Распространенность заболеваний пародонта достигает 98 % [3], что обусловливает увеличение объема стоматологической помощи населению, в том числе ортопедической. Осуществление неизбежного в таких случаях одонтопрепарирования сопряжено с развитием воспалительных процессов в полости рта [1], интенсивность которых зависит как от воздействия ряда экзо- и эндоэкологических факторов (табакокурение, особенности питания, микробная флора и т.п.), возраста, так и от адекватности местных и системных иммунологических реакций [2, 10].
Роль местного иммунитета помимо продукции иммуноглобулинов, направленной на элиминацию чужеродных антигенов, заключается также в регуляции тканевого гомеостаза слизистой оболочки (СО) полости рта за счет продукции иммунокомпетентными клетками широкого спектра цитокинов. Некоторые из этих цитокинов, в частности интерлейкин-1 (Ил-1), рассматривают в качестве патогенетических маркеров тяжелых форм хронического пародонтита [8, 9]. В то же время для совершенствования критериев прогноза тяжести течения патологического процесса в полости рта и эффективности проводимого лечения необходима динамичная оценка широкого спектра цитокинов (и их соотношений) и сопоставление их изменений с характером деструктивных и регенераторных процессов. Важное значение имеет также анализ влияния наиболее распространенных неблагоприятных экзогенных факторов, к которым относится, в частности, табакокурение, на структурно-функциональную реорганизацию СО полости рта.
Цель работы - провести морфологический анализ биоптатов десны и изучить показатели местного иммунитета ротовой полости при проведении препаровки зубов у курящих и некурящих пациентов.
Материал и методы исследования
Проведен клинико-морфологический и иммунологический анализ СО полости рта у мужчин, нуждающихся в ортопедическом лечении в возрасте от 26 до 56 лет (средний возраст - 36,5 ± 1,1 лет). Обследование проводили непосредственно перед началом ортопедического лечения и через 14-16 сут после одонтопрепарирования. Всех пациентов разделили на 3 группы: 1-я группа - общая (20 человек), в которую входили курящие и некурящие пациенты; 2-я группа - некурящие (12 человек); 3-я группа - курящие пациенты (8 человек). Одонтопрепарирование витальных зубов (премоляров и моляров с неизмененным местоположением в зубном ряду) проводили по общепринятой методике. Все исследования выполнены с информированного согласия пациентов и в соответствии с этическими нормами Хельсинкской декларации (2000 г.).
Для морфологического исследования по медицинским показаниям под проводниковой анестезией брали фрагменты СО десны размером 2 мм3. Биоптаты десны фиксировали в 10 %-м нейтральном формалине, проводили стандартную обработку ткани для заливки образцов в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Романовскому-Гимзе. Образцы ткани, предназначенные для исследования в электронном микроскопе, после фиксации в 4 %-м параформальдегиде дофиксировали в 1 %-м растворе четырехокиси осмия; после стандартной обработки заливали в смесь эпона и аралдита. Полутонкие (1 мкм) срезы окрашивали азуром II. Ультратонкие срезы контрастировали спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца, просматривали в электронном микроскопе JEM 1010.
Для проведения иммунологического исследования ротовую жидкость собирали утром натощак по методу, рекомендованному Международной ассоциацией стоматологов. С помощью твердофазного иммуноферментного анализа в ротовой жидкости определяли концентрацию секреторных иммуноглобулинов (sIgA, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), интерлейкинов 2, 4 и 6 (Ил-2, Ил-4, Ил-6), фактора некроза опухолей α (ФНО-α) и интерферона γ (Ифн-γ) (иммуноферментные тест-системы фирмы «Полигност», С.-Петербург, Россия).
При статистическом анализе результатов исследования использовали стандартные методы вариантной статистики [7]. Проверку статистической гипотезы равенства групповых средних проводили по t-критерию Стьюдента. Использовали программное обеспечение Statistica 5.0.
Результаты исследования и их обсуждение
Структура выявленных изменений СО полости рта и десны в группах курящих и некурящих пациентов свидетельствует об отрицательном влиянии курения на сохранение здоровья. У курящих пациентов индексы гигиены полости рта были достоверно выше, чем у некурящих: РМА-индекс в 3,5 раза, OHI-S-индекса - в 4,8 раза. У 50 % курящих мужчин выявлена легкая степень течения гингивита, у 12,5 % - средняя, у 37,5 % - тяжелая степень (РМА-индекс не превышал 70 %). В группе некурящих у 83,3 % выявлена легкая степень гингивита, у 16,7 % пациентов - средняя степень. После одонтопрепарирования отмечено более выраженное увеличение РМА индекса у некурящих пациентов (в 3 раза) по сравнению с курящими (в 1,7 раза).
