Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,749

FUNCTIONAL STATE PLATELET HEMOSTASIS CALF MILK PLANT-FOOD

Zavalishina S.Y. 1 Medvedev I.N. 1
1 Kursk Institute of social education (branch of the institute RSSU (Russian State Social University)), Kursk
In healthy calves, dairy and vegetable supply Simmental and Black Pied breeds with normal platelets in the bloodstream has been a slight gain significant aggregative function of platelets with separate inductors and combinations thereof. The level of platelets in the blood-diskotsitov phase for milk plant supply decreased somewhat. In this case, the number of disco-echinocytes, spherocytes, sphero-echinocytes and bipolar forms of platelets in the blood increased. Mechanisms of amplification of platelet aggregation activity in calves in dairy-phase power plants are increasing in their blood platelets metabolic rate of endogenous arachidonic acid, increase in adenozintrifosfota, adenosine diphosphate, actin and myosin.
calves
dairy and vegetable phase
early ontogeny
platelets
lipid peroxidation

Важной составляющей благополучного становления гомеостаза растущего организма, несомненно, является адекватное генетической программе и средовым влияниям развитие системы тромбоцитарного гемостаза, которая в значительной степени контролирует жидкостные свойства крови, определяя тем самым микрореологию в растущих тканях и достаточность притока к ним О2 и питательных веществ. Большое значение для организма продуктивных животных, в т.ч. телят, имеет фаза молочно-растительного питания, в ходе которой происходит адаптация к приему растительных кормов, что знаменуется дальнейшим становлением функционирования внутренних органов [2] и неизбежной динамикой функциональной активности тромбоцитарного гемостаза. Именно от его адекватной активности зависит микроциркуляция в тканях телят в этот период жизни и полнота адаптации к изменяющимся условиям кормления. В этой связи имеет большое практическое значение оценка особенностей тромбоцитарной активности у здоровых телят, являющихся физиологически зрелыми и не имеющими отклонений от гомеостаза внутренней среды в целом и системы крови в частности, что может в последующем послужить возрастными нормативами [3].

Цель исследования - оценить функциональные свойства тромбоцитов у здоровых телят в фазу молочно-растительного питания.

Материалы и методы исследования

Обследованы 36 здоровых телят молочно-растительного питания черно-пестрой и симментальской пород, оценка учитываемых показателей у которых проводилась 5 раз: на 31, 45, 60, 75 и 90 сутки. Способность тромбоцитов к агрегации (АТ) оценивали визуально по А.С. Шитиковой [5] с применением индукторов АДФ (0,5∙10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл), адреналина (5,0∙10-6 М), а также сочетания АДФ + адреналин, АДФ + коллаген, коллаген + адреналин, АДФ+тромбин, АДФ + коллаген + адреналин, АДФ + тромбин + адреналин, АДФ + коллаген + тромбин + адреналин в аналогичных концентрациях в плазме, богатой тромбоцитами со стандартизированным количеством кровяных пластинок (200∙109 тромбоцитов).

Косвенное определение активности обмена арахидоновой кислоты (АА) в тромбоцитах и ферментов, его осуществляющих (циклооксигеназы (ЦО), и тромбоксансинтетазы (ТС)) велось с применением трех проб переноса по Ермолаевой Т.А. и соавт. [1] путем регистрации АТ на фотоэлектроколориметре.

Количественное содержание в кровяных пластинках АТФ и АДФ, выраженность их секреторной способности под действием коллагена, содержание в них актина и миозина оценивали по Ермолаевой Т.А. и соавт. [1]. Внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов (ВАТ) регистрировали при помощи фазовоконтрастного микроскопа по Шитиковой А.С. и соавт. [6]. Полученные результаты обработаны критерием (td) Стьюдента.

Результаты исследований и их обсуждение

Оценка активности тромбоцитов у здоровых телят в течение фазы молочно-растительного питания показала ее достоверное пиковое усиление к 45 суткам жизни при сохранении содержания количества тромбоцитов в кровотоке животных в границах нормы.

Так, у телят к 45 суткам жизни время развития АТ под влиянием коллагена сократилось до 22,4 ± 0,07 с., удлиняясь к концу фазы до 28,2 ± 0,05 с. Аналогичная динамика АТ отмечена под влиянием АДФ и ристомицина. Несколько замедленно развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, также удлиняясь к концу фазы молочно-растительного питания. Аналогичная динамика выявлена и на фоне всех испытанных сочетаний индукторов- АТ нарастала к 45 суткам жизни для АДФ + адреналин на 15,3 %, для АДФ+коллаген на 19,4 %, для адреналин + коллаген на 32,4 %, для АДФ + тромбин на 29,1 %, для АДФ + коллаген + адреналин на 25,1 %, для АДФ + тромбин + адреналин на 30,2 %, для АДФ + коллаген + тромбин + адреналин на 31,2 %, в последующем приближаясь к времени развития АТ в начале фазы.

