В последние десятилетия бурное развитие различных видов перерабатывающей промышленности в условиях несовершенства технологических процессов привело к значительным антропогенным воздействиям. Вышеперечисленные факторы, наряду с постоянными психологическими нагрузками, оказывают отрицательное влияние на качество жизни современного человека [1].
Для минимизации негативного воздействия неблагоприятных факторов окружающей среды в настоящее время проводится активное изучение лечебного и профилактического использования лекарственных средств на основе природных ресурсов, в том числе – продукции пантового оленеводства. Так, результаты применения пантов свидетельствуют о том, что они являются эффективным тонизирующим средством, применяемым при умственных и физических нагрузках, при упадке сил после перенесенных тяжелых болезней [9, 13].
В настоящее время в Алтайском крае и Республике Алтай переработкой пантов занимается ряд фирм-производителей. В России в качестве общетонизирующего средства зарегистрирован лишь один препарат – «Пантокрин». Исследования по изучению данной фармакологической активности пантокрина были проведены А.И. Танеевой в опытах с плаванием белых мышей до полного утомления [12]. И.И. Брехман и соавт. (1968 г.) провели изучение влияния пантокрина на общую неспецифическую сопротивляемость организма. По полученным данным был сделан вывод, что пантокрин повышает устойчивость организма к вредному воздействию различных факторов физической, химической и биологической природы, что позволяет отнести его к группе адаптогенов [3].
В последние годы коммерческими фирмами предложен широкий ассортимент пищевых и биологически активных добавок (БАД) на основе измельченных пантов марала, что вызвано значительным упрощением процесса производства и исключением из состава готового продукта не инертного экстрагента – этилового спирта. Кроме того, производители полагают, что преимуществом использования измельченного сырья является наличие всего нативного комплекса биологически активных веществ (БАВ), в том числе аминокислот, пептидов, гормонов, витаминов и других соединений. В большинстве случаев вышеуказанные БАД выпускаются в виде капсул, в которых содержатся измельченные панты марала в чистом виде или в смеси с измельченным лекарственным растительным сырьем с добавлением различных вспомогательных веществ [5, 8, 11].
Следует отметить, что качество данной продукции контролируется согласно разработанным фирмами-производителями техническим условиям, в основном по таким товароведческим показателям, как внешний вид, запах, вкус, массовая доля золы и влаги, содержание фосфора, кальция, радионуклидов, некоторых токсичных элементов и микробиологическая чистота. При этом биологическая активность и содержание основных групп БАВ в выпускаемой продукции не определяются [4, 9].
Вышеизложенные факты свидетельствуют о том, что требования данной нормативной документации не позволяют в полной мере оценить качество выпускаемой продукции и указывают на актуальность проведения углубленных фармакологических, химических и технологических исследований измельченных пантов марала.
Целью данного исследования является изучение общетонизирующей активности измельченных пантов марала различных фирм-производителей Алтая на модели «предельного плавания».
Материалы и методы исследования
Объектом исследования являлись три серии пантов марала различных фирм-производителей, предоставленные ВНИИ пантового оленеводства. Панты измельчали на шаровой мельнице до частиц размером от 1,0 до 0,1 мм. Все исследуемые субстанции представляли собой однородный порошок коричневого цвета с красноватым оттенком, характерным запахом.
В связи с тем, что последние годы многие исследователи общетонизирующее действие пантов марала связывают с наличием специфического комплекса аминокислот, во всех сериях исследуемого сырья определяли аминокислотный состав с использованием метода ВЭЖХ на хроматографе Shimadzu LC-20 Prominence (Япония) с УФ-детектированием (254 нм). Выявлено, что панты марала всех серий содержат одинаковый набор аминокислот. При этом их количественное содержание различалось незначительно и варьировало в пределах от 0,29 мг % и до 5,59 мг % [6, 7].
Эксперименты проводили на сертифицированных аутбредных крысах-самках сток Вистар (массой 190–220 г), полученных из вивария Института цитологии и генетики СО АН РФ и прошедших 14-дневный карантин. Содержание экспериментальных животных осуществлялось в стандартных условиях вивария на обычном рационе, при свободном доступе к воде и пище, в условиях светового режима 12:12 ч и температуры 20–22 °С. Животные были разделены рандомизированно на 4 группы, исходя из показателей массы тела и исходного уровня плавания. Крысы контрольной группы ежедневно получали плацебо в виде хлебного шарика объемом 1 см3. Животные первой, второй и третьей экспериментальных групп получали такие же шарики, смешанные с исследуемыми образцами измельченных пантов марала в дозе 200 мг/кг один раз в сутки (соответственно сырье 1, 2 и 3 серий) в течение 10 суток. Указанный способ введения связан с нерастворимостью исследуемых субстанций в воде и невозможностью получения суспензии в крахмальном клейстере в связи с быстрым оседанием частиц костной ткани.
Определение общетонизирующей активности измельченных пантов марала осуществляли согласно «Методике оценки выносливости мелких лабораторных животных для изучения адаптогенной активности некоторых лекарственных препаратов», предложенной Каркищенко В.Н. с соавт [10].
Исследование проводили при строгом соблюдении требований Европейской конвенции «О защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных или иных научных целей» (Страсбург, 1986 г.) и Приказа МЗ РФ № 708 Н от 28 августа 2010 г.
