Scientific journal

Fundamental research

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

Слизистые оболочки и кожа как покровы, обращённые во внешнюю среду, защищают внутреннюю среду организма и сохраняют постоянство внутренней среды [9]. В последние годы, по данным ВОЗ, наблюдается увеличение заболеваний слизистой оболочки околоносовых пазух. Как известно, в эпителии многих органов определяются особые нейроэндокринные клетки, влияющие на размножение и дифференцировку клеток [3, 5, 6]. Наблюдения ряда авторов показывают, что эти клетки могут, в некоторых случаях, перерождаться в карциноиды в органах желудочно-кишечного тракта, лёгких и бронхах и др. [7, 8]. В связи с чем необходимо знать особенности локализации нейроэндокринных клеток в коже и слизистой оболочке околоносовых пазух как в норме, так и при аллергическом полипозном риносинусите, которые до сих пор не описаны.

Цель нашего исследования - выявить NSE- и индолсодержащие клетки в коже и в слизистой оболочке околоносовых пазух в норме и при аллергическом полипозном риносинусите.

Материал и методика исследований

Материалом служила кожа 12 женщин, в возрасте 45‒50 лет, взятая во время пластической операции круговой подтяжки лица (после предварительного согласия пациенток). В ходе операционного вмешательства у 12 человек (возраст 25‒50 лет), страдающих аллергическим полипозным риносинуситом, были взяты полипы околоносовых пазух. Контролем служила слизистая оболочка околоносовых пазух, взятая от 5 трупов людей сразу после констатации смерти, погибших в результате травмы и не страдавших при жизни заболеваниями полости носа.

Срезы исследуемых тканей толщиной 5 мкм после депарафинирования погружали в восстанавливающий цитратный буфер (Ph 6,0), затем проводили высокотемпературную обработку прогреванием на водяной бане при 90‒95 °C в течение 30 мин с целью демаскировки искомых антигенов в тканях. Иммуногистохимическую реакцию проводили методом трехэтапного непрямого иммуноферментного анализа с использованием первичных моноклональных антител (МКАТ) к маркеру нейроэндокринных клеток NSE - в разведении 1:100. Для каждой иммуногистохимической реакции выполняли негативное контрольное исследование - один из двух серийных срезов, помещенных на предметное стекло, вместо первичных антител обрабатывали контрольными антителами. Специфичность экспрессии искомого антигена в опытных образцах тканей подтверждалась отсутствием ее в контрольных срезах, не обработанных первичными МКАТ. Для гистохимической идентификации серотонинсодержащих структур использовали окраску Массона-Фонтаны. Визуальную оценку экспрессии исследуемых антигенных маркеров в тканях осуществляли с помощью светового микроскопа «Альтами-био» с приставкой «CANON». Статистическую значимость полученных данных оценивали по t-критерию Стьюдента. Представление о количественном распределении окрашенных клеток получали методом их подсчета в 10 полях зрения микроскопа при об. 40, ок. 10 с последующим вычислением для каждого случая среднего арифметического значения.

Результаты исследований и их обсуждение

При изучении срезов кожи человека в эпидермисе были выявлены NSE-позитивные кератиноциты. Число NSE-позитивных кератиноцитов, расположенных подряд, составляет от 3 до 30 клеток в группе (таблица).

Число NSE- и индолсодержащих клеток в коже и в слизистой оболочке околоносовых пазух при окраске на нейронспецифическую энолазу и по Массона-Фонтаны (М ± m)

Примечание: ± означает амплитуду колебаний цифровых значений.

В некоторых участках эпидермиса наблюдали иммуннопозитивное окрашивание на NSE не только в базальном, но и в шиповатом слое эпидермиса (рис. 1).

Экспрессия NSE проявляется на фоне неокрашенных структур, окружающих волосяной фолликул. NSE-положительные клетки характеризуются более крупными размерами, имеют полигональную неправильную или вытянутую форму и красновато-коричневые глыбовидные разнородные гранулы в цитоплазме. NSE-позитивные клетки местами контактируют с нервными волокнами, окружающими волосяную сумку.

Распределение NSE-позитивных клеток около волосяных фолликулов не имеет определенной закономерности. Так, в заушной области, где число волосяных фолликулов достоверно выше, чем в других исследованных точках, число фолликулов, около которых встречаются NSE-экспрессирующие клетки, составляет 1-2 на одно поле зрения (см. таблицу). Можно предположить, что здесь эти клетки оказывают влияние на рост и дифференцировку клеток волосяного фолликула. В то же время встречаются единичные волосяные фолликулы, около которых иммунопозитивные клетки образуют непрерывный слой, лежащий снаружи от соединительно-тканной сумки (рис. 2).

