Ампициллин и амоксициллин обладают широким спектром действия, но подвержены гидролизу β-лактамазами. Для преодоления антибиотикорезистентности ампициллин и амоксициллин предложено применять в комбинации с клавулановой кислотой или сульбактамом (так называемые ингибиторозащищённые пенициллины), которые являются ингибиторами b-лактамаз и предотвращают инактивацию пенициллинов, расширяя таким образом спектр их активности [3].
Для определения воды в препаратах ингибиторозащищённых пенициллинов нормативной документацией (НД) рекомендовано использовать волюмометрическое титрование по методу Карла Фишера (табл. 1).
Таблица 1
Содержание воды в лекарственных препаратах ингибиторозащищённых пенициллинов согласно требованиям НД [4]
|
МНН |
Форма выпуска |
Содержание воды |
|
Ампициллин/ сульбактам |
Порошок для приготовления раствора для внутримышечного и внутривенного введения |
Не более 2,0 % |
|
Амоксициллин/ клавулановая кислота |
Таблетки |
Не более 7,5 % при содержании амоксициллина в 1 таблетке ≤ 250 мг |
|
Не более 10,0 % при содержании 250 мг < амоксициллина в 1 таблетке ≥ 500 мг |
||
|
Не более 11,0 % при содержании амоксициллина в 1 таблетке > 500 мг |
||
|
Порошок для приготовления суспензии для приема внутрь |
Не более 7,5 % при содержании амоксициллина < 40 мг/мл |
|
|
Не более 8,5 % при содержании 40 мг/мл ≤ амоксициллина ≥ 50 мг/мл |
||
|
Не более 11,0 % при содержании 50 мг/мл < амоксициллина ≥ 80 мг/мл |
||
|
Не более 12,0 % при содержании амоксициллина > 80 мг/мл |
Перспективно применение для определения воды гальваностатической кулонометрии, в частности, кулонометрического титрования электрогенерированным йодом по К. Фишеру [2, 5]. Возможность кулонометрического определения воды в субстанциях и лекарственных формах ампициллина и амоксициллина была показана в статье [1]. Целью настоящего исследования явилась разработка унифицированных методик определения воды кулонометрическим титрованием по Фишеру в лекарственных препаратах, содержащих ампициллин и амоксициллин в комбинации с сульбактамом и клавулановой кислотой соответственно.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования служили ингибиторозащищенные пенициллины в лекарственных формах: порошок для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения (порошок д/инъекций) ампициллина/сульбактама, таблетки, покрытые плёночной оболочкой (таблетки п/о), и порошок для приготовления суспензии для приёма внутрь (порошок д/сусп. внутрь) амоксициллина/клавулановой кислоты различных производителей.
Определение воды по методу Фишера проводили на кулонометре «Эксперт-007» («Эконикс-Эксперт», Россия) при постоянной силе тока 50 мА. Основным блоком прибора является кулонометрическая ячейка c диафрагмой, состоящая из большей по объему анодной камеры с платиновым генераторным электродом и меньшей катодной камеры с платиновым вспомогательным электродом. В качестве анолита использовался модифицированный реактив Фишера Аква М-Coulomat AG («Акваметрия», Россия), в качестве католита Аква М-Coulomat CG («Акваметрия», Россия). Конечную точку титрования определяли бипотенциометрически с игольчатыми платиновыми электродами (поляризующий ток 2 мкА). Изоляцию внутреннего объема ячейки от атмосферной влаги достигали использованием осушительной трубки, заполненной индикаторным силикагелем, и герметизацией шлифовых соединений. Контроль герметичности электрохимической ячейки проводили путем измерения дрейфа, который не превышал 0,03 мг H2O/мин. Пригодность ячейки к работе проверяли по стандартному раствору HYDRANAL-Check Solution 1.00 с содержанием воды 1,00 ± 0,03 мг H2O/г («Fluka», Германия). В работе использовали растворители с содержанием воды не более 0,03 %, лабораторный шейкер «Vortex Genius 3» («IKA», Германия) и аналитические весы HTR-220CE («Shinko Denshi», Япония).
Методика кулонометрического определения воды в лекарственных препаратах ингибиторозащищённых пенициллинов. На кулонометре включали кнопку «Измерение». По сигналу прибора «Введите пробу» в кулонометрическую ячейку вносили около 1 мл испытуемого раствора шприцом, который взвешивали до и после ввода пробы. Время перемешивания составляло 15 с. Титрование проходило автоматически. По окончании измерения содержание воды в пробе в мг выводилось на дисплей кулонометра. Время титрования пробы составляло около 4 минут. Параллельно проводили контрольный опыт.
Испытуемый раствор готовили, растворяя точную навеску измельченных таблеток, порошка для инъекций и порошка для приготовления суспензии в карбиноле (марки «х.ч.») − для препарата ампициллина/сульбактама и в реактиве Аква М-Coulomat AG для всех остальных с использованием лабораторного шейкера для препаратов амоксициллина/клавулановой кислоты.
