Практически для всех органов и систем человеческого организма свойственна онтогенетическая динамика их функциональных способностей [9]. Имея определенную активность в детстве, они достигают своего функционального расцвета в юности, сохраняют большинство параметров в зрелости и испытывают признаки увядания в пожилом и старческом возрастах [1, 3]. Большую роль в данном процессе играет система гемостаза, физиологические особенности которой в каждом конкретном случае способны либо ускорить геронтогенез, либо его затормозить [7, 8]. Представляют большой практический интерес агрегационные свойства тромбоцитов в онтогенезе [5, 6] и, в частности, во втором зрелом возрасте - этапе индивидуального развития, непосредственно предшествующем периоду явного увядания организма [1]. Определение нормативных значений у здоровых лиц данного возраста позволит оценивать возрастные изменения агрегационных возможностей тромбоцитов у пожилых, являясь желаемыми ориентирами для коррекционных воздействий на гемостаз у лиц старше 60 лет. В этой связи была поставлена цель настоящего исследования - определить динамику активности тромбоцитов у здоровых людей второго зрелого возраста.
Материалы и методы исследования
В группу исследования включены 146 клинически здоровых людей второго зрелого возраста, ведущих здоровый образ жизни и неимеющих обменных и сердечно-сосудистых заболеваний (26 человек 36 лет, 23 человека 40 лет, 25 человек 45 лет, 27 человек 50 лет, 23 человека 55 лет и 22 человека в возрасте 60 лет). У обследованных оценивали внутритромбоцитарное перекисное окисление липидов (ПОЛ) по концентрации малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуровой кислотой [4] и по уровню в них ацилгидроперекисей (АГП) [2]. Внутритромбоцитарную антиоксидантную систему характеризовали активность каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) [7]. У всех обследованных производился подсчет количества тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева. Агрегация тромбоцитов (АТ) исследовалась визуальным микрометодом по Шитиковой А.С. (1999) [11] со стандартным количеством тромбоцитов в плазме 200·109 тр./л с использованием в качестве индукторов АДФ (0,5·10-4 М.), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл) (НПО «Ренам»), адреналина (5·10-6 М., завод Гедеон Рихтер), а также сочетания АДФ и адреналина, АДФ и коллагена, адреналина и коллагена в аналогичных дозах. Внутрисосудистая активность тромбоцитов (ВАТ) определялась визуально с использованием фазовоконтрастного микроскопа [12] по Шитиковой А.С. и соавт. (1997). Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение
У взятых в исследование людей все оцениваемые основные физиологические параметры, морфологический и биохимический анализы крови, находились в границах общепринятой нормы.
Количество первичных продуктов ПОЛ-АГП в тромбоцитах здоровых 36-летних лиц составляло 2,40 ± 0,16 Д233/109тр., достоверно не меняясь до 40 лет и непрерывно увеличиваясь с 45 лет (2,51 ± 0,14 Д233/109тр.) до 60 лет (2,77 ± 0,15 Д233/109тр.) на 10,3%. При этом уровень МДА в тромбоцитах - конечного продукта ПОЛ - у 36-летних обследованных достигал 0,65 ± 0,05 нмоль/109тр., оставался неизменным до 40 лет и начинал нарастать с 45 лет, достигая у 60-летних 0,77 ± 0,13 нмоль/109тр.
Активность каталазы и СОД в кровяных пластинках, находившихся под наблюдением здоровых людей второго зрелого возраста, не имела достоверной динамики до 40 лет, составляя в этом возрасте 9410,0 ± 94,7 МЕ/109тр. и 1569,0 ± 12,5 МЕ/109тр., соответственно. У бо- лее старших обследованных отмечена более низкая активность каталазы и СОД (в 45 лет 9210,0 ± 60,4 МЕ/109тр., 1502,1 ± 11,9 МЕ/109тр., в 55 лет - 8650,0 ± 62,0 МЕ/109тр., 1408,0 ± 14,0 МЕ/109тр., в 60 лет - 8411,2 ± 56,8 МЕ/109тр., 1372,3 ± 12,6 МЕ/109тр.,
соответственно).
