Экссудативная энтеропатия – патологическое состояние, характеризующееся потерей плазменных белков через желудочно-кишечный тракт; сопровождается признаками нарушения кишечного всасывания, следствием чего является развитие выраженной гипопротеинемии, отечного синдрома. Гипопротеинемия развивается в короткие сроки, т.к. синтез альбумина печенью не восполняет потери из кровяного русла в просвет кишечника. Поступление альбумина через прямую кишку может предотвратить потерю плазменных белков через желудочно-кишечный тракт.
Поэтому разработка новой лекарственной формы – ректальных суппозиториев, содержащих альбумин, является актуальной задачей. Для усиления фармакологического эффекта и улучшения процесса всасывания целесообразно вводить природные биологически активные вещества, к числу которых относится прополис. Он богат природными фенольными соединениями, обладающими комплексным
действием [7].
Целью настоящего исследования явился выбор оптимального состава, разработка технологии и исследование некоторых фармакологических свойств суппозиториев, содержащих альбумин и экстракт прополиса.
Материалы и методы исследования
Для выбора основы были исследованы гидрофильные, липофильные и дифильные основы, в состав которых входили различные по своей природе вспомогательные вещества. Суппозитории готовили массой 3,0–3,5 г с содержанием альбумина 0,05 г и спиртового экстракта прополиса – 0,3 мл. Выбор оптимального состава проводили в несколько этапов. Качество основ оценивали визуально, по времени полной деформации или растворения, согласно методикам, приведенным в ГФ XI издания, выпуск 2, с. 152 [1]. Изучение фармацевтической доступности проводили методом диффузии в агар и диализа через полупроницаемую мембрану. На основании проведенных предварительных исследований установили, что максимальное высвобождение действующих веществ наблюдается из липофильных основ. Были рассмотрены композиции, состав которых приведен в табл. 1.
Таблица 1
Составы суппозиторных основ из расчета на 10 суппозиториев
|
Номер |
Твердый жир типа А |
Масло какао |
Лутрол F-68 |
Кремофор RH-40 |
Эмульгатор Т2 |
Твин 80 |
|
1 |
25,0 |
2,0 |
||||
|
2 |
25,0 |
2,0 |
||||
|
3 |
25,0 |
1,0 |
1,0 |
|||
|
4 |
25,0 |
2,0 |
||||
|
5 |
25,0 |
1,0 |
1,0 |
|||
|
6 |
25,0 |
2,0 |
||||
|
7 |
25,0 |
2,0 |
||||
|
8 |
25,0 |
2,0 |
||||
|
9 |
25,0 |
1,0 |
1,0 |
|||
|
10 |
25,0 |
2,0 |
||||
|
11 |
25,0 |
1,0 |
1,0 |
|||
|
12 |
25,0 |
2,0 |
Известно, что альбумин прочно связывает ионы меди, которые переносятся к печени, где активно используются для синтеза церулоплазмина (ЦП). Он является одним из основных антиоксидантов плазмы крови, проявляя как специфическую, так и неспецифическую активность [3, 4]. Специфическая активность, связанная со снижением уровня активных метаболитов кислорода, может быть реализована несколькими путями. В плазме крови ЦП окисляет Fe2+ до Fe3+, после чего окисленные ионы железа связываются трансферрином и транспортируются в гепатоциты и развивающиеся ретикулоциты. В связи с этим целесообразно было установить влияние альбумина на уровень ЦП и гемоглобина при острой кровопотере [5].
Определение проводили на белых крыcах самцах массой 200–250 г.
В каждой группе было по 10 животных. Было проведено изучение влияния суппозиториев с альбумином на купирование последствий экспериментальной геморрагической анемии у крыс. После шести кровопотерь у крыс развивалась острая анемия, выражавшаяся в снижении концентрации гемоглобина до 61 % от исходного уровня, уровень сывороточного железа снижался в 3 раза. В течение 5 суток крысам контрольной группы внутрибрюшинно в дозе 10 мг/сут вводился альбумин для инфузий, а экспериментальным животным – суппозитории с таким же количеством альбумина и экстрактом прополиса. Определение ЦП контролировали по методу Ревина в модификации Камышникова, основанному на окислении п-фенилендиамина при участии ЦП [2].
