В настоящее время более 100 млн женщин фертильного возраста пользуются различными контрацептивными средствами. Эффективность применения контрацептивов колеблется от 91 до 99 % [2]. При использовании этих средств возможно развитие различных осложнений в виде нарушений менструального цикла, воспалительных заболеваний половых органов, бесплодия, экспульсии внутриматочных средств и других. Они могут быть связаны как с дисфункцией гипоталямо-гипофизарно-яичниковой системы, так и с изменением показателей иммунной системы [1, 3]. Правильно подобранные контрацептивные средства позволят не только избежать нежелательной беременности, осложнений вследствие их применения, но и сохранить репродуктивное здоровье женщины [6].
Мононуклеарные фагоциты, к которым относятся моноциты крови и тканевые макрофаги, присутствуют в различных органах и тканях, в том числе и половой системе женского организма. Они значительным образом определяют развитие и характер воспаления, вовлекаются в регенеративные процессы, в иммуногенез путем процессинга антигенов и презентациии ангигенной детерминанты лимфоцитам [8, 9].
Участие мононуклеарных фагоцитов в том или ином биологическом процессе сопровождается изменением их функциональной активности. В частности, при активации моноцитов/макрофагов в них происходит усиление секреторно-синтетических процессов, повышение выхода лизосомных ферментов из клеток. При этом секреция лизосомных ферментов сопряжена с состоянием стабильности лизосомных мембран: при лабилизации лизосомных мембран происходит повышение выхода ферментов из клеток, при стабилизации - снижение [10].
Цель работы: изучить влияние различных контрацептивов на состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов и секреторно-синтетическую активность этих клеток для предупреждения возможных осложнений.
Материал и методы исследования
Исследованы моноциты крови и перитонеальные макрофаги у 49 клинически здоровых женщин 25-30 лет (средний возраст 25 ± 3,2 года), применявших различные средства контрацепции в течение 1 года. Первую группу составили женщины, предохраняющиеся от беременности с использованием презервативов (17 человек), вторую - ВМК (14 человек), третью - низкодозированных КОК (содержание этинилэстрадиола 30 мкг). Женщины, использующие презервативы, условно были приняты за контрольную группу. Обследуемые пациентки наблюдались в поликлинике ГУЗ «Приморский краевой диагностический центр» г. Владивостока. На все исследования было получено информированное согласие.
Выделение моноцитов крови проводилось на градиенте плотности фиколл-верографина центрифугированием крови в течение 30 минут при 400 G с последующим отсасыванием микропипеткой кольца градиента [9]. Клетки прикреплялись к поверхности стекла в течение 60 мин при температуре 37 °С.
Перитонеальные макрофаги получали из суспензии, взятой методом пункций заднего влагалищного свода, так же выделяли прикреплением клеток к поверхности стекла.
Концентрацию клеток считали в камере Горяева и доводили стерильным физиологическим раствором до 6∙106 кл/мл. Определение стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с расчетом показателя стабильности (ПСЛМ) проводили методом культивирования выделенных клеток в среде 199 с добавлением 0,5 % стерильного L-глутамина и 2,5 % смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56 °С в течение 12-15 часов при 37 °С. Микрометодом [4] проводили определение секретированного лизоцима (Lсекр), а после 4-6-кратного замораживания-оттаивания культивируемых клеток - общего лизоцима (Lобщ = L секретированный плюс L внутриклеточный). На основании полученных результатов секретированного и общего лизоцима высчитывали ПСЛМ по формуле: ПСЛМ = Lсекр/Lобщ∙100 %. Повышение ПСЛМ выше оптимального значения (53-58 %) расценивалось как лабилизация лизосомных мембран, снижение этого показателя - как стабилизация мембран. По результатам оценки разницы Lобщ после и до культивирования определяли количество синтезированного лизоцима (Lсинт) [10].
Проведенные ранее нами исследования выявили выраженные колебания ПСЛМ в зависимости от фазы менструального цикла. Наблюдался подъем показателя стабильности лизосомных мембран в день предполагаемой овуляции с последующим снижением до оптимального значения (53-58 %) на 19-21 день менструального цикла. Поэтому женщины обследовались во вторую фазу менструального цикла.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета программ «Statistica 6» с применением стандартных методов вариационной статистики и критерия Манна-Уитни для оценки статистически значимых различий. Различие считалось достоверным при р < 0,05 [5].
Результаты исследований и их обсуждение
В результате проведенных исследований выявлено, что состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторно-синтетическая активность имеют различия у женщин, использующих разные средства контрацепции.
