Эффективность племенной работы по воспроизводству лошадей в Украине находится на очень низком уровне (выход жеребят менее 50 %), большинство заводских и локальных пород уже не имеют необходимого минимума племенного воспроизводительного поголовья, что крайне негативно отражается на экономическом состоянии отрасли [1, 6]. На наш взгляд, это связано с тем, что в практике воспроизводства лошадей до сих пор применяется естественная случка. Немаловажным фактором низкого выхода жеребят является отбор жеребцов в производящий состав без учета воспроизводительных качеств, что, впрочем, характерно и для стран с развитым коневодством [3, 9]. А если учесть литературные данные о низкой наследуемости воспроизводительных качеств [7], то отрицательное практическое значение такого отбора жеребцов резко возрастает. Зарубежные специалисты считают, что подобный отбор производителей привел к тому, что низкое качество спермы жеребцов закреплено уже на генетическом уровне [4, 6].
Повышение эффективности воспроизводства лошадей, на наш взгляд, возможно с помощью широкого применения методов биотехнологии воспроизводства лошадей, в частности, искусственного осеменения кобыл замороженно-оттаянной спермой выдающихся жеребцов-производителей. Сегодня искусственное осеменение кобыл в Украине деконсервированной спермой носит спорадический характер. Внедрение искусственного осеменения кобыл замороженно-оттаянной спермой в практику сдерживается, по нашему мнению, рядом причин:
1) откровенное нежелание конных заводов и племрепродукторов работать «искусственно»;
2) отсутствие достаточного количества квалифицированных специалистов в этом направлении;
3) «низкая» эффективность осеменения замороженно-оттаянной спермой (среднемировой показатель около 50–60 %), которая еще до проведения осеменения уже не устраивает племпредприятия;
4) наличие целого ряда нерешенных научных биотехнологических и ветеринарных проблем, в частности, от половины жеребцов в мире получают сперму, которая не выдерживает замораживание-оттаивание [8].
Действительно, проблемы существуют, но это не значит, что они не решаемы. Возможно, низкая биотехнологическая пригодность и оплодотворяющая способность спермиев жеребцов связаны также с использованием на Украине сред, которые в достаточной мере не обеспечивают сохранность мембран половых клеток и, как следствие, приемлемую оплодотворяющую способность и выход жеребят.
Цель исследования – изучить эффективность искусственного осеменения кобыл в зависимости от степени повреждения мембран спермиев и разбавителей для криоконсервирования спермы жеребцов.
Материал и методы исследования
Получение и криоконсервирование спермы от трех жеребцов бельгийской породы, принадлежащих частному коневладельцу, проводили по Харьковской технологии, разработанной лабораторией искусственного осеменения животных ИЖ НААН [4]. Каждый полученный эякулят делили на четыре равные части, разбавляли средами фирм IMV и Minitub, средами SMAY и ЛХЦЖ, проводили замораживание-оттаивание. Целостность мембран сперматозоидов определяли после оттаивания на цитометре DAKO Galaxy. Искусственное осеменение проводили на протяжении шести лет в конных заводах, племрепродукторах, конноспортивных клубах Украины на 78 племенных кобылах украинской верховой породы с применением разработанного нами атравматического одноразового инструментария для кобыл, согласно нашим методическим рекомендациям [5] и УЗИ-сканера для ветеринарии Aliqua Pro с ректальным линейным зондом 6-8 МГц. Статистическую обработку данных осуществляли общепринятыми методиками [2].
Результаты исследования и их обсуждение
В результате замораживания-оттаивания спермы жеребцов разными разбавителями были получены результаты, которые представлены в табл. 1.
Из данных табл. 1 видно, что применение разбавителей фирмы IMV обеспечивает лучшую активность спермы, которая на 1,0–1,02 балла больше (р < 0,001) сред SMAY и Minitub соответственно, на 1,92 балла больше (р < 0,001) среды ЛХЦЖ. Переживаемость спермиев была также достоверно (р < 0,001) лучше при применении сред фирмы IMV в сравнении с другими испытуемыми средами. Корреляционно-дисперсионный анализ показал, что степень влияния применяемого разбавителя на активность и переживаемость спермиев после оттаивания составляет соответственно 17,6 % (р < 0,001) и 14,4 % (р < 0,001).
