Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,441

MONOCYTES/MACROPHAGES AROUSAL IN CASE OF INFLAMMATORY DISEASE OF UTERINE APPENDAGES IN WOMEN

Khramova I.A. 1
1 Vladivostok State Medical University, Vladivostok
Проведены исследования уровня секреции интерлейкина-8 моноцитами крови, состояния стабильности лизосомных мембран и секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у 14 здоровых женщин и 38 больных острым и хроническим сальпингооофоритом в возрасте 20–40 лет. Выявлено, что при воспалительном процессе придатков матки у женщин наблюдается увеличение секреции интерлейкина-8 моноцитами крови, лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов.. Повышение синтеза и секреции лизоцима моноцитами/макрофагами при остром воспалении сочетается с высоким уровнем секреции интерлейкина-8 моноцитами крови. При хроническом воспалительном процессе в придатках матки имеет место более выраженное повышение секреции интерлейкина-8 моноцитами крови и секреции лизоцима моноцитами/макрофагами при отставании синтеза этого фермента.
The anionic neutrophil-activating peptide secretion by blood monocytes, the condition of stability of lysosome membranes and secretory synthetic arousal of blood monocytes and peritoneal macrophages of 140 healthy women and 38 women with terebrant and inveterate adnexitis, at the age of 20–40 years were investigated. It was educed that in case of adnexitis process in women the enhancement of the anionic neutrophil-activating peptide secretion by blood monocytes, labialization of monocyte’s lysosome membranes and peritoneal macrophages. Increase in lysozyme secretion and fusion in case of terebrant adnexitis is conjoined with high level of anionic neutrophil-activating peptide secretion by blood monocytes. In case of inveterate adnexitis a large level of anionic neutrophil-activating peptide secretion by blood monocytes and lysozyme secretion by blood monocytes/macrophages along with decrease of fusion of the stated zyme takes place.
macrophages
anionic neutrophil-activating peptide
lysozyme
inflammation

Воспаления придатков матки продолжают занимать одно из ведущих мест в структуре гинекологических заболеваний. Их значимость обусловлена прежде всего тем, что эти заболевания затрагивают органы и ткани, относящиеся к репродуктивной системе и оказывают непосредственное влияние на репродуктивную функцию женщины. В современных условиях воспалительные процессы внутренних половых органов характеризуются рядом особенностей,проявляющихся изменением клинической картины в сторону стёртых форм и атипического течения, нарушением эндокринной регуляции и большим числом серьзных осложнений в виде менструальной дисфункции, бесплодия, внематочной беременности и др. Предметом многочисленных исследований при остром и хроническом сальпингооофорите стало изменение показателей иммунной
системы [1, 2, 7].

Характер и развитие воспалительного процесса значительным образом определяют клетки макрофагальной системы, прежде всего моноциты крови и тканевые макрофаги. Вариант течения воспалительного процесса зависит от своевременности и полноценности их включения в патологический процесс и переключении нейтрофильной реакции на реакцию моноцитарно-макрофагальных клеток с выделением их конститутивного фермента - лизоцима [2, 4]. При нарушении синтеза и секреции лизоцима непереваренные продукты фагоцитоза могут длительное время оставаться во вторичных лизосомах, а повышение содержания лизосом в моноцитах, связаное с их активацией, влечет за собой участие этих клеток в деструктивных процессах в тканях. Недостаточность лизосомного аппарата макрофагальных клеток играет роль и в патогенезе спаечного процесса в половых органах [4].

Активация клеток системы макрофагов - важный процесс их включения в биологические реакции организма - воспаление, иммунный ответ, процессы регенерации [1, 2, 4]. При активации макрофагов возникает усиление синтетических, секреторных процессов в клетках, в частности, происходит повышение выхода лизосомных ферментов из клеток, усиление выработки интерликина-8, уровень которого в крови заметно повышается [5, 7, 9]. Секреция лизосомных ферментов сопряжена с состоянием стабильности лизосомных мембран клеток: при лабилизации лизосомных мембран происходит повышение выхода ферментов, при стабилизации - снижение [6].

Цель исследования - определить сопряженность состояния лизосомных мембран, секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с процессом активации этих клеток по уровню провоспалительного цитокина интерлейкина-8 у женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом.

Материал и методы исследования

Проведено обследование 38 женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом в возрасте от 20 до 40 лет (средний возраст 30 ± 3,2 года). Больные находились на лечении в гинекологическом отделении городской клинической больницы № 1 г. Владивостока. Контрольную группу составили 14 условно здоровых женщин, обратившихся к врачу гинекологу за консультацией. На все исследования было получено информированное согласие женщин.

