Важной составляющей благополучного становления гомеостаза растущего организма, несомненно, является адекватное генетической программе и средовым влияниям развитие системы тромбоцитарного гемостаза, которая в значительной степени контролирует жидкостные свойства крови, определяя тем самым микрореологию в растущих тканях и достаточность притока к ним О2 и питательных веществ. Большое значение для организма продуктивных животных, в т.ч. телят, имеет фаза молочно-растительного питания, в ходе которой происходит адаптация к приему растительных кормов, что знаменуется дальнейшим становлением функционирования внутренних органов [2] и неизбежной динамикой функциональной активности тромбоцитарного гемостаза. Именно от его адекватной активности зависит микроциркуляция в тканях телят в этот период жизни и полнота адаптации к изменяющимся условиям кормления. В этой связи имеет большое практическое значение оценка особенностей тромбоцитарной активности у здоровых телят, являющихся физиологически зрелыми и не имеющими отклонений от гомеостаза внутренней среды в целом и системы крови в частности, что может в последующем послужить возрастными нормативами [3].
Цель исследования - оценить функциональные свойства тромбоцитов у здоровых телят в фазу молочно-растительного питания.
Материалы и методы исследования
Обследованы 36 здоровых телят молочно-растительного питания черно-пестрой и симментальской пород, оценка учитываемых показателей у которых проводилась 5 раз: на 31, 45, 60, 75 и 90 сутки. Способность тромбоцитов к агрегации (АТ) оценивали визуально по А.С. Шитиковой [5] с применением индукторов АДФ (0,5∙10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл), адреналина (5,0∙10-6 М), а также сочетания АДФ + адреналин, АДФ + коллаген, коллаген + адреналин, АДФ+тромбин, АДФ + коллаген + адреналин, АДФ + тромбин + адреналин, АДФ + коллаген + тромбин + адреналин в аналогичных концентрациях в плазме, богатой тромбоцитами со стандартизированным количеством кровяных пластинок (200∙109 тромбоцитов).
Косвенное определение активности обмена арахидоновой кислоты (АА) в тромбоцитах и ферментов, его осуществляющих (циклооксигеназы (ЦО), и тромбоксансинтетазы (ТС)) велось с применением трех проб переноса по Ермолаевой Т.А. и соавт. [1] путем регистрации АТ на фотоэлектроколориметре.
Количественное содержание в кровяных пластинках АТФ и АДФ, выраженность их секреторной способности под действием коллагена, содержание в них актина и миозина оценивали по Ермолаевой Т.А. и соавт. [1]. Внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов (ВАТ) регистрировали при помощи фазовоконтрастного микроскопа по Шитиковой А.С. и соавт. [6]. Полученные результаты обработаны критерием (td) Стьюдента.
Результаты исследований и их обсуждение
Оценка активности тромбоцитов у здоровых телят в течение фазы молочно-растительного питания показала ее достоверное пиковое усиление к 45 суткам жизни при сохранении содержания количества тромбоцитов в кровотоке животных в границах нормы.
Так, у телят к 45 суткам жизни время развития АТ под влиянием коллагена сократилось до 22,4 ± 0,07 с., удлиняясь к концу фазы до 28,2 ± 0,05 с. Аналогичная динамика АТ отмечена под влиянием АДФ и ристомицина. Несколько замедленно развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, также удлиняясь к концу фазы молочно-растительного питания. Аналогичная динамика выявлена и на фоне всех испытанных сочетаний индукторов- АТ нарастала к 45 суткам жизни для АДФ + адреналин на 15,3 %, для АДФ+коллаген на 19,4 %, для адреналин + коллаген на 32,4 %, для АДФ + тромбин на 29,1 %, для АДФ + коллаген + адреналин на 25,1 %, для АДФ + тромбин + адреналин на 30,2 %, для АДФ + коллаген + тромбин + адреналин на 31,2 %, в последующем приближаясь к времени развития АТ в начале фазы.
В течение фазы молочно-растительного питания у телят отмечен эпизод пикового нарастания содержания свободно циркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов к первым суткам жизни, которое в последующем постепенно понижалось к концу фазы практически до уровня в ее начале. Аналогичную динамику испытывало у телят данного возраста и количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования.
Видным механизмом реализации установленной динамики агрегационной активности тромбоцитов, регистрированной in vitro и in vivo, у телят в течение фазы молочно-растительного питания является динамика активности метаболизма в них АА. О ней косвенно можно было судить по АТ в простой пробе переноса (на 90 сутки жизни 32,7 ± 0,08 %). Выявленная динамика метаболизма АА в кровяных пластинках здоровых телят молочно-растительного питания была возможна в результате кратковременного повышения активности обоих ферментов ее превращения в тромбоцитах - ЦО и ТС к 45 суткам жизни на 11,3 % и 19,5 % соответственно. При этом, к концу фазы восстановление АТ в коллаген-аспириновой пробе, косвенно оценивающей активность ЦО в тромбоцитах, составляло уже 81,5 ± 0,04 %, а восстановление АТ в коллаген-имидазольной пробе, позволяющей косвенно определить состояние ТС в кровяных пластинках, также понижалось до 42,3 ± 0,05 %, выходя на уровень, свойственный для начала фазы - 79,6 ± 0,03 и 40,5 ± 0,12 % соответственно.