Результаты исследования и их обсуждение
Содержание воды в лекарственных препаратах определяли на трех уровнях концентрации вещества в диапазоне 70–130 % от уровня, принятого за 100 % (табл. 2), и в 6 повторностях на среднем уровне (табл. 3). Относительное стандартное отклонение (Sr) не превышало 0,020.
Таблица 2
Определение воды на трёх уровнях концентрации (n = 5, Р = 95 %)
|
МНН |
Коммерческое название, дозировка, серия |
Содержание субстанции в пробе, % |
Найдено воды, % |
Sr |
|
Ампициллин/ сульбактам |
Амписид1 Порошок д/инъекций 1000 мг + 500 мг Серия 12К36041А |
7,0 10,0 13,0 |
0,60 ± 0,01 0,62 ± 0,01 0,61 ± 0,02 |
0,019 0,017 0,020 |
|
Амоксициллин/ клавулановая кислота |
Аугментин2 Таблетки п/о 250 мг + 125 мг Серия 647188 |
1,0 1,5 2,0 |
7,26 ± 0,12 7,25 ± 0,15 7,28 ± 0,15 |
0,012 0,017 0,017 |
|
Аугментин2 Таблетки п/о 500 мг + 125 мг Серия 654125 |
1,0 1,5 2,0 |
7,42 ± 0,14 7,43 ± 0,11 7,41 ± 0,13 |
0,015 0,012 0,014 |
|
|
Амоксиклав3 Таблетки п/о 500 мг + 125 мг Серия ED6404 |
1,0 1,5 2,0 |
7,96 ± 0,16 7,93 ± 0,11 7,90 ± 0,12 |
0,016 0,011 0,012 |
|
|
Экоклав4 Таблетки п/о 500 мг + 125 мг Cерия 80414 |
1,0 1,5 2,0 |
7,26 ± 0,12 7,29 ± 0,12 7,23 ± 0,09 |
0,014 0,013 0,018 |
|
|
Аугментин2 Таблетки п/о 875 мг + 125 мг Серия 657554 |
1,0 1,5 2,0 |
6,87 ± 0,04 6,92 ± 0,06 6,91 ± 0,08 |
0,005 0,008 0,008 |
|
|
Амоксиклав3 Порошок д/сусп. внутрь 125 мг + 31,25 мг в 5 мл Серия EA4867 |
1,4 2,0 2,6 |
4,55 ± 0,09 4,51 ± 0,11 4,57 ± 0,10 |
0,016 0,019 0,018 |
|
|
Амоксиклав3 Порошок д/сусп. внутрь 250 мг + 62,5 мг в 5 мл Серия ЕВ2035 |
1,4 2,0 2,6 |
5,01 ± 0,09 5,09 ± 0,10 5,10 ± 0,06 |
0,014 0,015 0,009 |
|
|
Аугментин2 Порошок д/сусп. внутрь 400 мг + 57,5 мг в 5 мл Серия 649468 |
1,0 1,5 2,0 |
8,63 ± 0,16 8,64 ± 0,08 8,60 ± 0,12 |
0,015 0,007 0,011 |
|
|
Аугментин ЕС2 Порошок д/сусп. внутрь 600 мг + 42,9 мг в 5 мл Серия 868 |
1,0 1,5 2,0 |
9,95 ± 0,12 9,95 ± 0,13 10,00 ± 0,17 |
0,010 0,011 0,013 |
Примечание. 1«Мустафа Невзат Илач Санаи А.Ш.», Турция 3«Лек Д.Д.», Словения, 2«Смит Кляйн Бичем ПиЭлСи», Великобритания 4«АВВА РУС», Россия.
Ввиду того, что некоторые вспомогательные вещества таблеток и суспензии не полностью растворяются в выбранном растворителе, было проведено определение содержания воды в зависимости от времени растворения на примере таблеток Амоксиклава 500 мг + 125 мг и порошка для приготовления суспензии для приёма внутрь Аугментина 400 мг + 57,5 мг в 5 мл (рисунок). Как видно из рисунка, через 30 минут вода полностью извлекается из пробы и найденное содержание воды с течением времени не изменяется.
а)
б)
Зависимость содержания воды от времени растворения в таблетках п/о Амоксиклава (а) и порошке для приготовления суспензии для приёма внутрь Аугментина (б)
Следует отметить, что антибиотики являются лекарственными средствами, наиболее подверженными действию влаги, и производители, защищая продукцию от внешнего воздействия, применяют дополнительные средства осушения при хранении. Из исследованных нами объектов оригинальный препарат − Аугментин, таблетки п/о N14 («Смит Кляйн Бичем ПиЭлСи», Великобритания) – был упакован в блистер из алюминия/поливинилхлорида, в каждом блистере находился пакетик с силикагелем в упаковке из ламинированной алюминиевой фольги, по 2 упаковки из фольги в картонной пачке; дженерический препарат − Амоксиклав, таблетки п/о N14 («Лек Д.Д». Словения), находился во флаконе темного стекла, укупоренном металлической навинчивающейся крышкой с контрольным кольцом с перфорацией и прокладкой из полиэтилена низкой плотности внутри, содержащем силикагель в контейнере круглой формы красного цвета с надписью «несъедобно», в картонной пачке.