Рис. 1. Экспрессия NSE кератиноцитами
базального и шиповатого слоя эпидермиса:
1 - эпителиоциты; 2 - иммунопозитивные клетки. Иммуногистохимический метод
на NSE. Микроскоп Альтами-Био. Ув. 400

Рис. 2. Скопление NSE-иммуннопозитивных клеток в области волосяного фолликула кожи:
1 - эпителиоциты; 2 - иммунопозитивные клетки. Иммуногистохимический метод
на NSE. Микроскоп Альтами-Био. Ув. 400

Кроме того, отдельные NSE-иммунопозитивные клетки с гранулами были замечены в мышце, поднимающей волос. В секреторных клетках концевых отделов потовых желёз можно выделить 2 группы NSE-иммунопозитивных клеток: одни клетки содержат следы исследуемого вещества, что проявлялось в светло-коричневом мелкодисперсном окрашивании цитоплазмы, а в других - цитоплазма окрашивалась в темно-коричневый цвет. Таким образом, как тёмные, так и светлые клетки потовых желез давали положительную реакцию на NSE. Число гранул в клетке составляло 8‒16. По описанию такие клетки выявляются в области концевых секреторных отделов потовых желез люминесцентно-гистохимическими методами [4]. Около одной из петель концевого секреторного отдела содержится 5-7 NSE-экспрессирующих клеток (см. таблицу). Таким образом, как тёмные, так и светлые клетки потовых желез давали положительную реакцию на NSE.

Изучение срезов интактной слизистой оболочки околоносовых пазух, окрашенных с помощью МКАТ NSE, позволило нам выявить их на некоторых участках в эпителии. Их число составляло от 7 до 12 клеток в группе на поле зрения (см. таблицу). NSE-позитивные клетки имели высокую призматическую форму, ортохромные овальные ядра и слабоокрашенную в красно-коричневый цвет цитоплазму. Ядра этих клеток составляли самый верхний ряд в эпителии.

В собственной пластинке слизистой оболочки располагались слизисто-белковые железы. Их эпителий также содержал NSE-позитивные клетки. Экспрессия вышеназванного маркёра проявлялась во всех эпителиоцитах. Такие клетки имели округлые базофильные ядра и слабоокрашенную в красно-коричневый цвет цитоплазму.

При аллергическом полипозном риносинусите NSE-позитивные клетки встречались в основном в неизменённом и гиперплазированном эпителиях. Они располагались в ряд по 8‒10 клеток в поле зрения и реже поодиночке. Такие клетки имели высокопризматическую форму, их цитоплазма по сравнению с NSE-клетками здоровых тканей слизистой оболочки околоносовых пазух окрашивалась в насыщенно красно-коричневый цвет (рис. 3).

Выявлено, что число NSE-позитивных клеток в эпителии имело тенденцию к увеличению в 1, 3 раза по сравнению с интактной слизистой оболочкой околоносовых пазух (см. таблицу).

В отличие от здоровых тканей слизистой оболочки околоносовых пазух, при аллергическом полипозном риносинусите в собственной пластинке слизистой оболочки NSE-положительные клетки располагались чаще всего вдоль сосудов по 1‒2 клетки в поле зрения (см. таблицу). NSE-позитивные клетки здесь имели также овальные ортохромные ядра и окрашенные в ярко-красно-коричневый цвет крупные гранулы одинакового размера. Часть гранул находилась за пределами цитомембраны клетки.

При окраске по методу Массона-Фонтаны эпителий кожи здоровых людей импрегнировался в тёмно-коричневый цвет на +4, однако выявлялись кератиноциты с интенсивной импрегнацией на +5.

Эпителий здоровых тканей слизистой оболочки околоносовых пазух был интенсивно импрегнирован в тёмно-коричневый цвет на +3. В эпителии встречались участки, где ядра эпителиальных клеток импрегнировались в чёрный цвет на +5, а их цитоплазма - на +3. Это могли быть ядра как базальных, так и реснитчатых клеток (рис. 4).

Рис 3. NSE-содержащие клетки в эпителии слизистой оболочки околоносовых пазух при аллергическом полипозном риносинусите:
1 - иммунопозитивные клетки;
2 - собственная пластинка слизистой
оболочки. Иммуногистохимический метод
на NSE. Микроскоп Альтами-Био. Ув. 900

Рис. 4. Индолсодержащие клетки в эпителии слизистой оболочки околоносовых пазух
здоровых тканей:
1 - индолсодержащие клетки; 2 - эпителий;
3 - собственная пластинка слизистой
оболочки. Окраска по методу
Массона-Фонтаны. Микроскоп Биолам. Ув. 400

В собственной пластинке здоровых тканей слизистой оболочки околоносовых пазух большинство клеток и волокна имели окрашивание на +3. Ядра клеток эпителия большинства желёз импрегнировались на +5.

