Последний месяц беременности является одним из критических физиологических периодов, который существенно влияет на состояние иммунной системы организма матери. Это прежде всего связано с интенсивным ростом плода, окончанием процессов формирования его органов и тканей [1]. В этот период организм беременного животного подвержен воздействию ряда стрессов, в том числе алиментарного характера вследствие значительных нарушений кормления и дефицита жизненно необходимых для функционирования иммунной системы микроэлементов. Кроме того, с приближением отёла концентрация эстрогенов в крови остаётся высокой или даже возрастает. Высокий уровень эстрогенов в крови является ведущим регулятором, снижающим аппетит [2], что наряду с неполноценным кормлением приводит к супрессии Т-зависимого и Т-независимого иммунного ответа. Роды являются сильным стресс-фактором, стимулирующим секреторную функцию мозгового слоя надпочечников, что приводит к повышенному синтезу гормонов, вызывающих развитие иммунодефицитного состояния и снижение естественной резистентности организма матери, являясь предпосылкой для развития патологий послеродового периода [3].
Поскольку проблема акушерско-гинекологических патологий у коров находится в тесной взаимосвязи с нарушениями развития потомства, подход к решению данной проблемы должен быть комплексным с учетом биологической системы «мать – потомство». Поэтому повышение уровня неспецифической резистентности и воздействие на факторы гуморального ответа должно осуществляться с учетом физиологических особенностей иммунного статуса беременных коров, тем самым способствуя не только повышению уровня иммунного ответа, но и профилактике патологии послеродового периода различной этиологии. Такой подход обеспечит профилактику, как острых послеродовых заболеваний, так и антенатальное формирование здорового потомства, поскольку первый иммунный импульс новорожденного обеспечивается благодаря той микрофлоре, которая будет получена им из родовых путей матери в момент родов [4, 5].
Оптимальным средством фармакокоррекции иммунного статуса организма стельных коров является иммуномодулятор нового поколения «НИКА-ЭМ», который изготавливается из биологического сырья эмбрионального происхождения, содержащего естественные компоненты: аминокислоты, витамины, ферменты, гормоны, биогенные стимуляторы, в том числе оптимальный набор органических кислот, макро- и микроэлементы, витамины, присущие живой клетке или ткани и осуществляющие ее стимуляцию по мере функционального запроса организма.
Таким образом, проблема физиологически адекватной фармакокоррекции иммунного статуса и репродуктивных качеств у коров в условиях современного промышленного скотоводства и экологически безопасной направленности продуктов животноводств посредством использования иммуномодулятора нового поколения является актуальной.
Целью исследований являлась разработка схемы применения иммуномодулятора нового поколения для повышения уровня неспецифической резистентности организма и профилактики послеродовых осложнений у коров. Задачей исследований являлось изучение иммунологических параметров крови и состояния репродуктивных органов у коров до и после опыта.
Работа была выполнена в течение 2014 года на кафедре терапии и пропедевтики ФГБОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», лаборатории молекулярной диагностики и биотехнологии ДГАУ. Научно-производственные опыты, апробация и производственные испытания были проведены в ООО «Учхоз «Донское» Октябрьского района Ростовской области.
Для проведения эксперимента были подобраны 2 группы животных: опытная и контрольная по 15 голов коров на последнем месяце стельности.
Коровам опытной группы вводили препарат «НИКА-ЭМ» подкожно в дозе 0,05 мл на кг массы (в среднем 15–20 мл на животное) трижды с интервалом 7 дней за месяц до отела. Животным контрольной группы вводили подкожно физиологический раствор в этом же объеме.
Образцы крови у коров опытной и контрольной групп брали трижды: до начала опыта, после родов и через месяц после родов. В сыворотке крови определяли уровень иммуноглобулинов при помощи иммуноферментного анализа на иммуноферментных анализаторах StatFax 303+ и «Пикон». Так же были проведены исследования уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), а для определения функциональной активности нейтрофилов крови использовали реакцию восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест по А.Н. Маянскому). С целью контроля течения послеродового периода осуществляли клинические наблюдения за животными опытных и контрольных групп на 3–4, 7–8 и 12–14 сутки после отёла.
В результате проведенных иммунологических исследований было установлено, что уровень сывороточного иммуноглобулина А у коров опытной группы до проведения эксперимента равнялся 1,14 ± 0,05 мг/мл;
иммуноглобулина G – 13,67 ± 1,4 мг/мл; иммуноглобулина М – 1,0 ± 0,2 мг/мл; а у коров контрольной группы – 1,1 ± 0,02; 12,17 ± 0,2; 0,94 ± 0,1 мг/мл соответственно (табл. 1).
После отела количество иммуноглобулинов в сыворотке крови у коров опытной группы было более высоким по сравнению с показателями коров контрольной группы. Так, количество Ig G в сыворотке крови у коров опытной группы было на 43 % больше, Ig A – на 26 %, а Ig M – на 72 %. Достоверных изменений уровня иммуноглобулинов у коров контрольной группы после отела не наблюдалось.
После проведения эксперимента гуморальные факторы иммунитета у коров опытной группы были выше, что свидетельствовало о более высоком уровне резистентности организма (табл. 1). Уровень сывороточных иммуноглобулинов у коров
опытной группы составлял: Ig G – 20,05 ± 1,07 мг/мл; Ig A – 1,71 ± 0,03 мг/мл; Ig M – 1,85 ± 0,1 мг/мл; таким образом, показатели гуморального иммунитета опытной группы были больше, чем в контрольной, на 93,7; 125; 198 % соответственно.
