На территории средней полосы европейской части России широко распространены 7–8 видов растений рода тимьян (Thymus L.) [1], которые заготовители не различают и заготавливают под названием «Трава чабреца». Однако ресурсы тимьяна ползучего (чабреца) в данном регионе Росси сильно истощены и практически отсутствуют. Тимьян ползучий на территории средней полосы европейской части России широко замещается тимьяном Маршалла который различается с чабрецом как по морфологическим признакам, так и по качественному и количественному составу биологически активных веществ, содержащихся в нем [2, 3], тем более что ряд групп биологически активных веществ в траве других видов тимьяна практически не изучены.
В связи с этим нами проведено изучение состава карбоновых кислот травы тимьяна Маршалла.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования служила трава тимьяна Маршалла, заготовленная в Курской области в 2014 году в фазу цветения растений.
Исследование состава карбоновых кислот проводили методом хромато-масс-спектрометрии [4]. Для анализа 50,0 мг измельченного воздушно-сухого сырья тимьяна Маршалла помещали в виалу «Agilent» на 2,0 мл, прибавляли 50,0 мкг тридекана в гексане (внутренний стандарт) и 1,0 мл метилирующего агента (14 % BCl3 в спирте метиловом, Supelco 3–3033). Смесь выдерживали в герметично закрытой виале 8 часов при температуре 65 °С. За это время из растительного материала полностью извлекается жирное масло, происходит его гидролиз на составляющие жирные кислоты с одновременным их метилированием. Одновременно метилируются свободные органические и фенолкарбоновые кислоты. Далее реакционную смесь сливали с растительного сырья и разбавляли 1,0 мл воды очищенной. Извлечение метиловых эфиров жирных и органических кислот проводили хлористым метиленом, а затем их хроматографировали на газо-жидкостном хроматографе Agilent Technologies 6890 с масс-спектрометрическим детектором 5973N. Условия анализа: хроматографическая колонка капиллярная INNOWAX, длиной 30 м и внутренним диаметром 0,25 мм; газ-носитель-гелий с постоянным потоком – 1,2 мл/мин, объем пробы – 2 мкл; скорость ввода пробы 1,2 мл/мин в течение 0,2 минут; температура термостата программируется от 50 до 250 °С со скоростью 4 °С/мин; температура нагревания ввода пробы 250 °С. Идентификацию карбоновых кислот осуществляли путем сравнения с заведомыми образцами метиловых эфиров, а также используя библиотеку масс-спектров NISTOS и WILLEY 2007 с общим количеством спектров более 470000 в сочетании с программами для идентификации AMDIS и NIST. Концентрацию индивидуальных жирных и органических кислот рассчитывали методом внутреннего стандарта [5, 6]. Повторность проведенных определений – трехкратная.
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты изучения жирнокислотного состава травы тимьяна Маршалла показали наличие 16 соединений (табл. 1).
Таблица 1
Состав жирных кислот травы тимьяна мелового
|
№ п/п |
Наименование жирных кислот |
Содержание жирных кислот, мг/кг |
|
1. |
Капроновая |
28,09 |
|
2. |
Левулиновая кислота |
3543,81 |
|
3. |
Лауриновая кислота |
48,42 |
|
4. |
a-фурановая кислота |
30,74 |
|
5. |
Миристиновая кислота |
123,79 |
|
6. |
Пальмитиновая кислота |
1488,50 |
|
7. |
Пальмитолеиновая кислота |
64,35 |
|
8. |
Гептадекановая кислота |
31,62 |
|
9. |
Стеариновая кислота |
132,53 |
|
10. |
Олеиновая кислота |
252,37 |
|
11. |
Линолевая кислота |
434,15 |
|
12. |
Линоленовая кислота |
554,59 |
|
13. |
Арахиновая кислота |
138,56 |
|
14. |
Бегеновая кислота |
167,34 |
|
15. |
Тетракозоновая кислота |
177,20 |
|
16. |
Пентадекановая кислота |
13,50 |
Среди жирных кислот в большом количестве содержится пальмитиновая кислота (1448,50 мг/кг), линолевая кислота (434,15 мг/кг), левулиновая кислота (3543,81 мг/кг) и линоленовая кислота (554,59 мг/кг).
Органические кислоты представлены 9 соединениями (табл. 2).
Таблица 2
Состав органических кислот травы тимьяна мелового
|
№ п/п |
Наименование органических кислот |
Содержание органических кислот, мг/кг |
|
1. |
Щавелевая кислота |
881,35 |
|
2. |
Малоновая кислота |
1603,21 |
|
3. |
Фумаровая кислота |
26,93 |
|
4. |
Янтарная кислота |
379,10 |
|
5. |
Бензойная кислота |
59,50 |
|
6. |
Яблочная кислота |
979,10 |
|
7. |
Азелаиновая кислота |
378,13 |
|
8. |
Лимонная кислота |
1885,16 |
|
9. |
Гексадикарбоновая кислота |
89,79 |
Среди органических кислот в траве тимьяна Маршалла преобладает лимонная кислота (1885,16 мг/кг), яблочная кислота (979,10 мг/кг), малоновая кислота (1603,21 мг/кг) и щавелевая кислота (881,35 мг/кг).
Фенолкарбоновые кислоты представлены в табл. 3.
Таблица 3
Фенолкарбоновые кислоты травы тимьяна Маршалла
|
№ п/п |
Наименование фенолкарбоновых кислот |
Содержание фенолкарбоновых кислот, мг/кг |
|
1. |
Ванилиновая кислота |
173,20 |
|
2. |
Сиреневая кислота |
134,63 |
|
3. |
Гентизиновая кислота |
97,17 |
|
4. |
Феруловая кислота |
303,10 |
|
5. |
n-оксибензойная |
43,20 |
|
6. |
Фенилуксусная кислота |
21,50 |
|
7. |
Салициловая кислота |
194,63 |
|
8. |
n-кумаровая |
40,15 |
|
9. |
4-гидрокси-3-метокси бензойная |
32,35 |
Наибольшее содержание у травы тимьяна Маршалла отмечено для феруловой (303,10 мг/кг), салициловой (194,63 мг/кг), ванилиновой кислот (173,20 мг/кг).
Выводы
Проведено изучение карбоновых кислот травы тимьяна Маршалла, методом хромато-масс-спектрометрии.
Установлено, что карбоновые кислоты тимьяна Маршалла представлены 35 соединениями. Среди жирных кислот преобладают: палимитиновая (1448,50 мг/кг), линоленовая кислота (554,59 мг/кг), левулиновая (3543,81 мг/кг) и линолевая (435,15 мг/кг); среди органических кислот: лимонная (1885,16 мг/кг), малоновая (1603,21 мг/кг), щавелевая (881,35 мг/кг) и яблочная (979,10 мг/кг); среди фенолкарбоновых – феруловая (303,10 мг/кг), салициловая (194,63 мг/кг), ванилиновая (173,20 мг/кг).
Рецензенты:
Раздорская И.М., д.фарм.н., профессор, заведующая кафедрой управления и экономики фармации, ГБОУ ВПО КГМУ, г. Курск;
Сипливая Л.Е., д.б.н., профессор, заведующая кафедрой фармацевтической, токсикологической и аналитической химии, ГБОУ ВПО КГМУ, г. Курск.
Работа поступила в редакцию 10.04.2015.