Хронический панкреатит относится к числу наиболее сложных заболеваний пищеварительной системы, что объясняется многообразием этиологических факторов, сложностью патогенеза, трудностями диагностики и недостаточной эффективностью лечения [2].
Хронический панкреатит (ХП) характеризуется персистирующим хроническим воспалением с преобладанием в инфильтратах мононуклеарных клеток, развитием участков фиброза и прогрессирующими признаками экзо- и эндокринной недостаточности [1].
В настоящее время широко изучается роль медиаторов воспаления в повреждении поджелудочной железы, выделена роль нарушений иммунного и цитокинового статуса при заболеваниях внутренних органов. В связи с этим определение факторов моноцитарно-макрофагального воздействия, обладающих мощными хемотаксическими и активирующими свойствами, позволит уточнить течение и прогноз ХП.
Целью настоящего исследования явилось изучение цитокиновой регуляции по уровню моноцитарно-макрофагальных факторов крови (МСР-1 и G-CSF) при хроническом панкреатите.
Материалы и методы исследования
В исследование было включено 78 больных хроническим панкреатитом, проходивших лечение в гастроэнтерологическом отделении РКБ. Пациенты не имели других заболеваний пищеварения, почечных и значимых сопутствующих заболеваний, а также сахарного диабета. Пациенты были разделены на две группы в зависимости от частоты обострения. Группу сравнения составили 20 практически здоровых доноров, сопоставимых по возрасту и полу. Все пациенты подписывали информированное согласие на обследование. Больные, соответствующие критериям отбора, имели заболевание в период обострения.
Помимо стандартного клинического обследования с оценкой клинических симптомов определяли уровни глюкозы, амилазы крови и мочи, проводился анализ кала на стеаторею и креаторею.
Содержание в крови основных провоспалительных цитокинов (интерлейкины 1β (IL-1β), фактор некроза опухоли –α (TNF-α)), уровни иммуноферментов, регулирующих функциональное состояние клеток фагоцитарного звена иммунитета (МСР-1) и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора с локальным ответом на действие инфекции (G-CSF) в сыворотке крови у больных ХП определялось методом ИФА с использованием коммерческих тест-наборов (производство «Вектор Бест» Новосибирская область). Количественное определение проводилось на анализаторе ACCECS 2 (Вecktan-Coulter), где применяли трехфазный иммуноферментный метод с использованием тест-систем Гамма-Интерферон-ИФА-Бест.
Статистический анализ результатов исследования выполнен с использованием аналитического пакета STATISTICA 7.0 и программы Medcals Statistica 10. 2. 00. Для проверки нормального распределения изучаемых признаков применяли тест Колмогорова-Смирнова. При сравнении исследуемых групп по количественным признакам, отличающимся от нормального, использовался ранговый анализ вариаций по Крускалу–Уоллису, парное сравнение групп проводилось с использованием непараметрического теста для проверки достоверности различий изучаемых признаков –U-тест Манна–Уитни с поправкой Банферони. Для выявления корреляционных взаимосвязей использовался метод ранговых корреляций Спирмена (Реброва О.Ю., 2002).
Результаты исследования и их обсуждение
Среди включенных в исследование пациентов ХП 44 пациента отнесены к часто рецидивирующей форме ХП и 34 пациента к редко рецидивирующей форме ХП. Группы были сопоставимы по основным клинико-морфологическим показателям.
Исследования цитокинов IL-1β и TNF-α превышали данные сравнения (табл. 1).
Таблица 1
Содержание цитокинов в сыворотке крови больных хроническим панкреатитом
|
Формы заболевания |
IL-1β, пг/мл |
TNF-α, пг/мл |
IFN-γ, пг/мл |
|
Часто рецидивирующая форма n = 44 |
**• 97,6 ± 5,3 |
**• 81,2 ± 5,61 |
* 74,76 ± 4,90 |
|
Редко рецидивирующая форма n = 34 |
** 47,6 ± 4,06 |
** 53,5 ± 4,34 |
* 61,0 ± 5,62 |
|
Группа сравнения n = 20 |
11,6 ± 4,5 |
7,58 ± 3,53 |
32,5 ± 5,31 |
Примечания: статистическая значимость различий с данными группы сравнения: * – р < 0,05; ** – р < 0,01; • – между группами р < 0,05.
Уровень IL-1β был в 8 раз выше у больных 1 группы, показатель был высоко значим по отношению к группе сравнения и составил 97,6 ± 5,3 пг/мл (в группе сравнения 11,6 ± 4,5 пг/мл, р < 0,001), во 2 группе он также был значим (47,6 ± 4,06 пг/мл, р < 0,01), также высоко значимо увеличивалась экспрессия TNF-α (81,2 ± 5,61 и 53,5 ± 4,34 пг/мл соответственно, р < 0,01). Значимо увеличивалось содержание IFN-γ в сыворотке крови по сравнению с группой сравнения (74,76 ± 4,90 и 61,0 ± 5,62 пг/мл соответственно, р < 0,05). Однако отмечены значимые различия в данных провоспалительных цитокинов между группами. Так, уровень IL-1β в 1 группе был в 2 раза выше данных 2 группы (97,6 ± 5,3 и 47,6 ± 4,06 пг/мл, р < 0,05), а экспрессия TNF-α в 1 группе на 52,8 % выше 2 группы (р < 0,05).
