Современная медико-биологическая наука и практическое здравоохранение в последние десятилетия столкнулось с неблагоприятной нарастающей тенденцией заболеваний костно-мышечной системы, в частности, не только среди пожилых людей, но и среди лиц молодого трудоспособного возраста. Также наблюдается недостаточная эффективность профилактических, диагностических и лечебных мероприятий. С целью решить вышеописанные проблемы, а также повысить осведомленность общества о заболеваниях костно-мышечной системы, профилактику данных заболеваний и улучшить диагностические и лечебные принципы, ООН и ВОЗ при поддержке правительств 120 стран мира и тесном содружестве более 750 международных организаций объявили первую декаду третьего тысячелетия «Декадой болезней костей и суставов 2000–2010» (Поворознюк В.В., 2003).
Степень выраженности клинических проявлений и направленность адаптивных реакций зависят от характера и силы повреждающего агента, а также реактивности и резистентности организма. Реактивность во многом определяется состоянием иммунной системы и ее ответной реакцией на то или иное повреждение тканей. При патологическом процессе в системный кровоток поступают внутриклеточные антигены, что стимулирует иммунокомпетентные клетки с последующим развертыванием иммунологических реакций. Степень выраженности иммунного ответа зависит от количества и свойств поступающих антигенов и реактивности иммунокомпетентных клеток (Петров Р.В. с соавт., 1994; Tullberg M., 2000; Zahorec R., 2001; Tsunoda A., 2002; Wang Z., 2002; Stratmoen J., 2005).
Исследование клеточного состава T-лимфоцитов в сыворотке больного позволит получить объективные сведения, характеризующие активность воспалительных и деструктивно-дистрофических процессов, от которых зависит выбор программы дальнейшего обследования и лечения больного (Беленький А.Г. c соавт., 2003).
Цель исследования – изучить роль CD3+ и CD4+ субпопуляции лимфоцитов крови у больных в отдаленном периоде деформирующего артроза голеностопного сустава (ДАГС) различной степени тяжести и в разные сроки катамнестического периода наблюдения.
Материалы и методы исследования
Предметом изучения явились две группы больных.
Первая из них состояла из 312 человек в возрасте от 18 до 65 лет в отдаленном периоде ДАГС различной степени тяжести с катамнезом до трех лет. На момент возникновения заболевания средний возраст пациентов в этой группе составил 39,6 ± 4,44. Среди обследованных было 212 (67,9 %) мужчин и 100 (32,1 %) женщин, что объяснялось большей подверженности травматизму, преимущественно производственному и транспортному, лиц мужского пола.
Следующей категорией больных, включенных в дизайн исследования и представляющих интерес в связи с поставленными целями, явилась группа больных из 94 человек в возрасте от 29 до 65 лет в отдаленном периоде ДАГС различной степени тяжести с катамнезом более десяти лет. Среди обследованных также преобладали лица мужского пола: 52 (55,3 %) мужчины и 42 (44,7 %) женщины. Контроль – 58 человек, здоровые лица, распределение мужчин и женщин равномерное.
Методика определения количества CD3 и CD4 T-лимфоцитов в сыворотке крови. Иммунологическое исследование проводилось путем определения моноклональных антител (мАТ) к СD3 и СD4 антигенам в прямой или непрямой реакции иммунной флюоресценции с учетом результатов на проточном цитофотометре или на люминесцентном микроскопе. Для определения Т-лимфоцитов и Т-хелперов, использовались диагностикумы, которые представляют собой фиксированный латекс, покрытый моноклональными антителами против СD3 и СD4 Т-лимфоцитов.
В круглодонные лунки иммунологических планшет или микропробирки вносят 0,025 мл (25 мкл) СD-диагностикума (антител) и добавляют равный объем лейкосуспензии или лимфовзвеси. Смеси инкубируют 25 мин при 37 °С, затем центрифугируют при 500–1000 об/мин 3 мин и ставят на 1 час или без центрифугирования на ночь при 4 °С в холодильник. Надосадочную жидкость сливают. К осадку добавляют 0,025 мл 0,12 % раствора глютарового альдегида и ресуспензируют. Делают мазок примерно на 1 кв./см площади обезжиренного предметного стекла (монослой клеток на ровной поверхности), высушивают, фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому или галлоцианин-эозином так, чтобы четко были видны ядра лейкоцитов. Подсчитывают процент розеткообразующих лимфоцитов, явно связавших не менее 3-х эритроцитов с СD диагностикумами.
Статистическая обработка материала осуществлялась с помощью пакета прикладных программ Microsoft Excel с расчетом критерия Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение
Содержание различных субпопуляций лимфоцитов крови у больных с ДАГС различной степени тяжести в разные сроки катамнестического периода наблюдения представлено в табл. 1
Таблица 1
Содержание CD3+Т-лимфоцитов в крови у больных ДАГС различной степени тяжести в разные сроки катамнестического периода наблюдения ( %)
|
Степень тяжести |
Катамнестический период до 3-х лет (M ± m) |
Катамнестический период более 10 лет (M ± m) |
|
Доноры |
67,15 ± 5,87 |
|
|
Легкая |
54,54 ± 4,71* |
63,87 ± 5,13 |
|
Средняя |
42,24 ± 3,71* |
58,79 ± 6,65″ |
|
Тяжелая |
31,56 ± 3,17* |
84,57 ± 6,34*″ |
Примечание: * – обозначены величины, достоверно отличающиеся от контроля, ″ – обозначены величины, достоверно отличающиеся от значений в группе сравнения.