В первый день эксперимента интактные крысы всех групп помещались в ванну с водой при температуре 27 °С и грузом 10 % от массы тела. При этом оценивался исходный уровень плавания животных, согласно которому проводилось дальнейшее деление крыс на равноценные группы. Аналогичным образом животные помещались в воду на 3, 7 и 10 сутки эксперимента через один час после получения плацебо или исследуемых образцов пантов марала. При наблюдении за крысами фиксировалось время их нахождения в воде до момента, когда они были не в состоянии удержаться над поверхностью воды самостоятельно.
Экспериментальные данные обрабатывали статистически методом вариационных рядов с использованием t-критериев Стьюдента [2]. Результаты представлены в виде среднего значения (Х) и ошибки среднего (m). Достоверными считали различия при достигнутом уровне значимости p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Процесс тренировки привел к тому, что на третьи сутки длительность плавания крыс контрольной группы была достоверно выше, чем в исходном периоде (1 сутки), превысив его значение на 8,2 % (р < 0,05). Данная тенденция сохранилась и в последующие дни. Третье плавание, проведенное на 7 сутки после начала эксперимента, продемонстрировало удлинение пребывания животных контрольной группы в воде уже на 13,8 % (р < 0,05), а на 10 сутки – на 17,4 % (р < 0,05).
Результаты эксперимента по изучению общетонизирующей активности исследуемых образцов измельченных пантов марала представлены на рисунке.
Время плавания крыс контрольной группы представлено в виде горизонтальной линии и условно принято за 100 %. Возвышение диаграмм над данной линией наглядно показывает прирост времени плавания экспериментальных групп крыс по сравнению с контрольной группой.
Динамика времени плавания крыс, получавших измельченные панты 3 серий. По горизонтальной оси – сутки эксперимента, по вертикальной оси – прирост времени плавания экспериментальных групп животных по отношению к соответствующим показателям контрольной группы, %. Горизонтальная линия обозначает уровень плавания контрольной группы крыс относительно экспериментальных групп. Примечание. * – достоверные изменения (p < 0,05) времени плавания экспериментальных групп по отношению к показателям контрольной группы
Из рис. 1 следует, что при применении исследуемых образцов был зафиксирован более длительный период плавания крыс. При этом выявленное действие тренировки превосходило по времени выше отмеченный эффект в контрольной группе. Сравнив прирост времени плавания контрольной группы крыс и животных, получавших исследуемые образцы пантов марала, была рассчитана относительная эффективность последних.
При исследовании измельченных пантов серии № 1 отмечено, что на третьи сутки длительность плавания статистически достоверно (p < 0,001) увеличилась на 13,1 % по сравнению с контрольной группой (8,2 %). На седьмые сутки в контрольной группе длительность плавания увеличилась на 13,8 %, при применении измельченных пантов марала серии № 1 – на 23,5 % (p < 0,001). Разницу в обнаруженных эффектах на третьи сутки (4,9 %), на седьмые сутки (9,7 %) и десятые сутки (31,4 %) можно отнести к специфическому действию исследуемой серии пантов.
Аналогичный результат можно отметить при исследовании измельченных пантов серии № 2. Если на третьи сутки эффект практически не отличался от контрольной группы (8,2 % и 9,6 % соответственно), то на седьмые сутки срок пребывания крыс в воде увеличился на 24,2 % (р < 0,02), что значительно выше, чем в контрольной группе (13,8 %) и разница 10,4 % может быть отнесена к эффекту исследуемых веществ. Подобный эффект плавания на десятые сутки составил 26,6 % (p < 0,05).
При исследовании активности измельченных пантов марала серии № 3 отмечено, что длительность плавания уже на третьи сутки оказалась значительно выше, чем в контрольной группе, и составила 12,5 % (p < 0,001). Срок пребывания крыс в воде на седьмые сутки был также выше, чем в контрольной группе (увеличение на 25,1 %, p < 0,001). Таким образом, разницу в обнаруженных эффектах (11,3 %) можно отнести к действию исследуемой серии № 3. На десятые сутки отмеченный эффект составил 29,5 % (p < 0,001).
Сравнительная оценка общетонизирующей активности исследуемых измельченных пантов марала свидетельствует о более выраженном проявлении данного эффекта у образцов пантов марала серий № 1 и № 3 и в наименьшей степени – у образца № 2 на десятые сутки наблюдения. В указанный срок эксперимента разница в обнаруженных эффектах по сравнению с контрольной группой составляла 31,4; 29,5 и 26,6 % соответственно. Следует отметить, что курсовое применение исследуемых субстанций приводит к увеличению продолжительности плавания крыс в течение изучаемого периода.
Заключение
Результаты проведенного исследования показали, что в условиях приема измельченных пантов марала (3 серии) различных фирм-производителей существенно повышается выносливость крыс, превышающая результаты, достигаемые в условиях обычной тренировки. В наибольшей степени эффект проявляется на 7–10 сутки применения пантов серии № 1 и № 3, в наименьшей степени – при использовании пантов серии № 2. Полученные данные подтверждают наличие общетонизирующей активности измельченных пантов марала и перспективность дальнейшего их углубленного исследования.
Рецензенты:
Крылова С.Г., д.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории онкофармакологии, ФГБУ «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Томск;
Федосеева Л.М., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармацевтической химии с курсом органической и токсикологической химии, ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», г. Барнаул.
Работа поступила в редакцию 04.04.2014.