У здоровых 36-летних лиц время развития АТ под влиянием коллагена составляло 33,0 ± 0,14 с., находясь на сходном уровне у 40-летних обследованных (табл. 1). Аналогично невысокая активность АТ у здоровых 36-летных отмечена под влиянием АДФ (43,9 ± 0,08 с.) и ристомицина (48,6 ± 0,16 с.). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, составляя у 36-летних 54,2 ± 0,10 и 102,6 ± 0,22 с. соответственно достоверно не отличаясь от таковой у 40-летних. Установлено также отсутствие динамики АТ у здоровых лиц между 36 и 40 годами при сочетанном применении индукторов. При этом уже у 45-летних выявлено достоверное ускорение АТ с изолированными индукторами и особенно их сочетаниями, максимально выраженное в группе обследованных 60 летнего возраста: для АДФ + адреналин - 27,3 ± 0,23 с., для АДФ+колла- ген - 19,2 ± 0,15 с., для адреналин+колла- ген - 24,0 ± 0,07 с. (табл. 1).
Таблица 1
Агрегационная активность тромбоцитов у здоровых людей второго зрелого возраста
|
Параметры |
Здоровые лица второго зрелого возраста, n = 146 M ± m |
|||||
|
36 лет, n = 26 |
40 лет, n = 23 |
45 лет, n = 25 |
50 лет, n = 27 |
55 лет, n = 23 |
60 лет, n = 22 |
|
|
Агрегация с АДФ, с. |
43,9 ± 0,08 |
43,8 ± 0,12 |
40,1 ± 0,10 р < 0,05 |
38,2 ± 0,16 р < 0,05 |
35,6 ± 0,07 р < 0,05 |
32,5 ± 0,09 р < 0,05 |
|
Агрегация с коллагеном, с. |
33,0 ± 0,14 |
32,8 ± 0,12 |
31,0 ± 0,07 р < 0,05 |
29,6 ± 0,05 р < 0,05 |
27,2 ± 0,11 р < 0,05 |
25,4 ± 0,06 р < 0,05 |
|
Агрегация с тромбином, с. |
54,2 ± 0,10 |
54,4 ± 0,08 |
52,1 ± 0,14 р < 0,05 |
50,2 ± 0,12 р < 0,05 |
48,2 ± 0,16 р < 0,05 |
45,7 ± 0,13 р < 0,05 |
|
Агрегация с ристомицином, с. |
48,6 ± 0,16 |
48,2 ± 0,02 |
46,1 ± 0,09 р < 0,05 |
43,8 ± 0,11 р < 0,05 |
41,4 ± 0,15 р < 0,05 |
38,2 ± 0,12 р < 0,05 |
|
Агрегация с Н2О2, с. |
48,3 ± 0,16 |
48,2 ± 0,07 |
45,8 ± 0,13 р < 0,05 |
43,4 ± 0,08 р < 0,05 |
41,2 ± 0,09 р < 0,05 |
39,0 ± 0,14 р < 0,05 |
|
Агрегация с адреналином, с. |
102,6 ± 0,22 |
101,9 ± 0,18 |
97,2 ± 0,06 р < 0,05 |
92,2 ± 0,24 р < 0,05 |
89,4 ± 0,21 р < 0,05 |
86,3 ± 0,26 р < 0,05 |
|
Агрегация с АДФ + + адреналином, с. |
35,7 ± 0,16 |
35,9 ± 0,19 |
33,0 ± 0,20 р < 0,05 |
31,4 ± 0,15 р < 0,05 |
29,8 ± 0,14 р < 0,05 |
27,3 ± 0,23 р < 0,05 |
|
Агрегация с АДФ + коллагеном, с. |
26,4 ± 0,16 |
26,5 ± 0,14 |
24,7 ± 0,06 р < 0,05 |
23,1 ± 0,10 р < 0,05 |
20,8 ± 0,10 р < 0,05 |
19,2 ± 0,15 р < 0,05 |
|
Агрегация с адреналином + коллагеном, с. |
28,1 ± 0,12 |
28,3 ± 0,10 |
27,0 ± 0,06 р < 0,05 |
25,4 ± 0,03 р < 0,05 |
23,5 ± 0,05 р < 0,05 |
24,0 ± 0,07 р < 0,05 |
Условные обозначения: р - достоверность различий оцениваемых показателей в различные возрастные периоды. В последующей таблице обозначения сходные.