У здоровых телят в начале фазы отмечено невысокое содержание АТФ и АДФ в тромбоцитах, которое к 45 суткам жизни повышалось на 4,8 и 3,9 % до значений 5,89 ± 0,05 и 3,67 ± 0,04 мкмоль/109 тромбоцитов соответственно с последующим ослаблением до уровня исхода. При этом, уровень их секреции из тромбоцитов также пиково возрастал на 45 сутки до 46,5 ± 0,03 и 51,8 ± 0,11 %, понижаясь к 90 суткам жизни до величин, сходных с таковыми, на 30 сутки (36,0 ± 0,05 и 45,0 ± 0,03 мкмоль/109 тромбоцитов соответственно).
Количественное содержание актина и миозина на 31 сутки составляло 32,2 ± 0,16 и 14,6 ± 0,12 % к общему белку в тромбоците, повышаясь к 45 суткам до 37,2 ± 0,05 и 16,7 ± 0,07 % к общему белку в тромбоците, понижаясь к 90 суткам до величин, близких к исходу.
Выявленная динамика активности кровяных пластинок у здоровых телят молочно-растительного питания обеспечивается возрастными изменениями функциональных особенностей их отдельных механизмов, определяя во многом необходимые микрореологические свойства тромбоцитов и, следовательно, микроциркуляцию в тканях растущего животного [3]. С учетом данных обстоятельств оценка активности тромбоцитарного гемостаза и механизмов его реализации у здоровых телят молочно-растительного питания имеет большую актуальность. В результате проведенных исследований выяснено усиление адгезивной способности тромбоцитов у здоровых телят к середине молочно-растительного питания, что во многом определяется увеличением в эти сроки выработки в их сосудах фактора Виллебранда (FW) - кофактора адгезии тромбоцитов с последующим ее ослаблением к концу фазы. Эпизод усиления выработки FW у телят молочно-растительного питания определен на основе пикового ускорения динамики агрегации тромбоцитов с ристомицином к середине фазы, который по способности влиять на тромбоциты сходен с субэндотелиальными структурами сосудов. Вероятно, подъем концентрации FW в крови сочетается с увеличением на поверхности тромбоцитов числа рецепторов к нему, что позволяет формировать «ось адгезии»: коллаген - FW - GPIв, обеспечивая усиление реакции кровяных пластинок на индуктор. Пиковое возрастание АТ со всеми испытанными индукторами и их сочетаниями к середине фазы определялось адаптивным повышением у телят в этом возрасте количества рецепторов к ним на мембранах кровяных пластинок.
Агрегационная активность тромбоцитов у здоровых телят
молочно-растительного питания
|
Показатели агрегации тромбоцитов |
Фаза молочно-растительного питания, n = 36 M ± m |
Средние значения, n = 36 M ± m |
||||
|
31 сут жизни |
45 сут |
60 сут жизни |
75 сут жизни |
90 сут жизни |
||
|
АДФ, с |
39,0 ± 0,16 |
32,1 ± 0,05 р < 0,01 |
33,6 ± 0,04 р < 0,05 |
35,8 ± 0,08 р < 0,05 |
38,0 ± 0,06 р < 0,05 |
35,7 ± 0,08 |
|
Коллаген, с |
28,7 ± 0,12 |
22,4 ± 0,07 р < 0,01 |
24,5 ± 0,09 р < 0,05 |
26,8 ± 0,11 р < 0,05 |
28,2 ± 0,05 р < 0,05 |
26,1 ± 0,09 |
|
Тромбин, с |
53,0 ± 0,07 |
46,3 ± 0,03 р < 0,01 |
48,1 ± 0,10 р < 0,05 |
49,6 ± 0,05 р < 0,05 |
51,9 ± 0,12 р < 0,05 |
49,8 ± 0,07 |
|
Ристомицин, с |
46,6 ± 0,02 |
42,1 ± 0,10 р < 0,01 |
43,4 ± 0,12 р < 0,05 |
44,3 ± 0,05 р < 0,05 |
45,8 ± 0,16 р < 0,05 |
44,4 ± 0,09 |
|
Н2О2, с |
40,1 ± 0,03 |
35,0 ± 0,05 р < 0,01 |
36,8 ± 0,06 р < 0,05 |
38,0 ± 0,12 р < 0,05 |
39,5 ± 0,14 р < 0,05 |
37,9 ± 0,08 |
|
Адреналин, с |
96,3 ± 0,09 |
88,3 ± 0,08 р < 0,01 |
89,8 ± 0,07 р < 0,05 |
91,3 ± 0,09 р < 0,05 |
94,0 ± 0,15 р < 0,05 |
