Актуальность проблемы. Промышленное освоение территорий Тюменской области привело к строительству новых городов и поселков, значительную часть населения которых составляют дети. Дети, родившиеся на Севере, – особая часть популяции. Они не обладают теми наследственными качествами, которые присущи коренным жителям, чьи приспособительные механизмы к экологическим условиям Крайнего Севера формировались на протяжении многих поколений.
Клинический анализ крови входит в перечень обязательных исследований при проведении профилактических осмотров детей. На основе его параметров и в сравнении с референсными интервалами (РИ) делается вывод о состоянии ребенка, принимается определенное клиническое решение.
Соответственно для повышения информативности и достоверности лабораторных тестов необходима разработка точных педиатрических РИ, которые смогут выполнять роль стандарта при сравнении с результатами исследования пациентов.
К сожалению, большинство РИ лабораторных анализов были установлены более трех десятилетий тому назад, при помощи аналитических технологий, которые во многом уже устарели и не могут считаться актуальными с точки зрения современных методов [6]. Пробелы в существующих педиатрических РИ могут привести к неверной трактовке полученных результатов и постановке ошибочного диагноза [2, 4, 9].
В настоящей работе с помощью автоматического гематологического анализатора мы исследовали количество лейкоцитов у здоровых детей в возрасте от 2 до 12 месяцев, определили РИ с помощью современных международных рекомендаций и разделили их в зависимости от возраста и пола.
Следует отметить, что РИ включают результаты обследования только 95 % популяции «практически здоровых детей», у 5 % пациентов лабораторные показатели будут выходить за границы «нормы». В свою очередь, значения, входящие в РИ, не могут гарантировать отсутствие заболевания [5].
Применение РИ, разработанных в конкретных лабораториях, позволяет применить более дифференцированный подход в оценке состояния детей, снизить тенденцию к гипердиагностике (например, необоснованный отвод при плановой вакцинации, применение дополнительных инвазивных методов исследования) и пр.
Таким образом, РИ можно рассматривать как необходимый ориентир в клинической практике врача – педиатра.
Материалы и методы исследования
Мы использовали метод локального установления РИ, применив классический способ со строго определенными критериями прямого отбора референсной группы.
Образцы капиллярной крови получили у 937 здоровых детей при проведении профилактических осмотров с диагнозом «Рутинное обследование состояния здоровья детей (Z 00.1)».
Капиллярную кровь использовали вследствие сложности проведения флеботомии у детей и связанных с этим проблем преаналитического этапа.
Соматическую патологию исключали по ретроспективному анализу амбулаторных карт и анкетированию родителей непосредственно перед процедурой.
Из дальнейшего анализа были исключены образцы крови детей:
● с гемолизом или наличием сгустков в пробах [1];
● повторные образцы, направленные на исследование в этот же период (по данным медицинской информационной системы «МИС-пациент»);
● с уровнем гемоглобина ниже 110 г\л согласно рекомендациям ВОЗ;
● c увеличением скорости оседания эритроцитов более 10 мм\час (по методу Панченкова).
Для оценки динамики количества лейкоцитов полученные данные были выделены по полу и возрасту обследованных детей: мальчики и девочки в группах от 2 до 6 месяцев и от 7 до 12 месяцев включительно.
Периферическую кровь собирали в пробирки с К3-ЭДТА («Microvette», Sarstedt, Германия). Образцы крови получали непосредственно в лаборатории и исследовали в течение 2 часов с момента взятия. Исследование проводили в марте – июле 2013 г., что позволило минимизировать погрешности, связанные с изменением настроек анализатора.
Анализ образцов крови соответствовал рутинной процедуре исследования общего анализа крови, в т.ч. режим работы гематологического анализатора, сервисное обслуживание прибора, проведение калибровки и процедуры внутрилабораторного контроля качества с использованием сертифицированных контрольных материалов при удовлетворительных результататах в Федеральной системе внешней оценки качества клинических лабораторных исследований [1].
Количество лейкоцитов исследовали с помощью автоматического гематологического анализатора
ADVIA 2120 (Siemens Healthcare Diagnostics Inc, США).
Все статистические процедуры выполняли с помощью программы StatSoft STATISTICA 10.
Для определения РИ использовали «Правила установления референтных интервалов и пределов» ГОСТ Р 53022.3-2008 [1] и современные протоколы Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) [8].
Исходя из предпосылки, что характер распределения в ряду количества лейкоцитов в группах здоровых детей отличался от нормального распределения, были применены непараметрические методы.
Из дальнейшего анализа были исключены статистические выбросы по методу Тьюки на основе интервала «нормальных» значений [5].
Полученные результаты были представлены как среднее значение (Хср), 95 % доверительный интервал для среднего (ДИ 95 %), стандартное отклонение (SD), стандартная ошибка среднего (StEr), и 2,5, 5, 50, 95, 97,5 процентили распределения.
РИ ограничили референтными пределами, между которыми располагается 95 % всех референтных значений. Ряд значений РИ расположен между 2,5 и 97,5 ‰ [3].
