Согласно новой концепции, палеоамигдала (древняя амигдала) включает в себя три структуры заднего отдела миндалевидного комплекса (МК) - дорсомедиальное, заднее медиальное и заднее кортикальное ядра (Ахмадеев, Калимуллина, 2004, Морфология, т.126. №5). Исследованный комплекс ядер представляют собой единую по структурной организации и механизмам развития область МК, формирование которой происходит на самых ранних этапах его исторического и онтогенетического становления.
Целью проведенного исследования явился анализ экспрессии CART-пептида в структурах палеоамигдалы и ее зависимость от уровня половых стероидов. Подобное исследование проводится впервые и имеет мировой приоритет.
Исследования проведены на 14 половозрелых самках крыс линии Вистар, которые были умерщвлены на стадиях эструса и метэструса эстрального цикла. Иммуноцитохимическое выявление CART-пептида проводили на криостатных срезах головного мозга, после перфузии его 1М фосфатным буфером (PB, рН=7,4) и 4% раствором параформальдегида на 0,1 М PB. После удаления эндогенной пероксидазы и выдерживания в блокировочном растворе, который содержал 3% бычий сывороточный альбумин (BSA; Sigma, США) и 1% козьий альбумин (GSA; Sigma, США), срезы инкубировали в растворе первичных антител, содержащих поликлональные rabbit-anti-CART (55-102) антитела (H-003-62, Phoeniх Pharm., Incorp, Belmont, CA, США). Потом срезы промывали и инкубировали во вторичных goat-anti-rabbit антителах, конъюгированных с авидиновым комплексом (ABC-kit 689321, ICN Biomedicals Inc., США). После промывания срезов, их инкубировали со стрептавидин-пероксидазой (ABC-kit 689321, ICN Biomedicals Inc., США). Перед заключением под стекло, срезы промывали и инкубировали с раствором 3,3-диаминобензидинтетрагидрохлорида (DAB, Sigma, США) на фосфатно-солевом буфере. Контрольные срезы обрабатывали в указанной выше последовательности без использования первичных антител.
В дорсомедиальном ядре нейроны малого и среднего размера, экспрессирующие CART - пептид на стадии эструса, располагаются равномерно, формируя сеть с умеренно выраженной иммунореактивностью. На их фоне выделяются группы крупных нейронов с угловатыми телами, с выраженной интенсивностью имуноцитохимической реакции. На стадии метэструса сеть слабоокрашенных нейронов не выявляется, а в крупных нейронах CART - пептид определяется менее интенсивно.
В заднем медиальном ядре морфология, содержащих CART-пептид нейронов, различна. Он выявляется в нейронах среднего и крупного размера, форма тел которых может вариировать, при этом в последних часто определяется иммунореактивный осадок в начальных сегментах дендритов. Интенсивность выявившего осадка различна - в одних нейронах осадка много и он экранирует клеточное ядро, в других на фоне окрашенной цитоплазмы определяется светлое ядро. В заднем кортикальном ядре CART - позитивные нейроны чаще располагаются в его медиальной части. Количественное определение уровня экспресии CART - пептида в нейронах палеоамигдалы показывает, что выраженность его экспрессии зависит от уровня половых стероидов - она в два раза выше на стадии эструса по сравнению со стадией метэструса.
Полученные результаты имеют важное научно-практическое значение. Во-первых, они свидетельствуют о вовлеченности структур палеоамигдалы в патогенез наркомании. Во-вторых, нарушения в функционировании этого комплекса структур, участвующих в организации пищевого, полового и агрессивно-оборонительного поведения, на фоне приема наркотиков (кокаина, амфетамина и др.) могут приводить (и объяснить) к формированию отклонений в указанных формах поведения, что весьма характерно для клиники наркомании. В-третьих, они указывают на возможность разработки новых эффективных методов лечения наркомании с использованием интраназального пути лекарственных веществ, т.к. структуры палеоамигдалы имеют прямые связи как с основной, так и добавочной обонятельными луковицами мозга, и представляют собой ту территорию мозга, где происходит интеграция приходящей от них информации.
Интраназальный путь может быть использован для введения в мозг отдельных генов при помощи вирусных векторов-носителей (Williams et al., Brain Res, 2005, 165), при этом этот путь введения новых генов в ЦНС является наиболее перспективным.
Работа выполнена при финансовой поддержке Гранта Президента РФ МК-865.2008.4