У курящих пациентов чаще регистрировались катаральные изменения СО полости рта, а также симптомы атрофического гингивита. В биоптатах десны при катаральном гингивите в большинстве случаев отмечался акантоз и папилломатозные выросты эпителия, которые относятся к наиболее распространенным общепатологическим реакциям многослойного эпителия на неблагоприятные хронические воздействия [6]. Ведущим морфологическим признаком была выраженная структурно-функциональная гетерогенность эпителиоцитов базального и шиповатого слоев, которая проявлялась в различных тинкториальных свойствах клеток. Значительная часть эпителиоцитов шиповатого и зернистого слоев характеризовались дистрофическими изменениями, наблюдался также некробиоз. В большинстве случаев роговой слой был сохранен и имел несколько рядов ороговевших клеток. На различных участках плотность его варьировалась, в некоторых случаях отмечался дискератоз. При атрофическом гингивите регистрировалась очаговая атрофия эпителиального пласта при сохранении папилломатозных выростов, иногда значительных.
Одним из манифестных и постоянно встречающихся морфофункциональных изменений эпителиального пласта у пациентов с хроническими воспалительными заболеваниями полости рта, нуждающихся в ортопедическом лечении, были выраженные расширения межклеточных пространств в базальном и шиповатом слоях. Наиболее выраженными эти изменения были после одонтопрепарирования у пациентов всех групп. Подобные структурные преобразования СО полости рта описаны при различных патологических процессах и использовании разных пломбировочных материалов [5] и могут быть следствием проникновения транссудата из сосочкового слоя в базальный и шиповатый слои эпидермиса. С нашей точки зрения, значительное расширение межклеточных пространств в эпидермальном пласте может быть обусловлено также угнетением регенераторно-пластических процессов в эпителиоцитах, снижением в них биосинтеза ряда важнейших структурно-функциональных белков, в частности, входящих в состав десмосом.
При электронно-микроскопическом исследовании в эпителиоцитах шиповатого слоя отмечалось появление вакуолеобразных расширений в околоядерной области, «опустошение» околоядерной зоны (парциальный некроз цитоплазмы), уменьшение количества гранул кератогиалина и плотных межклеточных контактов. Подобные ультраструктурные изменения были наиболее выраженными у лиц, злоупотреблявших табакокурением, и отражали нарушения процессов внутриклеточной регенерации. Расширенные межклеточные пространства содержали, как правило, хлопьевидную субстанцию, мембранозные структуры; отмечался также диапедез лимфоцитов и клеток макрофагального ряда в эпителий СО десны.
В собственной пластинке СО десны до одонтопрепарирования отмечался разной выраженности отек сосочкового слоя; межэпителиальные сосочки имели различную высоту. В большинстве случаев отмечалась периваскулярная преимущественно мононуклеарная инфильтрация. После одонтопрепарирования нарастал отек сосочкового СО десны, происходило усиление и распространение воспалительно-клеточной инфильтрации.
Отмеченные в динамике одонтопрепарирования морфологические изменения сопровождались изменениями показателей местного иммунитета в полости рта. Концентрация секреторного иммуноглобулина А (sIgA) в ротовой жидкости в общей группе до одонтопрепарирования варьировалась от 40,72 до 58,6 мкг/мл, после одонтопрепарирования она достоверно не изменялась (от 39,08 до 57,44 мкг/мл). Содержание sIgA в ротовой жидкости было снижено у курящих пациентов как до проведения одонтопрепарирования - 46,9 ± 1,3 мкг/мл (у некурящих - 53,08 ± 0,86 мкг/мл, p < 0,05), так и после - 47,1 ± 1,3 мкг/мл (у некурящих - 52,7 ± 0,7 мкг/мл, p < 0,05).