Таблица 1
Показатель стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин, применяющих различные виды контрацептивов
|
Группы сравнения |
n |
ПСЛМ в % моноцитов (M ± m) |
ПСЛМ в % макрофагов (M ± m) |
|
Женщины, применяющие презервативы - p¹ |
17 |
53,8 ± 1,4 |
59,6 ± 1,3 |
|
Женщины, применяющие ВМК -p² |
14 |
54,2 ± 1,6 p1-p2* |
60,3 ± 1,7 p1-p2* |
|
Женщины, применяющие КОК - p³ |
18 |
47,8 ± 1,5 p1-p3** p2-p3** |
53,5 ± 1,4 p1-p3** p2-p3** |
Примечание (достоверность различий между сравниваемыми группами)
* - p > 0,05;
** - p < 0,01.
Как видно из полученных данных, показатель стабильности лизосомных мембран моноцитов/макрофагов у женщин, использующих в качестве контрацептивного средства ВМК, несколько увеличивается по сравнению с женщинами, применявшими презервативы (р > 0,05), что говорит о наметившейся тенденции к лабилизации лизосомных мембран этих клеток. Напротив, у женщин, регулярно применяющих КОК, наступает выраженная стабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов (p < 0,01 по сравнению с результатами двух других групп женщин).
Таблица 2
Уровень секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у женщин, применяющих различные виды контрацептивов
|
Группы |
n |
Lсекр, мкг/мл моноцитов (M ± m) |
Lсекр, мкг/мл макрофагов (M ± m) |
|
Женщины, применяющие презервативы - p¹ |
17 |
0,7 ± 0,06 |
0,86 ± 0,07 |
|
Женщины, применяющие ВМК - p² |
14 |
0,65 ± 0,03 p1-p2* |
0,9 ± 0,06 p1-p2* |
|
Женщины, применяющие |
18 |
0,5 ± 0,04 p1-p3** p2-p3** |
0,6 ± 0,06 p1-p3** p2-p3** |
Примечание (достоверность различия между сравниваемыми группами)
* - p > 0,05;
** - p < 0,01.
Одновременно с незначительной лабилизацией лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин, использующих ВМК, наблюдается невыраженное повышение секреторной активности этих клеток (p > 0,05). У женщин, регулярно применяющих КОК, стабилизация лизосомных мембран моноцитов/макрофагов ведет к заметному снижению в них секреторной активности (p < 0,01 по сравнению с результатами двух других групп женщин).
При этом синтетическая активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин, применявших КОК, повышена по сравнению с женщинами, отдающими предпочтение презервативам (p < 0,01). Использование ВМК ведет лишь к незначительному возрастанию синтеза лизоцима изучаемых клеток (p > 0,05).
Таблица 3
Уровень синтеза лизоцима (Lсинт) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у женщин, применяющих различные виды контрацептивов
|
Группы сравнения |
n |
Lсинт, мкг/мл, моноцитов (M ± m) |
Lсинт, мкг/, макрофагов (M ± m) |
|
Женщины, применяющие презервативы - p¹ |
17 |
0,4 ± 0,03 |
0,7 ± 0,04 |
|
Женщины, применяющие ВМК - p² |
14 |
0,45 ± 0,05 p1-p2* |
0,78 ± 0,04 p1-p2* |
|
Женщины, применяющие КОК - p³ |
18 |
0,54 ± 0,04 p1-p3** p2-p3** |
0,86 ± 0,03 p1-p3** p2-p3** |
Примечание (достоверность различия между сравниваемыми группами)
* - p > 0,05; ** - p < 0,01.
Таким образом, состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторно-синтетическая активность различается у женщин, использующих различные средства контрацепции. Применение ВМК в течение одного года ведет к незначительной лабилизации лизосомных мембран моноцитов/макофагов, повышению в них секреции и синтеза лизоцима. На фоне приема КОК наступает выраженная стабилизация лизосомных мембран этих клеток со снижением в них секреции и увеличением синтеза лизосомного фермента ‒ лизоцима. По-видимому, выраженные изменения секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при использовании КОК связаны с превалирующим эффектом прогестерона, обладающим стабилизирующим действием на лизосомные мембраны этих клеток [12]. Влияние гармонов, входящих в состав КОК, на клетки макрофагальной системы могут происходить непосредственно через имеющиеся на плазматической мембране этих клеток рецепторы к гормонам или опосредованно, путем сдвига количественных гормональных соотношений [8]. Наступающие изменения состояния стабильности лизосомных мембран макрофагальных клеток, их секреторно-синтетической активности при приеме различных видов контрацептивов должны быть невыраженными и иметь обратимый характер. Своевременная диагностика клеточных нарушений позволит определить рекомендуемый вид контрацепции для женщин и сроки его использования.
Рецензенты:
Антонюк М.В., д.м.н., профессор, зав. лабораторией восстановительного лечения НИИ медицинской климатологии и восстановительного лечения СО РАМН, г. Владивосток;
Гельцер Б.И., д.м.н., профессор, главный врач ГБУЗ «Краевой клинический центр специализированной медицинской помощи», г. Владивосток.
Работа поступила в редакцию 08.08.2011.