В течение фазы молочно-растительного питания у телят отмечен эпизод пикового нарастания содержания свободно циркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов к первым суткам жизни, которое в последующем постепенно понижалось к концу фазы практически до уровня в ее начале. Аналогичную динамику испытывало у телят данного возраста и количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования.

Видным механизмом реализации установленной динамики агрегационной активности тромбоцитов, регистрированной in vitro и in vivo, у телят в течение фазы молочно-растительного питания является динамика активности метаболизма в них АА. О ней косвенно можно было судить по АТ в простой пробе переноса (на 90 сутки жизни 32,7 ± 0,08 %). Выявленная динамика метаболизма АА в кровяных пластинках здоровых телят молочно-растительного питания была возможна в результате кратковременного повышения активности обоих ферментов ее превращения в тромбоцитах - ЦО и ТС к 45 суткам жизни на 11,3 % и 19,5 % соответственно. При этом, к концу фазы восстановление АТ в коллаген-аспириновой пробе, косвенно оценивающей активность ЦО в тромбоцитах, составляло уже 81,5 ± 0,04 %, а восстановление АТ в коллаген-имидазольной пробе, позволяющей косвенно определить состояние ТС в кровяных пластинках, также понижалось до 42,3 ± 0,05 %, выходя на уровень, свойственный для начала фазы - 79,6 ± 0,03 и 40,5 ± 0,12 % соответственно.

У здоровых телят в начале фазы отмечено невысокое содержание АТФ и АДФ в тромбоцитах, которое к 45 суткам жизни повышалось на 4,8 и 3,9 % до значений 5,89 ± 0,05 и 3,67 ± 0,04 мкмоль/109 тромбоцитов соответственно с последующим ослаблением до уровня исхода. При этом, уровень их секреции из тромбоцитов также пиково возрастал на 45 сутки до 46,5 ± 0,03 и 51,8 ± 0,11 %, понижаясь к 90 суткам жизни до величин, сходных с таковыми, на 30 сутки (36,0 ± 0,05 и 45,0 ± 0,03 мкмоль/109 тромбоцитов соответственно).

Количественное содержание актина и миозина на 31 сутки составляло 32,2 ± 0,16 и 14,6 ± 0,12 % к общему белку в тромбоците, повышаясь к 45 суткам до 37,2 ± 0,05 и 16,7 ± 0,07 % к общему белку в тромбоците, понижаясь к 90 суткам до величин, близких к исходу.

Выявленная динамика активности кровяных пластинок у здоровых телят молочно-растительного питания обеспечивается возрастными изменениями функциональных особенностей их отдельных механизмов, определяя во многом необходимые микрореологические свойства тромбоцитов и, следовательно, микроциркуляцию в тканях растущего животного [3]. С учетом данных обстоятельств оценка активности тромбоцитарного гемостаза и механизмов его реализации у здоровых телят молочно-растительного питания имеет большую актуальность. В результате проведенных исследований выяснено усиление адгезивной способности тромбоцитов у здоровых телят к середине молочно-растительного питания, что во многом определяется увеличением в эти сроки выработки в их сосудах фактора Виллебранда (FW) - кофактора адгезии тромбоцитов с последующим ее ослаблением к концу фазы. Эпизод усиления выработки FW у телят молочно-растительного питания определен на основе пикового ускорения динамики агрегации тромбоцитов с ристомицином к середине фазы, который по способности влиять на тромбоциты сходен с субэндотелиальными структурами сосудов. Вероятно, подъем концентрации FW в крови сочетается с увеличением на поверхности тромбоцитов числа рецепторов к нему, что позволяет формировать «ось адгезии»: коллаген - FW - GPIв, обеспечивая усиление реакции кровяных пластинок на индуктор. Пиковое возрастание АТ со всеми испытанными индукторами и их сочетаниями к середине фазы определялось адаптивным повышением у телят в этом возрасте количества рецепторов к ним на мембранах кровяных пластинок.

Агрегационная активность тромбоцитов у здоровых телят
молочно-растительного питания