У пациентов контрольной группы содержание CD3+Т-лимфоцитов в периферической крови составило 67,15 ± 5,87 %. В раннем катамнестическом периоде при ДАГС отмечалось снижение данного показателя по мере нарастания степени тяжести полученной травмы. У больных ДАГС легкой степени тяжести отмечалось снижение содержания CD3+Т-лимфоцитов в крови на 19 % по отношению к контрольным значениям и составило 54,54 ± 4,71 %; при средней тяжести заболевания данный показатель составил 42,24 ± 3,71 % (–37 % по отношению к контролю); при тяжелой форме ДАГС содержание CD3+Т-лимфоцитов в периферической крови было зафиксировано на уровне 31,56 ± 3,17 % (–54 % по отношению к контрольным значениям). В позднем катамнестическом периоде у пациентов с легкой степенью ДАГС содержание CD3+Т-лимфоцитов не отличалось от контрольных значений и значений, зафиксированных в группе сравнения. При среднетяжелой форме ДАГС содержание CD3+Т-лимфоцитов в крови также не отличалось от контрольных значений, но на 36 % было выше значений, определенных в группе сравнения, и составило 58,79 ± 6,65 %. И, наконец, при тяжелой форме ДАГС в позднем восстановительном периоде отмечалось повышение содержания CD3+Т-лимфоцитов в периферической крови на 25 % по отношению к контрольным значениям и на 71 % – по отношению к значениям, зафиксированным в раннем катамнестическом периоде наблюдения (x² = 123,0, n´ = 3, p < 0,001, rк = 0,700).
Таблица 2
Содержание CD4+Т-лимфоцитов в крови у больных ДАГС различной степени тяжести в разные сроки катамнестического периода наблюдения ( %)
|
Степень тяжести |
Катамнестический период до 3-х лет (M ± m) |
Катамнестический период более 10 лет (M ± m) |
|
Доноры |
42,17 ± 4,09 |
|
|
Легкая |
32,79 ± 4,69* |
43,54 ± 4,19″ |
|
Средняя |
29,34 ± 2,39* |
35,77 ± 4,68″ |
|
Тяжелая |
18,88 ± 2,14* |
67,69 ± 5,31*″ |
Примечание: * – обозначены величины, достоверно отличающиеся от контроля, ″ – обозначены величины, достоверно отличающиеся от значений в группе сравнения.
В контрольной группе у пациентов содержание CD4+Т-лимфоцитов в периферической крови составило 42,17 ± 4,09 %. При легкой степени ДАГС в раннем катамнестическом периоде периоде отмечалось снижение изучаемого показателя на 22 % и составило 32,79 ± 4,69 %, а в позднем катамнестическом периоде содержание CD4+Т-лимфоцитов достоверно не отличалось от контрольных значений, но на 32 % превышало значения, зафиксированные у пациентов в группе сравнения (ранний катамнестический период). Аналогичная динамика прослеживалась и у больных со среднетяжелой степенью ДАГС: в период наблюдения до 3-х лет содержание CD4+Т-лимфоцитов составило 29,34 ± 2,39 % ( что на 31 % ниже по отношению к контролю) и более 10 лет после травмы – 35,77 ± 4,68 %, что достоверно не отличалось от значений контрольной группы, но на 23 % превышало аналогичный показатель в группе пациентов, наблюдавшихся в первые 3 года после травмы. При тяжелой форме ДАГС в период наблюдения до 3-х лет отмечалось снижение содержания CD4+Т-лимфоцитов в периферической крови до 18,88 ± 2,14 % (что на 55 % ниже по отношению к значениям в контрольной группе), а в период наблюдения более 10-и лет – повышение до 67,69 ± 5,31 %, что превысило контрольные значения на 60 %, а значения в группе сравнения – в 2,5 раза.
Заключение
Так, при изучении процентного содержания общей популяции Т-лимфоцитов в отдаленном периоде ДАГС с различными сроками катамнестического наблюдения была прослежена следующая динамика. В раннем восстановительном периоде отмечалось снижение количества данной клеточной популяции прямо пропорционально тяжести травмы ГС: чем тяжелее была травма, тем выраженнее было снижение количества CD3+Т-лимфоцитов в периферической крови. У пациентов контрольной группы содержание CD3+Т-лимфоцитов в крови составило 67,15 ± 5,87 %. При легкой травме отмечалось снижение содержания CD3+Т-лимфоцитов на 19 % по отношению к контрольным значениям и составило 54,54 ± 4,71 %; при черепно-мозговой травме средней степени тяжести данный показатель составил 42,24 ± 3,71 % (что на 37 % меньше по отношению к контролю); при тяжелой форме ДАГС содержание CD3+Т-лимфоцитов в сыворотке крови было зафиксировано на уровне 31,56 ± 3,17 % (на 54 % ниже по отношению к контрольным значениям). В позднем восстановительном периоде у пациентов с легкой формой ДАГС содержание CD3+Т-лимфоцитов не отличалось от контрольных значений и значений, зафиксированных в группах сравнения. При среднетяжелой закрытой черепно-мозговой травме содержание CD3+Т-лимфоцитов в крови также не отличалось от контрольных значений, но на 36 % было выше значений, определяемых в группах сравнения, и составило 58,79 ± 6,65 %. И, наконец, при тяжелой форме ДАГС в позднем восстановительном периоде отмечалось повышение содержания CD3+Т-лимфоцитов в периферической крови на 25 % по отношению к контрольным значениям и на 171 % – по отношению к значениям, зафиксированным в раннем катамнестическом периоде наблюдения.
Рецензенты:Белов В.Г., д.м.н., профессор кафедры патологической физиологии ВМедА им. С.М. Кирова, г. Санкт-Петербург;
Сысоев В.Н., д.м.н., профессор кафедры психофизиологии ВМедА им. С.М. Кирова, г. Санкт-Петербург.