Таблица 1
Показатели оттаянной спермы жеребцов в зависимости от применяемых разбавителей
|
Среда для замораживания спермы жеребцов |
n |
Сохранность мембран сперматозоидов, % |
Активность спермы, баллы |
Переживаемость спермы при 37 °С, часы |
||
|
живые неповрежденные |
живые поврежденные |
мертвые |
||||
|
ЛХЦЖ |
32 |
18,69 ± 0,22 |
8,19 ± 0,24 |
73,13 ± 0,31 |
2,83 ± 0,08 |
3,80 ± 0,12 |
|
SMAY |
32 |
34,25 ± 0,46* |
13,22 ± 0,22* |
52,84 ± 0,56* |
4,47 ± 0,12* |
4,33 ± 0,17* |
|
Minitub |
32 |
33,94 ± 0,44* |
13,19 ± 0,26* |
52,88 ± 0,24* |
4,45 ± 0,14* |
4,42 ± 0,17* |
|
IMV |
32 |
41,34 ± 1,01* |
15,59 ± 0,25* |
43,06 ± 1,07* |
5,47 ± 0,16* |
5,25 ± 0,13* |
Примечание. * – р < 0,001.
В нашем исследовании биотехнологическая пригодность эякулятов по степени повреждения мембран сперматозоидов существенно отличалась в зависимости от применяемых разбавителей. Наибольшее относительное количество мертвых сперматозоидов было установлено при применении среды ЛХЦЖ, что на 20,29 % больше (р < 0,001) от SMAY, на 20,25 % (р < 0,001) – от Minitub и на 30,07 % (р < 0,001) – от результативности сред фирмы IMV. Лучшую сохранность мембран сперматозоидов жеребца после деконсервации обеспечила среда фирмы IMV, неповрежденных спермиев в ней было на 7,4 % больше (р < 0,001) от среды фирмы Minitub, на 7,09 % (р < 0,001) – от среды SMAY и на 22,65 % (р < 0,001) – от ЛХЦЖ. Наибольшее количество спермиев с поврежденными мембранами было при применении среды IMV, что в среднем на 2,4 % больше (р < 0,001) от среды фирмы Minitub, на 2,37 % (р < 0,001) – от среды SMAY и на 7,4 % (р < 0,001) – от ЛХЦЖ. Корреляционно-дисперсионный анализ показал, что степень влияния применяемой среды на относительное количество спермиев с неповрежденными мембранами, с поврежденными мембранами и на количество мертвых спермиев составляет соответственно 76,5 % (р < 0,001), 71,3 % (р < 0,001) и 82,1 % (р < 0,001).
После получения результатов по первому опыту исследования было проведено искусственное осеменение племенных кобыл украинской верховой породы деконсервированной спермой жеребцов, которая была заморожена с применением вышеупомянутых разбавителей (табл. 2).
Из данных табл. 2 видно, что наибольшую оплодотворяемость от первого осеменения замороженно-оттаянной спермой и выход жеребят был получен при применении спермы с наибольшим количеством спермиев с неповрежденными мембранами и наименьшим количеством мертвых половых клеток, что обеспечила среда фирмы IMV, это соответственно больше на 6,27 и 6,76 % от сред фирмы Minitub, на 5,48 и 5,71 % от среды SMAY, на 27,32 % больше от оплодотворяемости от первого осеменения и на 27,82 % больше от выхода жеребят при применении среды ЛХЦЖ.
Таблица 2
Эффективность искусственного осеменения кобыл оттаянной спермой в зависимости от применяемых разбавителей и степени повреждения мембран
|
Середа для замораживания спермы жеребцов |
Количество кобыл |
Оплодотворяемость от первого осеменения, % |
Выход жеребят, % |
|
IMV |
21 |
90,48 |
85,71 |
|
Minitub |
19 |
84,21 |
78,95 |
|
SMAY |
20 |
85,00 |
80,00 |
|
ЛХЦЖ |
19 |
63,16 |
57,89 |
Заключение
Впервые на Украине проведено исследование влияния степени повреждения мембран сперматозоидов жеребца на эффективность искусственного осеменения кобыл оттаянной спермой. Наибольшая эффективность искусственного осеменения кобыл оттаянной спермой составила 85,71 % выхода жеребят при 41,34 % живых спермиев с неповрежденными мембранами, что обусловлено применением разбавителей фирмы IMV. Наименьший выход жеребят от искусственного осеменения кобыл оттаянной спермой в 57,89 % был получен при применении среды ЛХЦЖ, которая обеспечила количество живых сперматозоидов с неповрежденными мембранами на уровне 18,69 %. Количество живых сперматозоидов с неповрежденными мембранами в оттаянной сперме жеребца на уровне 33,94–34,25 % обеспечило выход жеребят на уровне 78,95–80,00 %.
Рецензенты:
Шаран Н.М., д.с.-х.н., зав. лаборатории физиологии и патологии воспроизводства животных Института биологии животных Национальной академии аграрных наук Украины, г. Львов;
Остапив Д.Д., д.с.-х.н., главный научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и клинической биохимии Института биологии животных Национальной академии аграрных наук Украины, г. Львов.
Работа поступила в редакцию 01.08.2013.