Диагноз воспалительного процесса был выставлен на основании клинико-лабораторных и инструментальных методов обследования, согласно принятым стандартам.

Выделение моноцитов крови проводилось на градиенте плотности фиколл-верографина центрифугированием крови в течение 30 минут при 400 G с последующим отсасыванием микропипеткой кольца градиента. Клетки прикреплялись к поверхности стекла в течение 60 минут при температуре 37 ºС.

Перитонеальные макрофаги получали из суспензии, взятой методом пункций заднего влагалищного свода, так же выделяли прикреплением клеток к поверхности стекла.

Концентрацию клеток считали в камере Горяева и доводили стерильным физиологическим раствором до 6·106 кл/мл. Определение стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с расчетом показателя стабильности (ПСЛМ) проводили методом культивирования выделенных клеток в среде 199 с добавлением 0,5 % стерильного L-глутамина и 2,5 % смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56 ºС в течение 12-15 часов при 37 ºС. Микрометодом проводили определение секретированного лизоцима (Lсекр), а после 4-6-кратного замораживания-оттаивания культивируемых клеток - общего лизоцима (Lобщ - секретированный плюс внутриклеточный). На основании полученных результатов секретированного и общего лизоцима высчитывали ПСЛМ по формуле: ПСЛМ = Lсекр/Lобщ·100 %. Повышение ПСЛМ выше оптимального значения (53-58 %) расценивалось как лабилизация лизосомных мембран, снижение этого показателя - как стабилизация мембран. По результатам оценки разницы (Lобщ) после и до культивирования, определяли количество синтезированного лизоцима (Lсинт) [6].

Проведенные ранее нами исследования выявили выраженные колебания ПСЛМ в зависимости от фазы менструального цикла. Наибольший подъем показателя стабильности лизосомных мембран наблюдался в день предполагаемой овуляции с последующим снижением до оптимального значения (53-58 %) на 19-21 день цикла. Поэтому обследование женщин проводилось во вторую фазу менструального цикла.

Определение интерлейкина-8 в супернатанте культивированных клеток (оценивалась секреция интерлейкина-8 моноцитами крови) проводилось методом сендвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы «R&D Diagnostics Inc.» (США).

Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета программ «Statistica 6» с применением стандартных методов вариационной статистики и критерия Манна-Уитни для оценки статистически значимых различий. Различие считалось достоверным при р < 0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

В результате проведенного исследования выявлено, что у здоровых женщин уровень секреции интерлейкина-8 моноцитами крови составляет 90-140 пг/мл/106кл. При остром воспалительном процессе в придатках матки происходит возрастание уровня секреции интерлейкина-8 до 300-400 пг/мл/106кл, а при хроническом воспалении - до 1100-1350 пг/мл/106кл, что соответствует различной степени активации клеток-продуцентов интерлейкина.

Состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторная и синтетическая активность при разном уровне секреции интерлейкина-8 моноцитами крови также имеют различие у здоровых женщин и у женщин с острым и хроническим сальпингооофогитом.

В табл. 1 представлены результаты исследования показателя стабильности лизосомных мембран у женщин с нормальным уровнем интерлейкина-8 (здоровые женщины), повышенным уровнем (больные острым сальпингооофоритом) и высоким уровнем (больные хроническим сальпингооофоритом).

Как видно из полученных данных, при остром сальпингооофорите наряду с увеличением секреции интерлейкина-8 происходит повышение ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по сравнению с ПСЛМ здоровых женщин с нормальным уровнем секреции интерлейкина-8 (p < 0,05). Еще больше по сравнению со здоровыми женщинами возрастает ПСЛМ моноцитов/макрофагов у женщин с хроническим сальпингооофоритом, имеющим высокий уровень секреции интерлейкина-8 (p < 0,01).

Параллельно с лабилизцией лизосомных мембран моноцитов крови перитонеальных макрофагов происходит увеличение секреции клеточного лизоцима (табл. 2). При этом наиболее выраженная секреция лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами наблюдается у женщин с хроническим сальпингооофоритом, у которых наблюдается более высокий уровень секреции моноцитами крови интерлейкина-8.

Таблица 1

Показатель стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых и больных женщин

Группы сравнения

Количество женщин, n

ПСЛМ в % моноцитов (M ± m)

ПСЛМ в %
макрофагов (M ± m)

Здоровые женщины p1

14

53,8 ± 1,3

59,6 ± 1,4

Женщины с острым сальпингооофоритом p2

18

55,7 ± 0,3

p1 - p2*

62,3 ± 0,6

p1 - p2*

Женщины с хроническим сальпингооофоритом p3

20

62,6 ± 0,9

p1 - p3**

p2 - p3*

66,5 ± 1,6

p1 - p3***

p2 - p3*

Примечание. Достоверность различий ПСЛМ между сравниваемыми группами: * - p < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001.

