В последние годы большое внимание фармакологами уделяется принятию мер по повышению безопасности фармакотерапии многих заболеваний. Принимаются эти меры как на этапе создания новых лекарственных средств, так и в процессе клинического использования препаратов в виде оптимизации их применения [1; 6].
Серьезной нежелательной лекарственной реакцией являются нарушения лейкопоэза, которые составляют около 40 % всех лекарственных поражений кроветворения. Возможность развития лейкоцитопении и агранулоцитоза отмечается у 10 % людей, принимающих ряд препаратов в течение продолжительного времени [1; 4; 6].
Одно из центральных мест в развитии медикаментозных нарушений лейкопоэза занимают противомикробные препараты. На протяжении шестидесятилетней истории для терапии лепры основным препаратом является производное сульфона – дапсон (4,4’-сульфонилбис[бензоламин]) [8]. Кроме того, он успешно применяется при лечении ряда других заболеваний, таких как герпетиформный дерматит Дюринга, туберкулез, профилактика малярии, лечение и профилактика пневмоцистной пневмонии, профилактика токсоплазмоза, лечение кожного лейшманиоза, мадурская стопа (мицетома), провоцируемая актиномицетами; ревматоидный артрит, субкорнеальный дерматоз, отдельные поражения кожного покрова (на фоне системной красной волчанки), кольцевидная гранулема, гангренозная пиодермия и др. Несмотря на высокую фармакологическую активность, препарат обладает рядом негативных эффектов, обусловленных формированием в ходе метаболизма гидроксиламин-производных. Наряду с нарушениями со стороны сердечно-сосудистой системы (аритмии, кардиалгия), кожных покровов (эксфолиативный дерматит, токсическая эритема, многоформная эритема, токсический эпидермальный некролиз, узелковая эритема, коре- и скарлатиноподобная реакции), органов ЖКТ (поражение печени, анорексия, тошнота, рвота). Дапсон нередко проявляет и гематотоксическое действие, вызывая поражения системы крови (дозозависимый гемолиз с понижением уровня гемоглобина и повышением числа ретикулоцитов, гемолитическая анемия, метгемоглобинемия, гипопластическая анемия) [8]. Высокий процент возникновения перечисленных выше нежелательных дапсон-индуцированных лекарственных реакций требует активного поиска исследователями оптимальных способов их коррекции.
Целью нашей работы явилось исследование возможных корригирующих свойств известного биорегулятора – альфа-токоферола – в отношении показателей лейкоцитарной формулы у лабораторных животных, получающих дапсон.
Материалы и методы исследования
Эксперименты проводили на белых нелинейных крысах обоего пола трёх возрастных групп: предслучного (2–3 мес.) (1-я серия), молодого репродуктивного возраста (7–9 мес.) (2-я серия) и старых (21–24 мес.) (3-я серия). Животные содержались в стандартных условиях вивария при естественном освещении и были синхронизированы по питанию при свободном доступе к воде. Исследование проводили в осенний сезон. Все манипуляции с животными осуществляли в соответствии с нормативной документацией «Об утверждении правил лабораторной практики» и Правил GLP [7; 9].
Особи каждой из трех серий были разделены на следующие группы: контроль 1 (дистиллированная вода), контроль 2 (дапсон), опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг), опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) и опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг). Дапсон («Novartis», Швейцария) вводили животным через зонд в желудок в дозе 25 мг/кг (согласно рекомендациям ВОЗ, соответствует по эффективности 100 мг/кг в день для человека) 1 раз в день в утреннее время в течение 21 дня. Альфа-токоферол (ОАО «Щелковский витаминный завод») вводили животным per os в указанных выше дозах в сочетании с дапсоном при тех же условиях.
Забор крови проводили через сутки после последнего введения препаратов. Относительное содержание лимфоцитов, палочко- и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов подсчитывали при микроскопическом исследовании мазка, окрашенного по Романовскому‒Гимзе [2; 5].
Статистическую обработку результатов исследования проводили при помощи пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2007 и Statisticа 6.0 для Windows с применением непараметрического критерия U-Вилкоксона‒Манна‒Уитни [3].
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты проведённого исследования показали, что курсовое введение дапсона вызывает у крыс всех возрастных групп статистически достоверное снижение относительного содержания нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов (табл. 1, 2).
Под влиянием дапсона у старых крыс-самцов снижение нейтрофилов составляло до 35 %, у самок – менее 30 %. Влияние дапсона на данный вид лейкоцитов мало зависело от пола. В этой же возрастной группе динамика процентной доли эозинофилов и моноцитов в лейкограмме отличалась у разнополых животных: снижение как эозинофилов, так и моноцитов у самцов составляло более 60 %, тогда как у самок – не более чем 30 % (эозинофилы) и 50 % (моноцитов) относительно крыс, не получающих дапсон.
У животных молодого репродуктивного возраста изменения в лейкограмме оказались сравнимы с таковыми у старых особей: у самцов практически совпадали, у самок показатели были ниже на 10 % (моноциты) и на 20 % (эозинофилы).