Таблица 1
Динамика показателей гуморального иммунитета у коров
Показатели |
Группы животных |
|||||
Опытная |
Контрольная |
|||||
До опыта |
После отела |
На 28-й день после отела |
До опыта |
После отела |
На 28-й день после отела |
|
IgG, мг/мл |
13,67 ± 1,4 |
19,67 ± 1,47* |
20,05 ± 1,07* |
12,17 ± 0,2 |
14,17 ± 0,24 |
10,35 ± 0,56* |
IgA, мг/мл |
1,14 ± 0,05 |
1,44 ± 0,07* |
1,71 ± 0,03** |
1,1 ± 0,02 |
0,9 ± 0,01 |
0,76 ± 0,08 |
IgM, мг/мл |
1,0 ± 0,2 |
1,72 ± 0,19* |
1,85 ± 0,1** |
0,94 ± 0,1 |
0,8 ± 0,12 |
0,62 ± 0,02 |
Примечание: * – Р < 0,05; ** – Р < 0,01; *** – Р < 0,001.
Уровень циркулирующих иммунных комплексов у коров обеих групп до проведения эксперимента был в пределах физиологических колебаний (табл. 2).
Таблица 2
Динамика факторов неспецифической резистентности у коров
Показатели |
Группы животных |
|||||
Опытная |
Контрольная |
|||||
До опыта |
После |
На 28-й день после отела |
До опыта |
После |
На 28-й день после отела |
|
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК): |
||||||
3 % |
54,8 ± 8,23 |
50,3 ± 7,3 |
34,6 ± 6,98** |
57,6 ± 8,27 |
77,1 ± 6,7 |
117,2 ± 9,08** |
4 % |
120,8 ± 12,95 |
115,1 ± 10,5 |
65,9 ± 11,6** |
109,0 ± 11,79 |
139,2 ± 8,7 |
215,0 ± 12,6** |
Коэффициент (4/3 %) |
2,2 ± 0,15 |
2,29 ± 0,2 |
1,90 ± 0,3 |
1,98 ± 0,08 |
1,81 ± 0,05 |
1,86 ± 0,1 |
Реакция восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест): |
||||||
Спонтанный |
32,6 ± 2,74 |
62,8 ± 1,4 |
165,6 ± 1,9** |
52,8 ± 7,14 |
42,3 ± 5,4 |
14,4 ± 3,56** |
Стимулированный |
47,6 ± 1,7 |
87,5 ± 1,9 |
184,4 ± 1,3** |
74,6 ± 10,51 |
64,6 ± 8,25 |
58,8 ± 5,7 |
Индекс стимуляции |
1,51 ± 0,19 |
1,39 ± 0,19 |
1,12 ± 0,2 |
1,41 ± 0,07 |
1,53 ± 0,03 |
4,14 ± 0,2** |
Примечания: * – Р < 0,05; ** – Р < 0,01; *** – Р < 0,001.
После отела достоверных изменений показателей циркулирующих иммунных комплексов у коров опытной группы не наблюдалось, а у коров контрольной группы наблюдалось их увеличение и снижение показателей НСТ-теста, что указывало на развитие воспалительного процесса инфекционной этиологии и снижение уровня резистентности организма животных.
После завершения эксперимента у коров опытной группы уровень циркулирующих иммунных комплексов был достоверно ниже и составлял: ЦИК-3 % – 34,6 ± 6,98; ЦИК-4 % – 65,9 ± 11,6; коэффициент (4/3 %) – 1,90 ± 0,3, что свидетельствовало об отсутствии иммунопатологического процесса в организме коров опытной группы, поскольку уровень циркулирующих иммунных комплексов является показателем гуморального иммунитета (В-системы).
Показатели НСТ-теста характеризовались достоверным увеличением спонтанного НСТ-теста – до 165,6 ± 1,9; стимулированного НСТ-теста – до 184,4 ± 1,3; индекса стимуляции – до 1,12 ± 0,2, что свидетельствовало о повышении функциональной активности нейтрофилов. Разница в показателях НСТ-теста по отношению друг к другу указывает на положительную активность кислороднезависимой стадии фагоцитоза, что является физиологической характеристикой.
У коров контрольной группы наблюдалось увеличение уровня циркулирующих иммунных комплексов по сравнению с коровами опытной группы: ЦИК-3 % – на 228 %; ЦИК-4 % – 226,2 %; достоверных изменений коэффициента (4/3 %) не наблюдалось.
Показатели НСТ-теста у коров контрольной группы по сравнению с показателями опытной группы характеризовались достоверным уменьшением: спонтанный НСТ-тест – на 91,3 %; стимулированный НСТ-тест – на 68,3 %, – а индекс стимуляции – увеличением на 269,6 %, что было вызвано усугублением течения острого воспалительного процесса и низким уровнем неспецифической резистентности организма.
В результате проведенных клинико-акушерских исследований было установлено, что у 33,3 % животных контрольной группы были выявлены патологии послеродового периода. У животных опытной группы наблюдалось нормальное течение послеродового периода.
Таким образом, применение биологически активного препарата с системным иммуномодулирующим и лечебно-профилактическим действием на основе регионального экологически чистого сырья животного растительного и микробного происхождения «НИКА-ЭМ» в период стельности позволяет повысить уровень неспецифической резистентности, показатели гуморального иммунитета, предупредить развитие иммуносупрессивных состояний в сложный для жизнедеятельности самки период, а также на фоне иммуностимуляции сократить риск развития заболеваний послеродового периода на 33,3 %, тем самым повысить репродуктивные качества коров.
Рецензенты:Войтенко Л.Г., д.в.н., профессор, заведующая кафедрой акушерства, хирургии и физиологии домашних животных, ФГБОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», п. Персиановский;
Душкин Е.В., д.в.н., доцент кафедры терапии и пропедевтики, ФГБОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», п. Персиановский.
Работа поступила в редакцию 19.12.2014.