Местный иммунитет слизистой оболочки гортани характеризуется несколькими уровнями. Первый уровень - над- эпителиальный слой - иммунная защита формируется прежде всего антителами [6] и фагоцитами, что обеспечивает противобактериальный эффект. Второй уровень - клетки многослойного плоского эпителия и многорядного цилиндрического реснитчатого эпителия [1, 2, 3], которые выполняют механическую защиту, обеспечивая мукоцилиарный клиренс.
Клетки плоского эпителия являются участниками иммунного ответа. Здесь происходит продукция секреторного компонента и присоединение его к иммуноглобулинам классов А [3, 5]. В подэпителиальном слое синтезируются антитела. Изучение факторов иммунной защиты слизистой гортани представлено в ограниченных публикациях [4]. В этой связи представляется важным проведение исследований состояния местного иммунитета слизистой оболочки гортани в норме и при хронических воспалительных процессах.
Цель исследования - определение особенностей формирования иммунного ответа на слизистой оболочке гортани в норме и при хроническом воспалении.
Задачи исследования
- Оценить показатели местного иммунитета на различных участках слизистой оболочки верхних дыхательных путей (нос, глотка и гортань) у практически здоровых лиц на основе изучения иммуноцитограмм (клеточное представительство, состояние деструкции) и уровня антител (IgG, IgA, IgE, IgM, sIgA) в смывах со слизистой оболочки гортани.
- Провести сравнительное изучение показателей местного иммунитета слизистой оболочки гортани при хроническом воспалении в зависимости от формы заболевания (катаральная, гиперпластическая, атрофи- ческая формы хронического ларингита).
Материалы и методы исследования
Под наблюдением находились 54 практически здоровых лица в возрасте 47,2 ± 0,81 лет, в том числе мужчин - 32, женщин - 22, которые не имели хронических воспалительных процессов, и в течение 3 месяцев не болели острыми воспалительными заболеваниями. Из них катаральная форма хронического ларингита была у 27 человек (24,54 %), гиперпластическая форма - у 58 человек (52,72 %о), атрофическая - у 25 человек (22,72 %о). Средний возраст больных составил при хроническом катаральном ларингите 32,03 ± 1,14 года, хроническом гиперпластическом ларингите - 45,98 ± 0,44 и при хроническом атрофи- ческом ларингите - 57,8 ± 0,91 лет. Среди больных мужчин было 68 (61,8 %), женщин - 42 (38,2 %о). Всем больным (110 человек) проводилось клинико-инструментальное обследование носа, глотки, гортани и уха. Больные с гнойно-воспалительными заболеваниями
носа и уха, а также с выявленной патологией других органов и систем в группу исследуемых не включались.
Материалом для исследования служила кровь, а также секрет с поверхности голосовых складок, мазки - перепечатки с поверхности слизистой гортани в области голосовых складок; у практически здоровых лиц дополнительно исследовали смешанную слюну и носовые смывы.
Оценку состояния клеточных факторов местного иммунитета слизистых оболочек проводили по данным иммуноцитограмм. Гуморальные факторы исследовали путём количественного определения в биологических жидкостях (ларингеальный смыв, слюна, носовые смывы, кровь) иммуноглобулинов (sIgA, IgG, IgA, IgM и IgE) и альбумина методом иммуноферментного анализа (тест-системы «ИФА- БЕСТ-СТРИП», ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская область, п. Кольцово).
Для оценки происхождения антител в смывах производили расчёт относительных коэффициентов секреции (ОКС) иммуноглобулинов (Тотолян А.А., 1999) [7].
Иммуноцитологические исследования включали в себя изучение количественного и функционального состояния присутствующих в мазках клеток. Изучение деструктивных процессов в клетках осуществляли по методу Л.А. Матвеевой (1986)[5]. Функциональная активность нейтрофилов изучалась путём исследования фагоцитарной способности нейтрофилов. Вычислялся процент нейтрофилов, фагоцитирующих аутофлору - показатель фагоцитоза. Среди фагоцитирующих нейтрофилов учитывали процент разрушенных (деструктированных) фагоцитов, в протоплазме которых сохранились целые микроорганизмы - показатель незавершённого фагоцитоза [1].