Соотношения уровней sIgA в сыворотке крови и ротовой жидкости (sIgAск/sIgASрж) в общей группе до и после одонтопрепарирования составили соответственно 0,26 ± 0,03 и 0,21 ± 0,03, у курящих лиц эти показатели (соответственно 0,09 ± 0,01 и 0,04 ± 0,01) были в 4 раза и более ниже, чем у некурящих мужчин (соответственно 0,36 ± 0,03 и 0,31 ± 0,02). Снижение соотношений sIgAск/sIgASрж у курящих лиц свидетельствует об истощении адаптационных резервов организма, напряжении защитных факторов местного иммунитета полости рта. Соотношение субклассов иммуноглобулина G в ротовой жидкости (по уровню их концентрации) было следующим: G1 > G2 > G4 > G3; оно было выявлено во всех обследуемых группах, отличалось от такового в сыворотке крови и не изменялось в ходе проведения ортопедической терапии. Концентрации IgG1, IgG2, IgG4 в ротовой жидкости у курящих пациентов были достоверно снижены по сравнению с таковыми у некурящих. При повторном исследовании найденные различия сохранялись и носили более выраженный характер.
Особенностями формирования местного иммунитета полости рта в отличие от системного иммунитета были высокие концентрации в ротовой жидкости Ил-2, Ил-6, ФНО-α и значительно сниженные уровни Ил-4 и Ифн-γ. При сравнении концентраций Ил-2, Ил-4 и Ил-6 в ротовой жидкости у курящих и некурящих лиц до лечения выявлено их более низкое содержание у некурящих. Концентрации ФНО-α и Ифн-γ в ротовой жидкости пациентов всех исследованных групп существенно не различались.
После проведения одонтопрепарирования у курящих и некурящих пациентов сохранялись существенные отличия цитокинового статуса местного иммунитета. Для обеих групп было характерно снижение содержания в ротовой жидкости Ил-2, однако в группе курящих мужчин его концентрация оставалась более высокой (в 9 раз по сравнению с показателем группы некурящих лиц). Отмечена разнонаправленная динамика изменений концентраций цитокинов-антагонистов (Ил-4 и Ил-6) после одонтопрепарирования у некурящих и курящих мужчин. В ротовой жидкости некурящих пациентов концентрация провоспалительного Ил-6 существенно не менялась, в то время как концентрация Ил-4 возрастала почти в 6 раз (p < 0,05). У лиц, злоупотреблявших табакокурением, концентрации обоих цитокинов снижались. У некурящих лиц концентрация ФНО-α после одонтопрепарирования повышалась в 1,9 раз (до 729,50 пкг/л), в то время как у курящих - в 1,4 раз (до 566,62 пкг/л).
Нарушение баланса Ил-2/Ил-4 может приводить к нарушению внутрииммунных отношений и развитию иммунопатологических процессов [4], поскольку одним из основных биологических эффектов Ил-4 является активация пролиферации и дифференцировки иммунокомпетентных клеток, регулирование биологических эффектов Ил-2.
Таким образом, характер ремоделирования СО десны у пациентов, нуждающихся в ортопедическом лечении, определяется выраженностью и продолжительностью воспалительного процесса, неблагоприятным влиянием на клеточные популяции продуктов табакокурения и повреждающим воздействием процесса препаровки зубов. Продолжительное табакокурение обусловливает развитие регенераторно-пластической недостаточности эпидермоцитов и атрофические изменения эпителиального пласта СО десны. Такое ремоделирование СО происходит на фоне развивающейся дисиммуноглобулинемии субклассов IgG, перераспределении синтезируемых в организме антител и активизации биосинтеза провоспалительных цитокинов в ротовой полости. У некурящих пациентов после одонтопрепарирования более выражена активация местного иммунитета, отмечено усиление синтеза противовоспалительных цитокинов, что можно рассматривать как компенсаторную реакцию на увеличение антигенной нагрузки. У лиц, злоупотребляющих табакокурением, после стоматологического ортопедического лечения более выражены дисиммуноглобулинемия и перераспределение секреторного IgA в организме. Недостаточность противовоспалительных компонентов (Ил-4) можно рассматривать как субкомпенсированный уровень иммунологической резистентности, что позволяет выделять курящих людей в группу повышенного риска по развитию иммунопатологических состояний.
Рецензенты:
Горчаков В.Н, д.м.н., профессор, зав. лабораторией функциональной морфологии Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения РАМН, г. Новосибирск;
Селятицкая В.Г., д.б.н., профессор, зав. лабораторией эндокринологии Научного центра клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения РАМН, г. Новосибирск.
Работа поступила в редакцию 23.11.2011.