Высокие показатели провоспалительных цитокинов у больных с часто рецидивирующим ХП определяли высокую активность заболевания и, вероятно, определяли персистирующее течение. Это подтверждалось наличием прямой корреляционной связи IL-1β с болевым синдромом (r = 0,56; р = 0,002), уровнем АСТ (r = 0,42; р = 0,036).
У больных с редко рецидивирующим ХП в период обострения также наблюдалось повышение провоспалительных цитокинов, что определяло их как маркеры воспаления в период обострения.
В дальнейшем было изучено содержание в крови состояние клеток фагоцитарного звена (МСР-1), определяющего моноцитарно-макрофагальные нарушения. Установлен достаточно большой разброс показателей в группе больных ХП от 52,56 до 487,0 пг/мл, где верхний квартиль – Q1 составил 148,20 пг/мл, а нижний квартиль (Q3) – 271,50 п/мл. При сопоставлении результатов активации МСР-1 в группе больных ХП отмечено значимое увеличение уровня фермента в обеих группах (рис. 1).
Наибольшие показатели содержания МСР-1 отмечались в 1-й группе больных ХП (218,43 ± 16,87 пг/мл) по сравнению с группой сравнения (143,82 ± 48,09 пг/мл, р = 0,002). У больных 2-й группы наблюдались низкие показатели МСР-1 и были близки к сравниваемым величинам, но оказались значимо пониженными с 1-й группой часто рецидивирующим ХП (р = 0,036). Следовательно, в 1-й группе больных отмечено значимое повышение уровня МСР-1 – одного из мощных хемотаксических и активирующих факторов моноцитов/макрофагов характеризует реакцию иммунного ответа на инфекционное и аутоиммунное воспаление, что согласуется с данными других исследований. Различия в группах обследования уровня МСР-1 позволяют предполагать наличие аутоиммунного воспаления у больных с часто рецидивирующим течением.
Рис. 1. Содержание МСР-1 в сыворотке крови у больных хроническим панкреатитом в зависимости от формы заболевания. Примечание. Различия с группой сравнения статистически значимы* – р < 0,05
При обследовании гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) было получено повышение его уровня в сыворотке крови у больных 1-й группы ХП до 24,54 ± 2,97 пг/мл (в группе сравнения-7,13 ± 3,48 пг/мл, р = 0,02), во 2-й группе данные были незначимы (рис. 2).
Рис. 2. Содержание G-CSF в сыворотке крови у больных хроническим панкреатитом. Примечание. Значимость различий с группой сравнения * – р < 0,05
Значимое нарастание G-CSF у больных часто рецидивирующим ХП в 3 раза по отношению группы сравнения и в 2 раза – со 2-й группой ХП, вероятно, направлено на усиление иммунного воспаления, что подтверждается сильными корреляционными связями G-CSF с амилазой крови (r = 0,59; р = 0,032) и IL-1β (r = 0,63; р = 0,01).
Итак, высокий уровень G-CSF коррелировал с изменениями экскреторной функции ХП, провоспалительным цитокином IL-1β, что позволяет рассматривать данный фактор как возможный акселератор персистенции реакции воспаления, определяет его иммуно-регулирующее действие воспалительного процесса, а во 2-й группе снижение МСР-1, возможно, связано с понижением реакции нейтрофилов, развития ишемии и фиброза. Пониженный уровень МСР-1, слабая связь с основными показателями воспаления: TNF (r = 0,28; р = 0,64) позволяют рассматривать его как возможный триггер запуска воспаления и его прогрессирования.
Заключение
Установленные нами нарушения цитокинового звена иммунитета, соответствующие степени воспаления и его персистенции в железе, свидетельствуют о прямой связи фактора воспаления МСР-1 и G-CSF с течением хронического панкреатита. Общность участия воспалительных факторов в прогрессировании заболевания характеризуется нарастанием показателей, свидетельствующих о наличии воспаления – IL-1β, TNF-α, INF-γ.
При часто рецидивирующем течении ХП высокий уровень МСР-1 и G-CSF характеризовались наличием корреляции с экзогенными нарушениями, болевым синдромом. Исследования иммуноферментов моноцитарно-макрофагальных факторов имеет определенное значение в ранней диагностике проявления ХП.
Значимое увеличение уровня моноцитарно-макрофагального фактора МСР-1 как фактора иммунного воспаления и увеличение гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) как маркера воспаления определяет большую степень персистирования воспаления у больных часто рецидивирующим хроническим панкреатитом.
Рецензенты:Мингазетдинова Л.Н., д.м.н., профессор, кафедра терапии и клинической фармакологии ИПО БГМУ, г. Уфа;
Фаизова Л.П., д.м.н., профессор, кафедра терапии и общеврачебной практики с курсом гериатрии ИПО БГМУ, г. Уфа.
Работа поступила в редакцию 26.03.2014.