Таблица 3
Метрологические характеристики определения воды на среднем уровне концентрации (n = 6, Р = 95 %)
|
МНН |
Коммерческое название, дозировка, серия |
Найдено воды %, Xi |
Метрологические характеристики |
|
Ампициллин/ сульбактам |
Амписид1 Порошок д/инъекций 1000 мг + 500 мг Серия 12К36041А |
0,61; 0,60; 0,61; 0,60; 0,62; 0,59 |
Xср = 0,61 ΔXср = 0,01 S = 0,0105 Sr = 0,017 εср, % = 2 |
|
Амоксициллин/ клавулановая кислота |
Аугментин2 Таблетки п/о 250 мг + 125 мг Серия 647188 |
7,15; 7,26; 7,24; 7,35; 7,18; 7,31 |
Xср = 7,25 ΔXср = 0,08 S = 0,0757 Sr = 0,01 εср, % = 1 |
|
Аугментин2 Таблетки п/о 500 мг + 125 мг Серия 654125 |
7,31; 7,51; 7,52; 7,41; 7,37; 7,47 |
Xср = 7,43 ΔXср = 0,09 S = 0,0830 Sr = 0,011 εср, % = 1 |
|
|
Амоксиклав3 Таблетки п/о 500 мг + 125 мг Серия ED6404 |
7,80; 8,06; 7,97; 7,85; 7,91; 7,86 |
Xср = 7,91 ΔXср = 0,1 S = 0,0941 Sr = 0,012 εср, % = 1 |
|
|
Экоклав4 Таблетки п/о 500 мг + 125 мг Cерия 80414 |
7,27; 7,22; 7,08; 7,29; 7,41; 7,30 |
Xср = 7,26 ΔXср = 0,11 S = 0,1087 Sr = 0,015 εср, % = 2 |
|
|
Аугментин2 Таблетки п/о 875 мг + 125 мг Серия 657554 |
6,91; 6,90; 6,84; 6,92; 6,99; 6,97 |
Xср = 6,92 ΔXср = 0,06 S = 0,0029 Sr = 0,008 εср, % = 1 |
|
|
Амоксиклав3 Порошок д/сусп. внутрь 125 мг + 31,25 мг в 5 мл Серия EA4867 |
4,51; 4,55; 4,49; 4,63; 4,51; 4,48 |
Xср = 4,53 ΔXср = 0,06 S = 0,0553 Sr = 0,01 εср, % = 1 |
|
|
Амоксиклав3 Порошок д/сусп. внутрь 250 мг + 62,5 мг в 5 мл Серия ЕВ2035 |
5,11; 4,95; 5,23; 5,13; 5,06; 5,01 |
Xср = 5,09 ΔXср = 0,10 S = 0,0981 Sr = 0,019 εср, % = 2 |
|
|
Аугментин2 Порошок д/сусп. внутрь 400 мг + 57,5 мг в 5 мл Серия 649468 |
8,58; 8,60; 8,72; 8,63; 8,73; 8,68 |
Xср = 8,66 ΔXср = 0,07 S = 0,0628 Sr = 0,007 εср, % = 1 |
|
|
Аугментин ЕС2 Порошок д/сусп. внутрь 600 мг + 42,9 мг в 5 мл Серия 868 |
9,89; 9,79; 10,02; 10,18; 10,06; 9,97 |
Xср = 9,99 ΔXср = 0,14 S = 0,1358 Sr = 0,014 εср, % = 1 |
Примечание. 1«Мустафа Невзат Илач Санаи А.Ш.», Турция 3«Лек Д.Д.», Словения, 2«Смит Кляйн Бичем ПиЭлСи», Великобритания 4«АВВА РУС», Россия.
Выводы
Установлено, что по содержанию воды изученные лекарственные препараты ингибиторозащищённых пенициллинов отвечают требованиям нормативной документации. Разработанные методики определения содержания воды кулонометрическим титрованием по Фишеру в лекарственных препаратах, содержащих ампициллин и амоксициллин в комбинации с сульбактамом и клавулановой кислотой, соответственно, могут быть использованы для включения в раздел нормативной документации «Вода».
Рецензенты:Егорова С.Н., д.фарм.н., профессор, заведующая кафедрой фармации факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов, ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Казань;
Камаева С.С., д.фарм.н., доцент, доцент кафедры фармацевтической технологии, ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Казань.
Работа поступила в редакцию 12.02.2015.