Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,749

PROFILE OF IMMUNOENZYMES OF AN INFLAMMATION AT PATIENTS WITH CHRONIC PANCREATITIS.

Mingazova S.K. 1
1 Bashkir State Medical University
Aim: To study a cytokines regulation on level monocytes/macrophages blood factors at chronic pancreatitis. Material and methods. Patients by chronic pancreatitis (n = 78) and healthy faces (n = 20) of group of comparison are surveyed. All clinical methods of inspection and definition of level of cytokines by a method of an enzyme immunoassay are used. At patients with often relapsing рancreatitis pro-inflammatory cytokines (IL-1β and TNF-α), levels of monocyte chemotactic a factor (MCP-1) and a granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) as inflammation manifestation with its persistence highly significantly increase. At often relapsing course of chronic pancreatitis a high level of MCP-1 and G-CSF were characterized by correlation existence with exogenous violations, a pain syndrome. Identified violations cytokine status with the increase of monocytes/macrophages factors indicates the presence of immune inflammation, define a greater degree of persistence of inflammation in patients with chronic pancreatitis often recurrent and become markers of early diagnosis of pancreatic pathology.
chronic pancreatitis
monocytes/macrophages MCP-1 and G-CSF factors
1. Bueverov A.O. Mediatory vospalenija i porazhenie podzheludochnoj zhelezy // Rossijskij zhurnal gastrojenterologii, gepatologii, koloproktologii. M., 1999. no. 4. pp. 15–18.
2. Gubergric N.B., Hristich T.N. Klinicheskaja pankreatologija / Doneck OOO «Lebed›» 2000. 416 р.
3. Gubergric N.B., Nehoda L.A., Linevskaja K.Ju. i dr. Biohimicheskaja diagnostika hronicheskogo recidivirujushhego pankreatita //Klinicheskaja laboratornaja diagnostika. 1999. no. 8. pp. 3–10.
4. Zhukov N.A., Zhukova E.N., Afanaseva S.N. Klinicheskie formy hronicheskogo recidivirujushhego pankreatita i ih patogeneticheskie osobennosti //Akt. problemy terapii na rubezhe vekov: Sb.nauchn.tr. Omsk,2001. pp. 54–58.
5. Ivashkin V.T. Sovremennye problemy klinicheskoj pankreatologii // Vestnik RAMN,- 1993. no. 4. pp. 29–34.
6. Kucherjavyj Ju.A. Znachenie citokinovoj seti v razvitii tipovyh patologicheskih processov i narushenija obmena citokinov pri zabolevanijah podzheludochnoj zhelezy // Aktual›nye voprosy klinicheskoj transportnoj mediciny. 2003. T 11 pp. 398–414.
7. Maev I.V., Kazjulin A.N., Dicheva D.T., Kucherja vyj Ju.A. Hronicheskij pankreatit: Uchebnoe posobie. M.: VUNMC MZ RF, 2003. 80 p.
8. Maev I.V., Kucherjavyj Ju.A., Kazjulin A.V., Pirogo va A.I. Interlejkiny v patogeneze ostrogo i hronicheskogo vospalenija podzheludochnoj zhelezy // Aktual›nye voprosy klinicheskoj transportnoj mediciny. 2003. T.9. pp. 168–183.

Хронический панкреатит относится к числу наиболее сложных заболеваний пищеварительной системы, что объясняется многообразием этиологических факторов, сложностью патогенеза, трудностями диагностики и недостаточной эффективностью лечения [2].

Хронический панкреатит (ХП) характеризуется персистирующим хроническим воспалением с преобладанием в инфильтратах мононуклеарных клеток, развитием участков фиброза и прогрессирующими признаками экзо- и эндокринной недостаточности [1].

В настоящее время широко изучается роль медиаторов воспаления в повреждении поджелудочной железы, выделена роль нарушений иммунного и цитокинового статуса при заболеваниях внутренних органов. В связи с этим определение факторов моноцитарно-макрофагального воздействия, обладающих мощными хемотаксическими и активирующими свойствами, позволит уточнить течение и прогноз ХП.

Целью настоящего исследования явилось изучение цитокиновой регуляции по уровню моноцитарно-макрофагальных факторов крови (МСР-1 и G-CSF) при хроническом панкреатите.