Относительный уровень нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов в периферической крови молодых самцов предслучного возраста (2–3 мес.) снижался в пределах 45–50 %. Самки репродуктивного возраста оказались более подвержены негативному влиянию дапсона: снижение относительного содержания моноцитов достигало 100 % (в мазках крови не определялись), эозинофилов – 65 %.
Во всех возрастных группах животных, получающих дапсон, в качестве компенсаторной реакции на потерю клеток выявлено значительное повышение относительного содержания палочкоядерных лейкоцитов. Содержание лимфоцитов практически не изменялось.
Таблица 1
Влияние α-токоферола на показатели лейкограммы крыс-самцов, получающих дапсон
|
Группы животных |
n |
Лимфоциты, M ± m, % |
Нейтрофилы |
Эозинофилы, M ± m, % |
Моноциты, M ± m, % |
|
|
палочкоядерные, M ± m, % |
сегментоядерные, M ± m, % |
|||||
|
Самцы старые, % |
||||||
|
Контроль 1 (дист. вода) |
8 |
67,3 ± 3,24 |
3,3 ± 0,4 |
28,2 ± 1,06 |
3,1 ± 0,03 |
1,14 ± 0,04 |
|
Контроль 2 (дапсон) |
8 |
66,7 ± 3,7 |
13,1 ± 0,6* |
18,3 ± 3,7* |
1,17 ± 0,08* |
0,43 ± 0,02* |
|
Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг) |
7 |
69,7 ± 4,7 |
3,86 ± 0,15◊ |
22,6 ± 1,0 |
2,84 ± 0,05◊ |
1,0 ± 0,01◊ |
|
Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) |
7 |
68,7 ± 4,7 |
3,4 ± 0,3◊ |
23,8 ± 1,1 |
2,86 ± 0,05◊ |
1,2 ± 0,02◊ |
|
Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг) |
7 |
68,6 ± 5,3 |
2,7 ± 0,2◊ |
24,0 ± 2,5 |
2,6 ± 0,06◊ |
1,14 ± 0,07◊ |
|
Самцы молодого репродуктивного возраста, % |
||||||
|
Контроль 1 (дист. вода) |
7 |
70,4 ± 2,6 |
5,4 ± 2,3 |
20,3 ± 3,0 |
2,9 ± 0,6 |
1,0 ± 0,5 |
|
Контроль 2 (дапсон) |
9 |
78,5 ± 3,1 |
7,0 ± 2,1 |
12,3 ± 2,0* |
1,9 ± 0,8 |
0,3 ± 0,1* |
|
Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг) |
8 |
71,4 ± 4,3 |
4,6 ± 1,5◊ |
20,4 ± 4,9◊ |
2,5 ± 0,4 |
1,1 ± 0,7◊ |
|
Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) |
8 |
71,1 ± 4,3 |
5,0 ± 1,5 |
20,7 ± 4,9◊ |
2,1 ± 0,4 |
1,1 ± 0,7◊ |
|
Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг) |
8 |
72,3 ± 9,7 |
5,3 ± 1,8 |
19,2 ± 2,3◊ |
2,3 ± 1,3 |
0,9 ± 0,3◊ |
|
Самцы предслучного возраста, % |
||||||
|
Контроль 1 (дист. вода) |
8 |
86,6 ± 3,0 |
1,6 ± 0,1 |
9,8 ± 0,2 |
1,4 ± 0,02 |
0,6 ± 0,02 |
|
Контроль 2 (дапсон) |
9 |
92,2 ± 2,7 |
2,3 ± 0,1* |
4,5 ± 0,2* |
0,7 ± 0,02* |
0,3 ± 0,03* |
|
Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг) |
8 |
89,3 ± 0,8 |
1,2 ± 0,2◊ |
8,6 ± 0,1◊ |
1,3 ± 0,08◊ |
0,6 ± 0,02◊ |
|
Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) |
8 |
86,2 ± 2,7 |
1,0 ± 0,2◊ |
10,7 ± 1,3◊ |
1,7 ± 0,1◊ |
0,5 ± 0,1◊ |
|
Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг) |
8 |
87,1 ± 2,9 |
1,1 ± 0,1◊ |
10,1 ± 1,1◊ |
1,1 ± 0,2 |
0,6 ± 0,2 |
Примечание:* – p < 0,05 – относительно контроля 1; ◊ – p < 0,05– относительно контроля 2 (критерий U-Вилкоксона‒Манна‒Уитни).