Количественное содержание дискоцитов в крови у здоровых лиц 36- и 40-летнего возраста составило 81,4 ± 0,16, и 81,2 ± 0,07%, соответственно (табл. 2). Число диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов в их кровотоке было невысоко и достоверно не различалось. Вследствие этого сумма активных форм тромбоцитов в 36 лет также была сравнима с таковой в 40 лет (18,8 ± 0,24%). Однако уже в 45 лет у здоровых людей отмечено достоверное усиление показателей ВАТ, постепенно повышающееся к 60 годам жизни. Так, к концу второго зрелого возраста количественное содержание дискоцитов в крови обследованных составило 71,3 ± 0,12%, число диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов также достоверно превышало таковое у 36-летних. Вследствие этого сумма активных форм тромбоцитов также претерпела достоверное увеличение, составляя к 60 годам 28,7 ± 0,15%. В крови обследованных людей уровни свободноциркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов не имели достоверных различий в начале второго зрелого возраста, составляя к 40 годам 3,4 ± 0,07 и 0,30 ± 0,06 на 100 свободнолежащих тромбоцитов, в последующем постепенно нарастая и достигная к 60 годам 6,9 ± 0,12 и 0,71 ± 0,14 на 100 свободнолежащих тромбоцитов (р < 0,01) соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у обследованных также не менялось между 36 до 40 годами, составляя у 40-летних 6,5 ± 0,03%, нарастая у более старших наблюдаемых до 9,4 ± 0,11% в 60 лет.
Таблица 2
Внутрисосудистая активность тромбоцитов у здоровых людей второго зрелого возраста
|
Параметры |
Здоровые лица второго зрелого возраста, n = 146 M ± m |
|||||
|
36 лет, n = 26 |
40 лет, n = 23 |
45 лет, n = 25 |
50 лет, n = 27 |
55 лет, n = 23 |
60 лет, n = 22 |
|
|
Дискоциты,% |
81,4 ± 0,16 |
81,2 ± 0,07 |
79,3 ± 0,09 р < 0,05 |
76,8 ± 0,11 |
74,3 ± 0,05 |
71,3 ± 0,12 р < 0,01 |
|
Диско-эхиноциты,% |
9,9 ± 0,07 |
10,0 ± 0,10 |
10,1 ± 0,09 |
11,8 ± 0,14 р < 0,05 |
12,9 ± 0,20 р < 0,05 |
14,1 ± 0,16 р < 0,05 |
|
Сфероциты,% |
4,4 ± 0,09 |
4,5 ± 0,08 р < 0,05 |
5,2 ± 0,04 р < 0,01 |
5,7 ± 0,03 |
6,8 ± 0,09 р < 0,05 |
7,9 ± 0,12 р < 0,01 |
|
Сферо-эхиноциты,% |
3,1 ± 0,11 |
3,2 ± 0,08 р < 0,05 |
4,0 ± 0,03 р < 0,01 |
4,5 ± 0,05 |
4,9 ± 0,06 р < 0,05 |
5,4 ± 0,04 р < 0,01 |
|
Биполярные формы,% |
1,2 ± 0,05 |
1,1 ± 0,04 |
1,4 ± 0,03 |
1,2 ± 0,02 |
1,1 ± 0,03 |
1,3 ± 0,02 р < 0,01 |
|
Сумма активных форм,% |
18,6 ± 0,14 |
18,8 ± 0,24 р < 0,05 |
20,7 ± 0,16 р < 0,01 |
23,2 ± 0,09 |
25,7 ± 0,12 |
28,7 ± 0,15 р < 0,01 |
|
Число тромбоцитов в агрегатах,% |
6,7 ± 0,08 |
6,5 ± 0,03 р < 0,05 |
7,2 ± 0,06 р < 0,01 |
7,8 ± 0,08 |
8,3 ± 0,05 |
9,4 ± 0,11 |
|
Число малых агрегатов по 2-3 тромбоцита на 100 свободнолежащих тромбоцитов,%. |
3,2 ± 0,05 |
3,4 ± 0,07 |
4,3 ± 0,08 р < 0,05 |
5,4 ± 0,06 р < 0,05 |
6,1 ± 0,07 р < 0,05 |
6,9 ± 0,12 р < 0,05 |
|
Число средних и больших агрегатов, 4 и более тромбоцита на 100 свободнолежащих тромбоцитов,% |
0,30 ± 0,06 |
0,31 ± 0,07 |
0,38 ± 0,11 |
0,46 ± 0,16 |
0,58 ± 0,20 р < 0,05 |
0,71 ± 0,14 |
Таким образом, у здоровых лиц второго зрелого возраста отмечается стабильность тромбоцитарной активности между 36 и 40 годами жизни и последующее ее постепенное усиление к 60 годам.