Результаты исследования
и их обсуждение
Предварительный выбор оптимального состава проводили визуально. Установлено, что суппозитории, приготовленные на масле какао, неоднородны, с заметным разделением фаз, имеют вязкую и зернистую структуру. Лекарственные формы, приготовленные с использованием твердого жира типа А, представляют однородную плотную массу, поэтому дальнейшие исследования проводили с составами 1–6. При определении времени полной деформации было установлено, что для всех суппозиториев оно находится в пределах от 8 до 13 минут, что полностью соответствует требованиям общей статьи ГФ XI издания. Для определения фармацевтической доступности методом диффузии в агар предварительно подобрали оптимальный индикатор, который будет введен в агаровый гель [6]. Наиболее яркое изменение окраски наблюдалось при использовании раствора нингидрина 1 %, который вводили в агар в количестве 5 %. Результаты представлены в табл. 2.
Для получения более достоверных результатов определяли процесс высвобождения методом диализа через полупроницаемую мембрану. Определение концентрации альбумина и экстракта прополиса проводили на спектрофотометре СФ-56 в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. Для количественного определения альбумина разработана методика на основе взаимодействия с малахитовым зеленым. Использовать в данном случае реактивы, содержащие ионы меди, нецелесообразно, так как полученные результаты завышены из-за комплексообразования с фенольными соединениями прополиса. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин определяли методом дифференциальной спектрофотометрии по реакции с алюминия хлоридом.
Таблица 2
Определение фармацевтической доступности суппозиториев с альбумином
|
Номер состава |
15 минут |
30 минут |
45 минут |
60 минут |
120 минут |
180 минут |
|
1 |
13 |
16 |
18 |
20 |
21 |
24 |
|
2 |
11 |
14 |
17 |
18 |
19 |
21 |
|
3 |
14 |
17 |
19 |
21 |
22 |
24 |
|
4 |
14 |
16 |
18 |
20 |
21 |
22 |
|
5 |
11 |
13 |
14 |
16 |
19 |
21 |
|
6 |
16 |
20 |
22 |
24 |
28 |
30 |
Было установлено, что максимальное высвобождение альбумина наблюдается из суппозиториев, изготовленных по прописи 6 (за 30 минут – 86 %), что коррелирует с данными, представленными в табл. 2 (рис. 1).
Рис. 1
На основании проведенных исследований определен состав суппозиториев: твердый жир типа А – 2,5; лутрол F 68 – 0,2; альбумин – 0,05; экстракт прополиса 10 % – 0,3 мл.
Таблица 3
Определение уровня гемоглобина после острой геморрагической анемии
|
Группа животных |
содержание гемоглобина, г/л |
||
|
до введения препаратов |
на 7 сутки |
на 14 сутки |
|
|
Контроль (без введения препаратов) |
|||
|
97,76–99,08 |
99,11–99,65 |
99,92–100,36 |
|
|
Испытуемые животные, получавшие 10 % раствор альбумина внутрибрюшинно |
|||
|
96,46–97,75 |
137,71–141,09 |
142,0–144,6 |
|
|
Испытуемые животные, получавшие суппозитории альбумина |
|||
|
96,43–97,97 |
139,39–140,21 |
142,43–143,97 |
|
Примечание. Содержание гемоглобина у животных до начала эксперимента – 160 ± 1,03 г/л
При исследовании фармакологического эффекта суппозиториев с альбумином и экстрактом прополиса в условиях острой геморрагической анемии установили, что, начиная с 7-х суток после введения препарата, происходит увеличение уровня гемоглобина до 86 % (при введении инфузионного раствора) и 88 % – при введении суппозиториев. В контрольной группе на 7-е сутки уровень гемоглобина составил 65 %, а на 14–72 % (табл. 3)
При определении уровня ЦП установили, что ферроксидазная активность в сыворотке крови, сниженная в результате острой кровопотери, восстановилась до исходного уровня только у крыс, получавших альбумин как внутрибрюшинно, так и ректально (рис. 2).
Рис. 2
Заключение
На основании проведенных экспериментальных исследований разработана технология новой лекарственной формы – суппозиториев ректальных с альбумином и экстрактом прополиса. Показано эффективное применение данной лекарственной формы в условиях острой кровопотери для восстановления уровня гемоглобина и церулоплазмина.
Рецензенты:Лиходед В.А., д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической технологии с курсом биотехнологии БГМУ, г. Уфа, заведующий кафедрой фармации ЮУГМУ, г. Челябинск;
Синицкий А.И., д.м.н., доцент кафедры биохимии ЮУГМУ, г. Челябинск.
Работа поступила в редакцию 05.12.2014.