Таблица 2
Влияние α-токоферола на показатели лейкограммы крыс-самок, получающих дапсон
|
Группы животных |
n |
Лимфоциты, M ± m, % |
Нейтрофилы |
Эозинофилы, M ± m, % |
Моноциты, M ± m, % |
|
|
палочкоядерные, M ± m, % |
сегментоядерные, M ± m, % |
|||||
|
Самки старые, % |
||||||
|
Контроль 1 (дист. вода) |
8 |
72,3 ± 4,8 |
1,4 ± 0,05 |
22,1 ± 1,2 |
3,0 ± 0,1 |
1,2 ± 0,08 |
|
Контроль 2 (дапсон) |
8 |
75,8 ± 3,1 |
5,2 ± 1,1* |
16,3 ± 2,1* |
2,1 ± 0,1* |
0,6 ± 0,02* |
|
Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг) |
7 |
70,0 ± 10,8 |
2,0 ± 0,2◊ |
24,9 ± 1,1◊ |
2,9 ± 1,2 |
1,1 ± 0,3◊ |
|
Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) |
7 |
70,0 ± 10,8 |
2,0 ± 0,2◊ |
25,7 ± 3,7◊ |
3,1 ± 1,2 |
0,9 ± 0,3 |
|
Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг) |
7 |
64,4 ± 9,7 |
2,2 ± 0,5◊ |
26,4 ± 4,6◊ |
3,0 ± 1,1 |
1,0 ± 0,4 |
|
Самки молодого репродуктивного возраста, % |
||||||
|
Контроль 1 (дист. вода) |
7 |
79,5 ± 2,6 |
2,8 ± 1,0 |
16,1 ± 1,2 |
1,67 ± 0,1 |
1,0 ± 0,03 |
|
Контроль 2 (дапсон) |
9 |
80,3 ± 3,2 |
6,3 ± 1,0* |
11,2 ± 1,1* |
0,8 ± 0,07* |
0,4 ± 0,05* |
|
Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг) |
8 |
80,2 ± 2,5 |
2,7 ± 0,2◊ |
14,8 ± 0,9◊ |
1,4 ± 0,6◊ |
1,0 ± 0,2◊ |
|
Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) |
8 |
80,2 ± 2,5 |
2,7 ± 0,1◊ |
14,8 ± 1,2 |
1,3 ± 0,3◊ |
1,6 ± 0,2◊ |
|
Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг) |
8 |
82,7 ± 2,9 |
3,1 ± 1,2◊ |
15,5 ± 1,6 |
2,0 ± 0,2◊ |
1,5 ± 0,7◊ |
|
Самки предслучного возраста, % |
||||||
|
Контроль 1 (дист. вода) |
8 |
87,7 ± 1,9 |
1,2 ± 0,1 |
9,0 ± 1,0 |
1,8 ± 0,05 |
0,3 ± 0,01 |
|
Контроль 2 (дапсон) |
9 |
88,8 ± 1,5 |
5,4 ± 0,04* |
5,3 ± 0,2 |
0,5 ± 0,02* |
0* |
|
Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг) |
8 |
86,5 ± 2,7 |
1,2 ± 0,2◊ |
10,8 ± 1,1◊ |
1,2 ± 0,06◊ |
0,3 ± 0,02◊ |
|
Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) |
8 |
89,3 ± 1,4 |
0,9 ± 0,1◊ |
8,3 ± 1,2◊ |
1,2 ± 0,2◊ |
0,3 ± 0,02◊ |
|
Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг) |
8 |
91,1 ± 2,0 |
1,3 ± 0,07◊ |
8,8 ± 1,7◊ |
1,5 ± 0,1◊ |
0,3 ± 0,01◊ |
Примечание:* – p < 0,05 – относительно контроля 1; ◊ – p < 0,05– относительно контроля 2 (критерий U-Вилкоксона‒Манна‒Уитни).
Сочетанное введение α-токоферола с дапсоном препятствовало развитию дапсон-индуцированных негативных процессов. У особей всех возрастных групп наблюдали выраженное статистически достоверное снижение в крови незрелых форм лейкоцитов относительно крыс, получающих дапсон. Независимо от пола при комбинированной терапии не наблюдали значительных изменений в показателях формулы крови относительно контрольных крыс.
Выводы
Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что влияние дапсона на лейкоциты периферической крови принципиально не зависит от пола и возраста животных и отличается только интенсивность воздействия. Биорегулятор α-токоферол в дозах 2–10 мг/кг, стабилизируя мембраны клеток и, вероятно, вмешиваясь в процессы пролиферации, способен оказывать корригирующее воздействие, приводя показатели к величинам сопоставимым с контрольными. Осуществление коррекции небольшими дозами α–токоферола позволяет длительное его использование без возможных негативных эффектов. Диапазон доз от 2 до 10 мг/кг предполагает возможность применения индивидуального подхода в зависимости от пола, возраста, а также исходного антиоксидантного статуса организма.
На основании полученных данных может быть разработан способ коррекции дапсон-индуцированной лейкопении для клинического использования в дерматологии, в том числе в лепрологии, при лечении ряда инфекционных болезней (малярии, пневмоцистной пневмонии и др.).
Рецензенты:
Дегтярёв О.В., д.м.н., профессор кафедры дерматовенерологии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Астрахань;
Нестеров Ю.В., д.б.н., профессор кафедры физиологии и морфологии человека и животных, ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет», г. Астрахань.
Работа поступила в редакцию 19.07.2013.