В настоящее время признано, что иммунологические механизмы являются одними из ведущих в патогенезе хронического гепатита С (ХГС) и его исходах [3, 8]. Имеются убедительные данные о роли дисбаланса цитокинов на системном и локальном уровнях в вирусной персистенции и хронизации HCV-инфекции [5, 11]. Многие авторы считают, что определение содержания цитокинов в биологических средах может свидетельствовать о функциональной активности различных иммунокомпетентных клеток, а следовательно, о патологическом процессе в целом, его течении и исходе [5].
Мы исследовали состояния системы трансформирующего фактора роста-β (ТФР-β), его изоформ ТФР-β1, ТФР-β2 и ТФР-β3 в сыворотке крови в проекции с морфологическими параметрами. Выбор исследуемых цитокинов у наблюдаемых нами пациентов связан с их биологическими эффектами при ХГС. А именно иммуносупрессивное влияние, проявляющееся количественной и функциональной недостаточностью эффекторных иммунокомпетентных клеток, которое способствует «ускользанию вируса» из-под иммунного ответа, а следовательно, формированию и персистенции HCV-инфекции [12]. Кроме того, ТФР-β оказывает провоспалительное действие, связанное с вовлечением иммунных эффекторных клеток в очаг повреждения печеночной ткани, а также с повышением устойчивости их к апоптозу, тем самым поддерживая воспалительный процесс в органе, способствует хронизации и прогрессированию вирусной инфекции [13, 14]. Важно отметить профиброгенный эффект ТФР-β, который заключается в стимулировании активности клеток, участвующих в ремоделировании ткани печени, прежде всего Ито [9, 13]. А также изучаемые цитокины принимают участие в формировании дисбаланса в системе протеиназ, которая является одним из основных звеньев фиброгенеза печени [10].
Цель исследования – изучить системный уровень ТФР-β1, ТФР-β2 и ТФР-β3 у пациентов с фиброзом печени при HCV-инфекции.
Материалы и методы исследования
Проведено комплексное клинико-лабораторное и инструментальное обследование 81 пациента в возрасте от 23 до 60 лет (средний возраст 44,4±9,9 лет) с диагнозом ХГС. Среди них преобладали женщины – 56 чел. (69,1 %), мужчин было 25 чел. (30,9 %). Противовирусную терапию пациенты не получали. Диагноз ХГС устанавливали на основании метода ПЦР. Стадию фиброза печени регистрировали по результатам эластографии и пункционной биопсии печени [2]. Содержание изоформ ТФР-β в сыворотке крови определяли методом твердофазного ИФА с использованием диагностических наборов (R&D Diagnostics Inc., USA) с чувствительностью 1 пг/мл. Контрольную группу составили 22 клинически здоровых добровольца, сопоставимых по полу и возрасту с контингентом HCV-инфицированных пациентов. Математическая обработка полученных результатов проведена с помощью пакета прикладных программ BIOSTATISTICA (S.A.Glantz, McGraw Hill), STATISTICA 6.0 (StatSoft, USA).
Результаты исследования и их обсуждение
Все пациенты с HCV-инфекцией по результатам эластографии печени и/или гистологического исследования гепатобиоптатов были распределены в зависимости от стадии фиброза печени на три группы: I-я – пациенты, у которых признаки фиброза отсутствуют (F0 ст.) – 24 чел. (29,6 %), II-я – пациенты со слабовыраженным и умеренным фиброзом (F1-2 ст.) – 26 чел. (32,1 %), III-я – пациенты с выраженным фиброзом и циррозом печени (F3-4 ст.) – 31 чел. (38,3 %).
Результаты исследований сывороточного уровня изоформ ТФР-β представлены в таблице 1. Следует отметить, что среди членов системы фактора роста преобладает ТФР-β1, который является и наиболее изученным.
При анализе профиля ТФР-β в сыворотке крови не было установлено статистически значимых различий (р>0,05) в концентрации ТФР-β1 у пациентов ХГС (20,7±0,9 нг/мл) и контрольной группы (21,2±0,4 нг/мл). Полученные результаты не согласуются с некоторыми исследованиями отечественных и зарубежных авторов, в которых показано, что при HCV-инфекции увеличена концентрация ТФР-β1 в сыворотке крови в несколько раз, превышая аналогичный показатель у здоровых лиц [4, 6, 15]. Как видно из таблицы 1, наблюдается повышенный синтез ТФР-β2 при HCV-инфекции: 167±3,7 пг/мл против 124,8±5,8 пг/мл в норме (р<0,01), что, вероятно, имеет компенсаторный характер по отношению к другим изоформам белка. Выявленные в ходе работы данные свидетельствуют о снижении показателей ТФР-β3 при ХГС в сравнении с контрольной группой. Так, для ТФР-β3 они составили 31,3±3,3 пг/мл против 131,6±7,3 пг/мл (р<0,001).
В результате исследования нами изучено содержание фракций ТФР-β в сыворотке крови HCV-инфицированных пациентов с учетом стадии фиброза печени (табл. 2).
Показатели ТФР-β1 имели характерные особенности в зависимости от стадии фиброза печени. Так, при отсутствии морфологических изменений в печени при ХГС уровень его снижался (19,1±0,9 нг/мл против 21,2±0,4 нг/мл у здоровых, p<0,05). По мере прогрессирования фиброза (F1-2 ст.) концентрация ТФР-β1 возрастала до 30,2±1,2 нг/мл, а при выраженном фиброзе и циррозе печени (F3-4 ст.) вновь наблюдалось снижение ТФР-β1 до 12,9±0,7 нг/мл, что отличалось от контроля (p<0,01).