Результаты исследования и их обсуждение
Анализ клинических особенностей у больных хроническим ларингитом показал, что в большинстве случаев (52,7 %) у них выявлялся гиперпластический вариант заболевания. Катаральная и атрофическая формы заболевания отмечались в небольшом количестве (по 25 %).
Результаты исследования иммуноцитограмм с поверхности слизистых оболочек носа, глотки и гортани у практически здоровых лиц представлены в табл. 1.
Табл.1. Клеточный состав иммуноцитограмм с поверхности слизистых оболочек у практически здоровых лиц
|
Показатели |
Место забора |
Р |
||
|
Гортань (1) |
Глотка (2) |
Нос (3) |
||
|
Цитоз, кол-во клеток |
211,26 ± 40,11 |
153,54 ± 41,65 |
83,15 ± 14,04 |
p 1,3 < 0,01 |
|
Плоский эпителий, % |
74,7 ± 4,25 |
63,67 ± 4,84 |
3,43 ± 0,63 |
p1,3 < 0,001 p2,3 < 0,001 |
|
Нейтрофилы, % |
13,76 ± 3,38 |
7,33 ± 3,68 |
48,55 ± 4,61 |
p1,3 < 0,001 p2,3 < 0,001 |
|
Фагоцитоз, % |
20,87 ± 5,51 |
43,45 ± 5,27 |
27,00 ± 4,51 |
p1,2 < 0,01 p2;3 < 0,01 |
|
Незавершенный фагоцитоз, % |
62,12 ± 3,14 |
54,45 ± 7,89 |
33,50 ± 5,45 |
p1,3 < 0,001 p;2,3 < 0,05 |
Как видно из табл. 1, цитограмма слизистой оболочки гортани у практически здоровых лиц характеризовалась повышенным цитозом за счет слущивания клеток плоского эпителия (доля клеток составляла около 75 %). Сегментоядерные нейтрофилы были представлены в незначительном количестве (14 %). Способность к фагоцитозу была сниженной по сравнению с клетками, находящимися на слизистой носа и глотки.
При изучении состояния фагоцитарного звена иммунной системы слизистой оболочки гортани было установлено, что при хроническом воспалении отмечается незначительное снижение количества нейтрофи- лов 0 степени деструкции. При катаральной форме доля неповреждённых нейтрофилов составила 14,54 ± 2,40 % (p < 0,05), при гиперпластической форме - 9,25 ± 3,31 % (p < 0,01) по сравнению с группой практически здоровых лиц 22,16 ± 4,12 %, что может быть расценено как нарушение выхода нейтрофилов на слизистую оболочку гортани из кровеносного русла. В то же время отмечалось увеличение показателя способности нейтрофилов к фагоцитозу до 34,8 ± 6,85 % (p < 0,05) при катаральной и до 38,0 ± 8,29 % (p < 0,05) при гиперпластической форме хронического ларингита, по сравнению с 20,87 ± 5,51 % в группе контроля. Обращает на себя внимание, что при атрофической форме заболевания показатели функциональной активности нейтрофилов практически не изменялись.
Следовательно, у больных хроническим ларингитом отмечались выраженные деструктивные изменения клеток плоского эпителия слизистой оболочки гортани и снижение количества нейтрофилов на поверхности слизистой, более выражены при гиперпластическом и атрофическом вариантах течения заболевания. Высокие показатели фагоцитарной активности нейтрофилов свидетельствуют о напряжённости иммунной системы слизистой оболочки гортани за счет факторов врожденного иммунитета.
Показатели гуморального иммунитета слизистой оболочки гортани при сопоставлении с данными на других участках слизистой оболочки верхних дыхательных путей - глотки и носа выявили ряд особенностей (рис. 1).
Рис. 1. Спектр антител на слизистой оболочке гортани, глотки и носа (%)
Как видно из рис. 1, иммуноглобулиновый профиль на слизистых носа и глотки был практически идентичен. Иммуноглобулины были представлены преимущественно антителами с секреторным компонентом (sIgA) на слизистой оболочке носа в 77 % и глотке - в 81 %. В то же время в этих областях иммуноглобулины без секреторного компонента (IgA) не превышали 12 %. Иммуноглобулины класса G имелись в незначительном количестве и составляли соответственно 13 и 6 %. Тогда как в гортани доля секреторного иммуноглобулина А (sIgA) была значительно ниже, чем на слизистой носа и глотки - 42 %. Иммуноглобулины без секреторных компонентов (IgA и IgG) были представлены в большем количестве (27 %).