91,9 ± 0,10 |
|
АДФ + адреналин, с |
35,3 ± 0,11 |
30,6 ± 0,03 р < 0,01 |
32,0 ± 0,16 р < 0,05 |
33,3 ± 0,05 р < 0,05 |
34,8 ± 0,08 р < 0,05 |
33,2 ± 0,09 |
|
АДФ + коллаген, с |
26,4 ± 0,07 |
22,1 ± 0,06 р < 0,01 |
23,4 ± 0,07 р < 0,05 |
24,6 ± 0,09 р < 0,05 |
25,8 ± 0,10 р < 0,05 |
24,5 ± 0,08 |
|
Адреналин + коллаген, с |
29,8 ± 0,06 |
22,5 ± 0,08 р < 0,01 |
23,6 ± 0,13 р < 0,05 |
25,3 ± 0,11 р < 0,05 |
27,5 ± 0,07 р < 0,05 |
25,7 ± 0,09 |
|
АДФ + тромбин, с |
26,2 ± 0,05 |
20,3 ± 0,03 р < 0,01 |
22,1 ± 0,11 р < 0,05 |
23,6 ± 0,15 р < 0,05 |
25,2 ± 0,06 р < 0,05 |
23,5 ± 0,08 |
|
АДФ + коллаген + адреналин, с |
21,4 ± 0,08 |
17,1 ± 0,07 р < 0,01 |
18,4 ± 0,04 р < 0,05 |
19,5 ± 0,03 р < 0,05 |
20,6 ± 0,09 р < 0,05 |
19,4 ± 0,06 |
|
АДФ + тромбин + адреналин, с |
22,0 ± 0,06 |
16,9 ± 0,02 р < 0,01 |
17,8 ± 0,08 р < 0,05 |
19,2 ± 0,05 р < 0,05 |
20,7 ± 0,07 р < 0,05 |
19,3 ± 0,06 |
|
АДФ + коллаген + тромбин + адреналин, с |
18,5 ± 0,03 |
14,1 ± 0,04 р < 0,01 |
15,3 ± 0,06 р < 0,05 |
16,5 ± 0,01 р < 0,05 |
17,7 ± 0,04 р < 0,05 |
16,4 ± 0,04 |
|
Число тромбоцитов в агрегатах, ° |
5,5 ± 0,04 |
6,2 ± 0,07 р < 0,01 |
5,9 ± 0,03 р < 0,01 |
5,7 ± 0,05 р < 0,05 |
5,6 ± 0,06 р < 0,05 |
5,8 ± 0,05 |
|
Число малых агрегатов по 2-3 тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов |
4,2 ± 0,03 |
6,5 ± 0,04 р < 0,01 |
6,0 ± 0,08 р < 0,01 |
5,4 ± 0,04 р < 0,01 |
4,9 ± 0,02 р < 0,01 |
5,4 ± 0,04 |
|
Число средних и больших агрегатов, 4 и более тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов |
0,15 ± 0,03 |
0,24 ± 0,02 р < 0,01 |
0,19 ± 0,04 р < 0,01 |
0,18 ± 0,03 р < 0,05 |
0,16 ± 0,02 р < 0,05 |
0,18 ± 0,03 |
Условные обозначения: р - достоверность возрастной динамики показателей.
Оценка АТ с несколькими индукторами агрегации позволила считать, что у этих животных отмечается их взаимопотенциирующий эффект, в физиологических условиях усиливающий АТ. Применение сочетаний индукторов агрегации тромбоцитов способно в определенной мере повторять внутрисосудистые условия у растущих телят, давая возможность оценить АТ в условиях, свойственных для реального кровотока.
Количество свободно циркулирующих агрегатов различного размера в крови телят в начале фазы было невелико, также пиково усиливаясь в ее середине, что сочеталось с аналогичной динамикой числа тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты. В основе зарегистрированного усиления агрегативной способности кровяных пластинок у телят к середине фазы молочно-растительного питания, кроме нарастания числа рецепторов на мембране, лежит пиковое нарастание активности внутритромбоцитарных механизмов реализации их гемостатических функций - кратковременное усиление с последующим ослаблением тромбоксанообразования, актино- и миозинообразования, содержания в них и выраженности секреции АТФ и АДФ.
Можно думать, что установленные закономерности тромбоцитарной активности у здоровых телят в фазу молочно-растительного питания обусловливаются реакцией организма на поступление растительных кормов, являясь необходимым элементом его адаптации.
Рецензенты:
Смахтин М.Ю., д.б.н., профессор кафедры нормальной физиологии Курского государственного медицинского университета, г. Курск;
Фурман Ю.В., д.б.н., профессор, декан факультета социальной работы, педагогики и психологии Курского института социального образования (филиал) РГСУ, г. Курск.
Работа поступила в редакцию 24.10.2011.