Таблица 2

Уровень секреции лизоцима (Lсекр) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами
у здоровых и больных женщин

Группы сравнения

Количество женщин, n

Lсекр мкг/мл,
моноцитов (M ± m)

Lсекр мкг/мл, макрофагов

(M ± m)

Здоровые женщины p1

14

0,76 ± 0,030

0,90 ± 0,070

Женщины с острым сальпингооофоритом p2

18

0,95 ± 0,050

p1 - p2**

1,2 ± 0,050

p1 - p2**

Женщины с хроническим сальпингооофоритом p3

20

1,3 ± 0,1

p1 - p3***_

p2 - p3**_

1,7 ± 0,2

p1 - p3***

p2 - p3*

Примечание. Достоверность различия Lсекр между сравниваемыми группами:
* - p < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001.

Наряду с повышением интерлейкина-8 у женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом повышается и синтез лизоцима моноцитами/макрофагами (табл. 3). Но имеются заметные различия между синтезом лизоцима и уровнем интерлейкина-8 у больных острым и хроническим воспалительным процессом. Если при хроническом сальпингооофорите отмечается выраженное повышение секреции интерлейкина-8 моноцитами крови по сравнению с уровнем секреции интерлейкина-8 при остром воспалении (p < 0,05), то синтез лизоцима моноцитами/макрофагами при хроническом воспалительном процессе возрастает незначительно и практически находится на одном уровне с синтезом лизоцима клетками женщин с острым сальпингооофоритом (p > 0,05).

Таблица 3

Уровень синтеза лизоцима (Lсинт) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами
у здоровых и больных женщин

Группы сравнения

Количество женщин, n

Lсинт мкг/мл,
моноцитов (M ± m)

Lсинт мкг/мл,
макрофагов (M ± m)

Здоровые женщины p1

14

0,5 ± 0,030

0,70 ± 0012

Женщины с острым сальпингооофоритом p2

18

0,8 ± 0,090

p1 - p2**

1,0 ± 0,1

p1 - p2**

Женщины с хроническим сальпингооофоритом p3

20

0,3 ± 0,060

p1 - p3**

0,4 ± 0,07

p1 - p3**

Примечание. Достоверность различия Lсинт между сравниваемыми группами: * - p < 0,01; ** - p < 0,001.

Оценивая полученный результат, с точки зрения изменения функционального состояния моноцитов/макрофагов, у женщин при остром и хроническом сальпингооофорите выявлены как общие закономерности, так и существенные различия. Как при остром, так и при хроническом процессе определена активация синтеза и секреции исследованных медиаторов воспаления, сопряженная с лабилизацией лизосомных мембран. При хроническом сальпингооофорите по сравнению с острым процессом отмечен более высокий уровень секреции интерлейкина-8 моноцитами крови. Гиперпродукция интерлейкина-8 моноцитами крови происходит одновременно с процессом выраженной лабилизации лизосомных мембран и отсутствием дополнительного повышения секреции лизосомного фермента лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами. По-видимому, данные внутриклеточные процессы связаны с разной активацией моноцитов/макрофагов при остром и хроническом воспалении.

Таким образом, при остром сальпингооофорите, наряду с повышением уровня секреции интерлейкина-8 моноцитами крови, происходят лабилизация лизосомных мембран, повышение секреции и синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами.

При хроническом сальпингооофорите имеет место гиперсекреция интерлейкина-8 моноцитами крови, выраженная лабилизация лизосомных мембран, высокий уровень секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами при относительно невысоком синтезе этого фермента. Неоптимальное повышение активности моноцитов/макрофагов с нарушением их секреторно-синтетических процессов при воспалении женских половых органов может привести к хронизации процесса, частым обострениям воспаления, отсутствию эффекта от проводимой антибактериальной терапии. Правильно подобранная иммунокоррегирующая терапия под контролем уровня секреции интерлейкина-8 моноцитами крови, секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при остром и хроническом сальпингооофорите может благоприятно сказаться на исходе заболевания с полным восстановлением репродуктивного здоровья женщины.

Рецензенты:

Лучанинов Э.В., д.м.н., главный врач ГБУЗ «Краевой диагностический центр», г. Владивосток;

Плеханова Н.Г., д.б.н., зав. лабораторией патоморфологии и электронной микроскопии НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, г. Владивосток.

Работа поступила в редакцию 07.07.2011.