Морфология и функции организма, обеспечивающие его жизнеспособность, во многом зависят от адекватности реологических свойств крови [5, 6] и, тем самым, от объема поступления питательных веществ и кислорода к тканям, которые неизбежно меняются в онтогенезе под действием массы внутренних и внешних факторов [1, 3]. Видную роль в динамике микроциркуляции играет активность кровяных пластинок, находящаяся под серьезным влиянием процессов ПОЛ [8, 9].
В исследовании у здоровых людей 36-45 лет отмечено отсутствие достоверной динамики антиоксидантной защиты тромбоцитов и уровня в них ПОЛ, что во многом обусловливало сохранение невысокой активности кровяных пластинок. Интенсификация ПОЛ у более старших обследованных сопровождалась более высокой активностью у них тромбоцитов, максимально выраженной в 60-летнем возрасте. Очевидно, это связано с ростом чувствительности рецепторов тромбоцитов к экзогенным влияниям на тромбоциты, к которым относится и повышение концентрации в крови фактора Виллебранда - кофактора адгезии тромбоцитов с одновременным нарастанием числа рецепторов к нему - (GPI в) на поверхности кровяных пластинок. Рецепторные перестройки на мембранах кровяных пластинок, обусловленные реакцией системы гемостаза на динамику функционального состояния всего организма, несомненно, являются следствием сложных приспособительных реакций и мембранного состава тромбоцитов, обусловливающих в конечном счете их адаптацию к сложившимся возрастным изменениям в тканях и органах.
Регистрация АТ с целым рядом индукторов у лиц с 36 по 60 лет подтвердила возрастзависимое постепенное усиление агрегативной функции кровяных пластинок. При этом ускорение АТ при связывании, в т.ч. сильных агонистов агрегации - кол- лагена и тромбина с рецепторами на мембране тромбоцитов может обусловливаться во многом активацией фосфолипазы С, стимулирующей фосфоинозитольный путь через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы. Образующееся при этом повышающееся количество инозитолтрифосфата способствует более активному выходу Са2+ из внутритромбоцитарных депо. Усиление этих механизмов обусловливает выраженную интенсификацию сокращения актомиозина. Возможно, что большую роль в ускорении АТ также играет постепенное зависимое от возраста усиление активности ферментных систем тромбоцитов, в т.ч. тромбоксанообразования, вызывающее более раннюю реакцию кровяных пластинок на стимул.
Выявленное ускорение с возрастом АТ со слабыми агонистами агрегации тромбоцитов - АДФ и адреналином, взаимодействующими с рецепторами их мембраны и стимулирующими экспрессию фибриногеновых рецепторов (GPIIв-IIIа) и активность фосфолипазы А2, несомненно, имеет в основе увеличение с возрастом выхода из фосфолипидов арахидоновой кислоты и усиление образования тромбоксана А2.
Оценка АТ с применением двух индукторов показала их взаимопотенциирующее действие, подтвердив закономерности, выявленные при исследовании АТ с изолированными агонистами.
Найденное увеличение ВАТ у лиц второго зрелого возраста после 45-летнего возраста косвенно указывает на повышение в крови с возрастом уровня индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина) и рост базальной чувствительности к ним тромбоцитов. При этом у здоровых лиц с 45 лет в кровотоке начинает развиваться достоверное снижение количества интактных дискоидной формы тромбоцитов, что указывает на увеличение активности их рецепторов. Нарастание в крови здоровых лиц 45-60-летнего возраста числа диско-эхиноцитов и других активных форм тромбоцитов совпадает с повышением агрегационной активности тромбоцитов и связано в первую очередь с усилением экспрессии на их мембране фибриногеновых рецепторов (GP IIв - IIIа).
Заключение
Таким образом, после 45-летнего возраста у здоровых людей постепенно повышается агрегационная активность тромбоцитов, что ведет к увеличению содержания в их крови активных форм кровяных пластинок, неизбежно приводя к повышению числа циркулирующих агрегатов различных размеров. Это усиливает отмечающуюся с возрастом морбидную отягощенность, усиливая негативные влияния на организм факторов среды, способствуя реализации наследственной предрасположенности к различным, в первую очередь, сердечно-сосудистым заболеваниям.
Рецензенты:
-
Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор кафедры биохимии Курского государственного медицинского университета, г. Курск;
-
Фурман Ю.В., д.б.н., профессор, декан факультета социальной работы, педагогики и психологии Курского института социального образования (филиал) РГСУ, г. Курск.
Работа поступила в редакцию 25.07.2012.