Таблица 1
Сывороточная концентрация изоформ ТФР-β при ХГС, М±s
|
Показатели |
Здоровые доноры (n=22) |
Пациенты ХГС (n=81) |
|
ТФР-β1, нг/мл |
21,2±0,4 |
20,7±0,9 |
|
ТФР-β2, пг/мл |
124,8±5,8 |
167±3,7* |
|
ТФР-β3, пг/мл |
131,6±7,3 |
31,3±3,3** |
Примечание. Статистическая значимость различий (p) с контрольной группой:
* – p<0,01,
** – p<0,001.
Таблица 2
Содержание изоформ ТФР-β в сыворотке крови в зависимости от стадии фиброза печени при ХГС, М±s
|
Показатели |
Здоровые доноры (n=22) |
Пациенты ХГС (n=81) |
Группы пациентов (n=81) |
||
|
I (F0 ст., n=24), p1 |
II (F1-2 ст., n=26), р2 |
III (F3-4 ст., n=31), р3 |
|||
|
ТФР-β1, нг/мл |
21,2±0,4 |
20,7±0,9 |
19,1±0,9* р1-р2<0,05 |
30,2±1,2** р2-р3<0,05 |
12,9±0,7** р1-р3<0,05 |
|
ТФР-β2, пг/мл |
124,8±5,8 |
167±3,7** |
193,1±4,7** р1-р2<0,05 |
160,2±2,8** р2-р3<0,05 |
147,8±3,5** р1-р3<0,05 |
|
ТФР-β3, пг/мл |
131,6±7,3 |
31,3±3,3*** |
47,9±3,5*** р1-р2<0,05 |
32,0±3,8*** р2-р3<0,05 |
13,9±2,7*** р1-р3<0,05 |
Примечание. Статистическая значимость различий (p): с контрольной группой:
* – p<0,05, ** – p<0,01, *** – p<0,001; между группами р1-р2, р1-р3, р2-р3.
Выявленные результаты подтверждают большинство современных исследований, посвященных изучению роли этого цитокина в формировании и развитии структурных преобразований в архитектонике печеночной ткани [11, 15]. В то же время в литературе встречаются работы, авторы которых отмечают наличие гиперсекреции данной фракции фактора роста и повышение его уровня в сыворотке крови у пациентов с HCV-ассоциированным циррозом печени относительно группы контроля [4,6]. С помощью корреляционного анализа обнаружена обратная зависимость средней силы между сывороточным уровнем ТФР-β1 и выраженностью фиброзных изменений в печени (rs=-0,36, p<0,05).
Как следует из таблицы 2, отмечена тенденция к снижению содержания ТФР-β2 и ТФР-β3 с прогрессированием патологических изменений в печени при HCV-инфекции, что согласуется с данными опубликованными А. Voumvouraki et al. (2010) [11]. Так, наименьший уровень их определен в группах пациентов с F3-4 ст., а именно 147,8±3,5 пг/мл и 13,9±2,7 пг/мл соответственно, в то время как аналогичные показатели у пациентов с отсутствием фиброза в органе-мишени составили 193,1±4,7 пг/мл и 47,9±3,5 пг/мл соответственно (р<0,05). При корреляционном анализе определены статистически значимые взаимосвязи концентраций ТФР-β2 и ТФР-β3 с нарушением архитектоники печеночной ткани. Так, для ТФР-β2 обнаружена обратная средней силы связь с выраженной стадией фиброза и циррозом печени (rs=-0,53, р<0,05), а для ТФР-β3 – обратная сильная (rs=-0,91, р<0,05).
Заключение
Установленные системные изменения представителей семейства ростового фактора могут подтверждать плейотропную роль ТФР-β в иммунопатогенезе данной гепатотропной вирусной инфекции. Высокие сывороточные значения фракций фактора роста при начальных HCV-ассоциированных фиброзных изменениях в органе-мишени (F0 ст.) относительно их содержания в группе пациентов с выраженной стадией фиброза и цирроза печени (F3-4 ст.) могут быть одним из механизмов, который способствует «ускользанию» вируса из-под иммунного ответа организма-хозяина. А именно, избыток ТФР-β угнетает синтез цитокинов, обладающих защитным противовирусным эффектом, то есть ИЛ-2 и ИФН-γ [1, 7], в то же время индуцирует продукцию ключевых медиаторов воспаления и клеточных иммунных реакций, прежде всего ФНО-α и ИЛ-10 [3, 5]. Таким образом, учитывая данные литературы и полученные нами результаты, можно обобщить, что ТФР-β в сыворотке крови, выполняя диаметрально противоположные эффекты (иммуносупрессивный и провоспалительный), на начальных стадиях патологического процесса способствует персистенции и хронизации HCV-инфекции. Дальнейшее прогрессирование ХГС с формированием фиброза и цирроза печени сопровождается снижением системного уровня всех изоформ фактора роста, что, вероятно, связано с реализацией профиброгенного эффекта ТФР-β непосредственно в органе-мишени.
Подводя итог вышесказанному, можно сделать вывод, что полученные результаты указывают на участие системы ТФР-β в процессе фиброгенеза печени при HCV-инфекции, а также подтверждают данные литературы о том, что сывороточные уровни изоформ фактора роста могут отражать выраженность патологического процесса в органе-мишени у пациентов ХГС.
Рецензенты:
Беседнова Н.Н., д.м.н., профессор ФГБУ «НИИЭМ имени Г.П. Сомова» СО РАМН, г. Владивосток;
Федянина Л.Н., д.м.н., профессор школы биомедицины ДВФУ, г. Владивосток.
Работа поступила в редакцию 24.06.2014