Для сравнения показателей в группах детей использовали U-критерий Манна-Уитни, различия считали статистически значимыми при p < 0,05.
Результаты исследования
и их обсуждение
Для расчета РИ мы использовали показатели количества лейкоцитов 884 детей, минимальный возраст обследованных cсоставил 2 месяца, максимальный – 12 месяцев.
Результаты исследования представлены в табл. 1.
Расчет РИ представлен в табл. 2 в виде 2,5–97,5 ‰.
Таблица 1
Количество лейкоцитов у детей первого года жизни
|
Параметр |
Пол |
n |
Хср |
ДИ95 % |
StEr |
SD |
2,5‰ |
5‰ |
50‰ |
95‰ |
97,5‰ |
|
Количество лейкоцитов у детей в возрасте от 2 до 6 месяцев |
|||||||||||
|
WBC х 10*9/л |
м |
276 |
8,76 |
0,27 |
0,14 |
2,34 |
5,08 |
5,51 |
8,47 |
13,01 |
14,12 |
|
ж |
266 |
8,94 |
0,27 |
0,14 |
2,30 |
5,36 |
5,79 |
8,67 |
12,97 |
14,01 |
|
|
Количество лейкоцитов у детей в возрасте от 7 до 12 месяцев |
|||||||||||
|
WBC х 10*9/л |
м |
163 |
9,01 |
0,32 |
0,16 |
2,13 |
5,52 |
5,95 |
8,77 |
12,93 |
13,93 |
|
ж |
179 |
9,20 |
0,36 |
0,18 |
2,47 |
5,33 |
5,79 |
8,89 |
13,65 |
14,82 |
|
Таблица 2
Расчет количества лейкоцитов у детей первого года жизни
|
Референсные интервалы лейкоцитов у детей в возрасте от 2 до 6 месяцев |
|||||
|
Параметр |
Мальчики (n = 276) |
Девочки (n = 266) |
U-критерий Манна-Уитни (p) |
||
|
способ расчета |
РИ |
способ расчета |
РИ |
||
|
WBC х 10*9/л |
2,5 – 97,5 ‰ |
5,08 – 14,12 |
2,5 – 97,5 ‰ |
5,36 – 14,01 |
0,484 |
|
Референсные интервалы лейкоцитов у детей в возрасте от 7 до 12 месяцев |
|||||
|
Параметр |
Мальчики (n = 163) |
Девочки (n = 179) |
U-критерий Манна-Уитни (p) |
||
|
способ расчета |
РИ |
способ расчета |
РИ |
||
|
WBC х 10*9/л |
2,5 – 97,5 ‰ |
5,52 – 13,93 |
2,5 – 97,5 ‰ |
5,33 – 14,82 |
0,684 |
Таблица 3
|
Mayo Medical Laboratories [12] |
||
|
Пол |
Возраст 2–5 месяцев |
Возраст 6 месяцев – 2 года |
|
м |
5,0–15,0x10*9/л |
6,0–11,0x10*9/л |
|
ж |
5,0–15,0x10*9/л |
6,0–11,0x10*9/л |
|
ARUP Laboratories [13] |
||
|
Пол |
Возраст 61–180 дней |
Возраст 6 месяцев – 23 месяца |
|
м |
6,9–15,7x10*9/л |
6,2–14,5x10*9/л |
|
ж |
6,8–16,0x10*9/л |
6,4–15,0x10*9/л |
Данные приведены для капиллярной крови. Необходимо учитывать, что при исследовании капиллярной крови количество лейкоцитов выше, чем в венозной примерно на 3–12 % [7, 10].
Для выявления возможной разницы показателей в группах девочек и мальчиков мы использовали U-критерий Манна-Уитни. Учитывая значения p, представленные в табл. 2, признавать различия достоверными оснований нет.
Для сравнения современные лаборатории указывают следующие данные табл. 3.
Заключение
В результате проведенных исследований была выполнена оценка динамики общего количества лейкоцитов в периферической крови детей разного пола и возраста с определением РИ.
Сравнивая полученные значения в группах девочек и мальчиков, было доказано отсутствие достоверной разницы в зависимости от пола.
Результаты проведенного исследования определили высокую значимость выполненной нами работы над уточнением достоверных педиатрических РИ и натолкнули нас на мысль о необходимости более детального и широкомасштабного подхода к изучению проблемы в современных условиях.
Материалы исследований можно использовать в клинической практике для повышения информативности лабораторных данных при исследовании анализа крови и рекомендовать для применения в других лабораториях [1] при работе на гематологических анализаторах ADVIA 2120 с помощью отбора и обследования ограниченной референсной группы (20 человек).
Рецензенты:Литовченко О.Г., д.б.н., доцент, профессор кафедры физиологии медицинского института, проректор по научной и инновационной работе ГБОУ ВПО «Сургутского государственного университета ХМАО-Югры», г. Сургут;
Лапшина Е.Д., д.б.н., профессор, заведующая кафедрой биологии Югорского государственного университета, г. Ханты-Мансийск.
Работа поступила в редакцию 16.12.2014.