Материалы и методы исследования

В исследование было включено 78 больных хроническим панкреатитом, проходивших лечение в гастроэнтерологическом отделении РКБ. Пациенты не имели других заболеваний пищеварения, почечных и значимых сопутствующих заболеваний, а также сахарного диабета. Пациенты были разделены на две группы в зависимости от частоты обострения. Группу сравнения составили 20 практически здоровых доноров, сопоставимых по возрасту и полу. Все пациенты подписывали информированное согласие на обследование. Больные, соответствующие критериям отбора, имели заболевание в период обострения.

Помимо стандартного клинического обследования с оценкой клинических симптомов определяли уровни глюкозы, амилазы крови и мочи, проводился анализ кала на стеаторею и креаторею.

Содержание в крови основных провоспалительных цитокинов (интерлейкины 1β (IL-1β), фактор некроза опухоли –α (TNF-α)), уровни иммуноферментов, регулирующих функциональное состояние клеток фагоцитарного звена иммунитета (МСР-1) и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора с локальным ответом на действие инфекции (G-CSF) в сыворотке крови у больных ХП определялось методом ИФА с использованием коммерческих тест-наборов (производство «Вектор Бест» Новосибирская область). Количественное определение проводилось на анализаторе ACCECS 2 (Вecktan-Coulter), где применяли трехфазный иммуноферментный метод с использованием тест-систем Гамма-Интерферон-ИФА-Бест.

Статистический анализ результатов исследования выполнен с использованием аналитического пакета STATISTICA 7.0 и программы Medcals Statistica 10. 2. 00. Для проверки нормального распределения изучаемых признаков применяли тест Колмогорова-Смирнова. При сравнении исследуемых групп по количественным признакам, отличающимся от нормального, использовался ранговый анализ вариаций по Крускалу–Уоллису, парное сравнение групп проводилось с использованием непараметрического теста для проверки достоверности различий изучаемых признаков –U-тест Манна–Уитни с поправкой Банферони. Для выявления корреляционных взаимосвязей использовался метод ранговых корреляций Спирмена (Реброва О.Ю., 2002).

Результаты исследования и их обсуждение

Среди включенных в исследование пациентов ХП 44 пациента отнесены к часто рецидивирующей форме ХП и 34 пациента к редко рецидивирующей форме ХП. Группы были сопоставимы по основным клинико-морфологическим показателям.

Исследования цитокинов IL-1β и TNF-α превышали данные сравнения (табл. 1).

Таблица 1

Содержание цитокинов в сыворотке крови больных хроническим панкреатитом

Формы заболевания

IL-1β, пг/мл

TNF-α, пг/мл

IFN-γ, пг/мл

Часто рецидивирующая форма

n = 44

**•

97,6 ± 5,3

**•

81,2 ± 5,61

*

74,76 ± 4,90

Редко рецидивирующая форма

n = 34

**

47,6 ± 4,06

**

53,5 ± 4,34

*

61,0 ± 5,62

Группа сравнения

n = 20

11,6 ± 4,5

7,58 ± 3,53

32,5 ± 5,31

 

Примечания: статистическая значимость различий с данными группы сравнения: * – р < 0,05; ** – р < 0,01; • – между группами р < 0,05.

Уровень IL-1β был в 8 раз выше у больных 1 группы, показатель был высоко значим по отношению к группе сравнения и составил 97,6 ± 5,3 пг/мл (в группе сравнения 11,6 ± 4,5 пг/мл, р < 0,001), во 2 группе он также был значим (47,6 ± 4,06 пг/мл, р < 0,01), также высоко значимо увеличивалась экспрессия TNF-α (81,2 ± 5,61 и 53,5 ± 4,34 пг/мл соответственно, р < 0,01). Значимо увеличивалось содержание IFN-γ в сыворотке крови по сравнению с группой сравнения (74,76 ± 4,90 и 61,0 ± 5,62 пг/мл соответственно, р < 0,05). Однако отмечены значимые различия в данных провоспалительных цитокинов между группами. Так, уровень IL-1β в 1 группе был в 2 раза выше данных 2 группы (97,6 ± 5,3 и 47,6 ± 4,06 пг/мл, р < 0,05), а экспрессия TNF-α в 1 группе на 52,8 % выше 2 группы (р < 0,05).

Высокие показатели провоспалительных цитокинов у больных с часто рецидивирующим ХП определяли высокую активность заболевания и, вероятно, определяли персистирующее течение. Это подтверждалось наличием прямой корреляционной связи IL-1β с болевым синдромом (r = 0,56; р = 0,002), уровнем АСТ (r = 0,42; р = 0,036).