При сравнительной оценке показателей относительных коэффициентов секреции иммуноглобулинов в смывах с различных участков слизистой оболочки верхних дыхательных путей было установлено значительное увеличение продукции IgE и снижение секреции sIgA на слизистой гортани (рис. 2).
Рис. 2. Показатели секреции (ОКС) иммуноглобулинов у практически здоровых лиц на различных участках слизистой оболочки верхних дыхательных путей (гортань, ротовая и носовая полости). ОКС более 1,0 рассматривается как продукция на местном уровне, менее 1,0 - какрекрутация из кровеносного русла
Как видно из рис. 2, ОКС IgE на слизистой оболочке гортани составил 16,64 ± 7,63 по сравнению с показателем со слизистой оболочки глотки 0,19 ± 0,08 (р < 0,05 при t = 2,16) и со слизистой оболочки носа 0,14 ± 0,07 (р < 0,05 при t = 2,16). ОКС sIgA составил 10,65 ± 3,36, по сравнению с показателями на слизистой оболочке глотки 51,44 ± 5,67 (р < 0,001 при t = 6,2) и полости носа 35,71 ± 10,01 (р < 0,05 при t = 2,37).
При исследовании гуморальных факторов местного иммунитета слизистой полости гортани у больных хроническим ларингитом была выявлена выраженная активация гуморальных механизмов защиты (табл. 2).
Иммунное реагирование на слизистой оболочке гортани при хроническом воспалении сопровождалось значимым повышением уровня реагиновых антител (IgE) в десятки раз и в 3-5 раз - иммуноглобулинов без секреторного компонента (рекрутируемых из кровеносного русла) - классов G, A и M и незначительным увеличением секреторных антител (sIgA). При атрофической форме заболевания, несмотря на отсутствие признаков выраженной антительной активации, спектр иммуноглобунов характеризовался увеличенным содержанием IgE (в 5 раз) и IgG (в 2 раза).
Таким образом, местный иммунитет слизистой оболочки гортани у практически здоровых людей формируется прежде всего антителами (гуморальный иммунитет) с вовлечением в элиминационный механизм клеток фагоцитарного звена - нейтрофилов (клеточное звено иммунной системы) и клеток плоского эпителия. Выявлены особенности иммунной защиты слизистой оболочки гортани по сравнению с другими участками верхних дыхательных путей. В частности в гортани значимость клеток фагоцитарного звена (нейтрофилов) невысокая, иммунная защита определяется высоким уровнем продукции IgE и привлечением антител из кровеносного русла (IgG).
|
Таблица 2 Спектр антител на слизистой оболочке гортани у больных с хроническим ларингитом
Примечание - различие с данными практически здоровых лиц статистически значимо: *р < 0,05, **р < 0,01, ***р < 0,001. |
|||||||||||||||||
У больных хроническим ларингитом иммунное реагирование слизистой оболочки гортани также характеризуется активацией на местном уровне гуморальных факторов по реагиновому типу (IgE), вовлечением в воспалительный процесс сывороточных антител (из кровеносного русла), нарушением процессов рекрутации нейтрофилов из кровеносного русла и усилением деструктивных процессов, затрагивающих эпителиальные клетки, особенно при гиперпластическом и атрофическом варианте хронического ларингита.
Вывод
Иммунное реагирование на слизистой оболочке гортани, в отличие от других участков верхних дыхательных путей (ротовая полость и нос), формируется путем преимущественной продукции на местном уровне реагиновых антител (IgE) и вовлечения в воспалительный процесс иммуноглобулинов из кровеносного русла, что необходимо учитывать при проведении лечебных мероприятий.
Рецензенты:
- Хайруллина Р.М., д.м.н., зав. отделением клинической иммунологии ГУЗ «Республиканская детская клиническая больница», г. Чебоксары;
- Имельбаева Э.А., д.б.н., профессор кафедры клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа.
Работа поступила в редакцию 24.06.2011.