров Ж.Г. (1987) также указывает на возможность наличия аутосенсибилизации при возникновении невритов у больных лепрой в силу тропности последней к нервной ткани.

Выводы

Таким образом, определение субклассов иммуноглобулинов IgG класса имеет важное значение в процессе клинического мониторинга за больными в активной стадии заболевания с целью повышения эффективности проводимой химиотерапии и предупреждения активации лепрозного процесса.