В последнее время большое внимание уделяется исследованию функционирования различных метаболических систем клетки в условиях интенсификации свободнорадикальных процессов. Полагают, что развитие многих патологических состояний различной этиологии, в том числе и токсических поражений печени, сопровождается гиперпродукцией активных форм кислорода. В контроле свободнорадикального окисления важнейшее место занимает глутатионовая система, включающая глутатион, глутатионпероксидазу и глутатионредуктазу. Глутатионпероксидаза (ГП; К.Ф. 1:11.1.9.) относится к ферментативному звену антиоксидантной системы и обеспечивает детоксикацию органических пероксидов и пероксида водорода, являющегося основным источником гидроксильного радикала, образующегося в реакции Фентона в присутствии Fe2+ . Поэтому, особый интерес вызывает изучение некоторых особенностей функционирования ГП, в условиях активации процессов СРО, вызванных действием четыреххлористого углерода, и введением веществ, способных повышать резистентность организма к повреждающему действию свободных радикалов при патологических состояниях печени. Перспективными в этом отношении является тиоктовая кислота (ТК) и восстановленный глутатион (GSH). К настоящему времени установлено, что ионам таких металлов, как Fe3+ , Mg2+ , Са2+ принадлежит значительная роль в развитии процессов СРО. В связи с этим целью данной работы явилась очистка и изучение некоторых регуляторных свойств ГП из печени крысы в условиях нормы, при экспериментальном токсическом гепатите (ЭТГ), и действии веществ-протекторов. В качестве объекта исследования использовали белых лабораторных крыс, самцов, массой 180-200г. Активность ГП определяли на СФ-56 при 340 нм. За единицу активности (Е) принимали количество фермента, катализирующее образование 1 мкмоля продукта реакции за 1 мин при 25оС. Индуцирование ЭТГ вызывали введением CCl4 в дозе 0,064 мл на 100 г веса после суточной пищевой депривации. Печень забирали на 4-й день после введения ССl4. Очистка ГП включала ряд стадий: гомогенизирование, гель-фильтрацию на сефадексе G-25, ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе, концентрирование на ячейке Millipore, гель-хроматографию на Toyopearl HW-65. С использованием очищенных ферментных препаратов ГП из печени контрольных и подвернутых ЭТГ животных, а также крыс, которым на фоне развития патологического состояния вводили тиоктовую кислоту и восстановленный глутатион крыс было исследовано влияние ряда ионов металлов на ферментную активность. В результате были получены гомогенные препараты ГП из печени крыс в условиях нормы, при развитии ЭТГ и при действии веществ-протекторов в патологическом состоянии. Было установлено, что ионы магния оказывают активирующий эффект на ГП на всем диапазоне исследуемых концентраций в норме, при гепатите, и при введении GSH при развитии патологии. При токсическом гепатите на фоне введения ТК наблюдается незначительный активирующий эффект при концентрациях метаболита до 0,1 мМ. При более высоких концентрациях ионы магния практически не влияют на фермент. Ионы кальция оказывают выраженный ингибирующий эффект на ГП при концентрациях метаболита до 0,1 мМ в норме, при гепатите, и при введении GSH на фоне патологического состояния. Для фермента из печени крыс с токсическим гепатитом, которым вводили ТК, был характерен незначительный активирующий эффект во всем диапазоне исследуемых концентраций. Ионы Fe3+ ингибируют ГП в норме, при ЭТГ, а также при введении ТК и GSH на фоне развития патологии. Кi составляет 2,8 мМ в норме, 9,5 мМ при ЭТГ, 2,4 мМ при введении ТК при развитии токсического гепатита, 1,6 мМ при введении GSH на фоне развития патологии. Таким образом, с использованием гомогенных ферментных препаратов ГП была осуществлена сравнительная характеристика чувствительности фермента к регуляторному влиянию ионов двухвалентных металлов в норме, при токсическом гепатите, и при введении GSH и ТК на фоне развития патологии, позволяющая выявить ряд особенностей функционирования фермента в данных условиях.
Работа поддержана финансированием Министерства образования и науки РФ по программе "Развитие научного потенциала высшей школы" РНП.2.1.1.4429 и РФФИ р_ офи 08-04-99018.