У больных с редко рецидивирующим ХП в период обострения также наблюдалось повышение провоспалительных цитокинов, что определяло их как маркеры воспаления в период обострения.

В дальнейшем было изучено содержание в крови состояние клеток фагоцитарного звена (МСР-1), определяющего моноцитарно-макрофагальные нарушения. Установлен достаточно большой разброс показателей в группе больных ХП от 52,56 до 487,0 пг/мл, где верхний квартиль – Q1 составил 148,20 пг/мл, а нижний квартиль (Q3) – 271,50 п/мл. При сопоставлении результатов активации МСР-1 в группе больных ХП отмечено значимое увеличение уровня фермента в обеих группах (рис. 1).

Наибольшие показатели содержания МСР-1 отмечались в 1-й группе больных ХП (218,43 ± 16,87 пг/мл) по сравнению с группой сравнения (143,82 ± 48,09 пг/мл, р = 0,002). У больных 2-й группы наблюдались низкие показатели МСР-1 и были близки к сравниваемым величинам, но оказались значимо пониженными с 1-й группой часто рецидивирующим ХП (р = 0,036). Следовательно, в 1-й группе больных отмечено значимое повышение уровня МСР-1 – одного из мощных хемотаксических и активирующих факторов моноцитов/макрофагов характеризует реакцию иммунного ответа на инфекционное и аутоиммунное воспаление, что согласуется с данными других исследований. Различия в группах обследования уровня МСР-1 позволяют предполагать наличие аутоиммунного воспаления у больных с часто рецидивирующим течением.

pic_38.wmf

Рис. 1. Содержание МСР-1 в сыворотке крови у больных хроническим панкреатитом в зависимости от формы заболевания. Примечание. Различия с группой сравнения статистически значимы* – р < 0,05

При обследовании гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) было получено повышение его уровня в сыворотке крови у больных 1-й группы ХП до 24,54 ± 2,97 пг/мл (в группе сравнения-7,13 ± 3,48 пг/мл, р = 0,02), во 2-й группе данные были незначимы (рис. 2).

pic_39.wmf

Рис. 2. Содержание G-CSF в сыворотке крови у больных хроническим панкреатитом. Примечание. Значимость различий с группой сравнения * – р < 0,05

Значимое нарастание G-CSF у больных часто рецидивирующим ХП в 3 раза по отношению группы сравнения и в 2 раза – со 2-й группой ХП, вероятно, направлено на усиление иммунного воспаления, что подтверждается сильными корреляционными связями G-CSF с амилазой крови (r = 0,59; р = 0,032) и IL-1β (r = 0,63; р = 0,01).

Итак, высокий уровень G-CSF коррелировал с изменениями экскреторной функции ХП, провоспалительным цитокином IL-1β, что позволяет рассматривать данный фактор как возможный акселератор персистенции реакции воспаления, определяет его иммуно-регулирующее действие воспалительного процесса, а во 2-й группе снижение МСР-1, возможно, связано с понижением реакции нейтрофилов, развития ишемии и фиброза. Пониженный уровень МСР-1, слабая связь с основными показателями воспаления: TNF (r = 0,28; р = 0,64) позволяют рассматривать его как возможный триггер запуска воспаления и его прогрессирования.

Заключение

Установленные нами нарушения цитокинового звена иммунитета, соответствующие степени воспаления и его персистенции в железе, свидетельствуют о прямой связи фактора воспаления МСР-1 и G-CSF с течением хронического панкреатита. Общность участия воспалительных факторов в прогрессировании заболевания характеризуется нарастанием показателей, свидетельствующих о наличии воспаления – IL-1β, TNF-α, INF-γ.

При часто рецидивирующем течении ХП высокий уровень МСР-1 и G-CSF характеризовались наличием корреляции с экзогенными нарушениями, болевым синдромом. Исследования иммуноферментов моноцитарно-макрофагальных факторов имеет определенное значение в ранней диагностике проявления ХП.

Значимое увеличение уровня моноцитарно-макрофагального фактора МСР-1 как фактора иммунного воспаления и увеличение гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) как маркера воспаления определяет большую степень персистирования воспаления у больных часто рецидивирующим хроническим панкреатитом.

Рецензенты:

Мингазетдинова Л.Н., д.м.н., профессор, кафедра терапии и клинической фармакологии ИПО БГМУ, г. Уфа;

Фаизова Л.П., д.м.н., профессор, кафед­ра терапии и общеврачебной практики с курсом гериатрии ИПО БГМУ, г. Уфа.

Работа поступила в редакцию 26.03.2014.