Показатели агрегации тромбоцитов

Фаза молочно-растительного питания,

n = 36 M ± m

Средние значения,

n = 36

M ± m

31 сут жизни

45 сут
жизни

60 сут жизни

75 сут жизни

90 сут жизни

АДФ, с

39,0 ± 0,16

32,1 ± 0,05

р < 0,01

33,6 ± 0,04

р < 0,05

35,8 ± 0,08

р < 0,05

38,0 ± 0,06

р < 0,05

35,7 ± 0,08

Коллаген, с

28,7 ± 0,12

22,4 ± 0,07

р < 0,01

24,5 ± 0,09

р < 0,05

26,8 ± 0,11

р < 0,05

28,2 ± 0,05

р < 0,05

26,1 ± 0,09

Тромбин, с

53,0 ± 0,07

46,3 ± 0,03

р < 0,01

48,1 ± 0,10

р < 0,05

49,6 ± 0,05

р < 0,05

51,9 ± 0,12

р < 0,05

49,8 ± 0,07

Ристомицин, с

46,6 ± 0,02

42,1 ± 0,10

р < 0,01

43,4 ± 0,12

р < 0,05

44,3 ± 0,05

р < 0,05

45,8 ± 0,16

р < 0,05

44,4 ± 0,09

Н2О2, с

40,1 ± 0,03

35,0 ± 0,05

р < 0,01

36,8 ± 0,06

р < 0,05

38,0 ± 0,12

р < 0,05

39,5 ± 0,14

р < 0,05

37,9 ± 0,08

Адреналин, с

96,3 ± 0,09

88,3 ± 0,08

р < 0,01

89,8 ± 0,07

р < 0,05

91,3 ± 0,09

р < 0,05

94,0 ± 0,15

р < 0,05

91,9 ± 0,10

АДФ + адреналин, с

35,3 ± 0,11

30,6 ± 0,03

р < 0,01

32,0 ± 0,16

р < 0,05

33,3 ± 0,05

р < 0,05

34,8 ± 0,08

р < 0,05

33,2 ± 0,09

АДФ + коллаген, с

26,4 ± 0,07

22,1 ± 0,06

р < 0,01

23,4 ± 0,07

р < 0,05

24,6 ± 0,09

р < 0,05

25,8 ± 0,10

р < 0,05

24,5 ± 0,08

Адреналин + коллаген, с

29,8 ± 0,06

22,5 ± 0,08

р < 0,01

23,6 ± 0,13

р < 0,05

25,3 ± 0,11

р < 0,05

27,5 ± 0,07

р < 0,05

25,7 ± 0,09

АДФ + тромбин, с

26,2 ± 0,05

20,3 ± 0,03

р < 0,01

22,1 ± 0,11

р < 0,05

23,6 ± 0,15

р < 0,05

25,2 ± 0,06

р < 0,05

23,5 ± 0,08

АДФ + коллаген + адреналин, с

21,4 ± 0,08

17,1 ± 0,07

р < 0,01

18,4 ± 0,04

р < 0,05

19,5 ± 0,03

р < 0,05

20,6 ± 0,09

р < 0,05

19,4 ± 0,06

АДФ + тромбин + адреналин, с

22,0 ± 0,06

16,9 ± 0,02

р < 0,01

17,8 ± 0,08

р < 0,05

19,2 ± 0,05

р < 0,05

20,7 ± 0,07

р < 0,05

19,3 ± 0,06

АДФ + коллаген + тромбин + адреналин, с

18,5 ± 0,03

14,1 ± 0,04

р < 0,01

15,3 ± 0,06

р < 0,05

16,5 ± 0,01

р < 0,05

17,7 ± 0,04

р < 0,05

16,4 ± 0,04

Число тромбоцитов в агрегатах, °

5,5 ± 0,04

6,2 ± 0,07

р < 0,01

5,9 ± 0,03

р < 0,01

5,7 ± 0,05

р < 0,05

5,6 ± 0,06

р < 0,05

5,8 ± 0,05

Число малых агрегатов по 2-3 тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов

4,2 ± 0,03

6,5 ± 0,04

р < 0,01

6,0 ± 0,08

р < 0,01

5,4 ± 0,04

р < 0,01

4,9 ± 0,02

р < 0,01

5,4 ± 0,04

Число средних и больших агрегатов, 4 и более тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов

0,15 ± 0,03

0,24 ± 0,02

р < 0,01

0,19 ± 0,04

р < 0,01

0,18 ± 0,03

р < 0,05

0,16 ± 0,02

р < 0,05

0,18 ± 0,03

Условные обозначения: р - достоверность возрастной динамики показателей.

Оценка АТ с несколькими индукторами агрегации позволила считать, что у этих животных отмечается их взаимопотенциирующий эффект, в физиологических условиях усиливающий АТ. Применение сочетаний индукторов агрегации тромбоцитов способно в определенной мере повторять внутрисосудистые условия у растущих телят, давая возможность оценить АТ в условиях, свойственных для реального кровотока.

Количество свободно циркулирующих агрегатов различного размера в крови телят в начале фазы было невелико, также пиково усиливаясь в ее середине, что сочеталось с аналогичной динамикой числа тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты. В основе зарегистрированного усиления агрегативной способности кровяных пластинок у телят к середине фазы молочно-растительного питания, кроме нарастания числа рецепторов на мембране, лежит пиковое нарастание активности внутритромбоцитарных механизмов реализации их гемостатических функций - кратковременное усиление с последующим ослаблением тромбоксанообразования, актино- и миозинообразования, содержания в них и выраженности секреции АТФ и АДФ.

Можно думать, что установленные закономерности тромбоцитарной активности у здоровых телят в фазу молочно-растительного питания обусловливаются реакцией организма на поступление растительных кормов, являясь необходимым элементом его адаптации.

Рецензенты:

Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор кафедры нормальной физиологии Курского государственного медицинского университета, г. Курск;

Фурман Ю.В., д.б.н., профессор, декан факультета социальной работы, педагогики и психологии Курского института социального образования (филиал) РГСУ, г. Курск.

Работа поступила в редакцию 24.10.2011.