При аллергическом полипозном риносинусите серотонинсодержащие эпителиальные клетки встречались в основном в гиперплазированном и в многослойном метаплазированном эпителиях. Число индолсодержащих клеток в эпителии имело тенденцию к увеличению в 1,3 раза по сравнению со здоровыми тканями слизистой (см. таблицу).

Собственная пластинка слизистой оболочки была инфильтрирована клетками лимфогистиоцитарного ряда. На основании визуальной оценки аргентаффинности в собственной пластинке встречались лимфоциты, плазматические клетки и фиброциты, несущие большее содержание серотонина, чем все остальные, т.к. их ядра имели более тёмную окраску. Число серотонинсодержащих клеток эпителия желёз при аллергическом полипозном риносинусите увеличилось в 5,6 раза по сравнению со здоровыми тканями слизистой оболочки (см. таблицу). В стенках сосудов определялись индолсодержащие клетки.

Обсуждение результатов

Ранее было установлено, что темные клетки потовых желёз экспрессируют цитокератин; светлые клетки - цитокератин, SP (субстанция P), белок S-100, а миоэпителиальные - актин, NOS-1, ChAT [10]. В области потовых желез кожи человека выявлено два типа NSE-иммунопозитивных клеток: первый - секреторные клетки потовых желез; второй - клетки, лежащие с наружной стороны соединительно-тканной оболочки потовых желёз. Можно предположить, что клетки первого типа регулируют выделение секрета, а второго - участвуют в регуляции сокращения миоэпителиальных клеток, влияя, таким образом, на влажность кожи и электропроводность [2].

В слизистой оболочке околоносовых пазух также выявлены два типа NSE-иммунопозитивных клеток. Первый тип составляют клетки эпителия слизистой оболочки околоносовых пазух и эпителия желёз; второй тип - клетки, располагающиеся вдоль стенки сосудов собственной пластинки слизистой оболочки околоносовых пазух. Часть индолсодержащих клеток в слизистой оболочке околоносовых пазух по локализации совпадает с NSE-позитивными клетками первого типа.

Возможно, взаимодействуя с нервными терминалями и являясь продуцентами разнообразных биологически активных веществ, нейроэндокринные клетки служат звеном в регуляции нейроиммуноэндокринных взаимоотношений в области кожи и слизистой и могут выступать в качестве координаторов местных иммунных, нервных и эндокринных механизмов в норме и при возникновении патологии.

Выводы

1. В коже человека NSE активно экспрессируется некоторыми кератиноцитами базального слоя, в области мышцы, поднимающей волос, в области ряда волосяных фолликулов, секреторными эпителиоцитами потовых желез.

2. При аллергическом полипозном риносинусите число NSE-позитивных клеток в эпителии увеличилось по сравнению со здоровыми тканями, а в эпителии желёз исчезло.

3. Индолсодержащие клетки при аллергическом полипозном риносинусите были обнаружены в стенке сосудов в местах расположения эндотелиальных, гладкомышечных, адвентициальных клеток, в эпителии желёз, а также в эпителии слизистой околоносовых пазух, где их число было выше по сравнению со здоровыми тканями.

Список литературы

1. Афанасьев Ю.И. Гистология, цитология и эмбриология / под ред. Ю.И. Афанасьева, Н.А. Юриной. - М.: Медицина, 2002. - С. 744.
2. Василенко А.М. Нейроэндокриноиммунология боли и рефлексотерапия // Рефлексотерапия. - 2007. - № 4. - С. 4‒7.
3. Кветной И.М. Современные методы изучения функциональной морфологии эндокринных клеток // Архив патологии. - 1996. - Т. 58, № 2. - С. 21.
4. Любовцева Л.А. Свойства гранулярных люминесцирующих клеток / Л.А. Любовцева, О.А. Ефремова, Н.Н. Голубцова и соавт. // Международный журнал по иммунореабилитации. - 2009. - Т. 11, № 1. - С. 25-26.
5. Ноздрин В.И. Кожа и ее производные / В.И. Ноздрин С.А. Барашкова, В.В. Семченко. - Омск, 2005. - 210 с.
6. Смирнова И.О. Нейроэндокринология кожи и молекулярные маркеры ее старения / И.О. Смирнова, И.М. Кветной, И.В. Князькин. - СПб.: ДЕАН, 2005. - 210 с.
7. Fraser R.G. Neoplastic diseases of the langs / R.G. Fraser., J.A.P. Pare., P.D. Pare et al. // Diagnosis of Diseases of the Chest (3rd ed.). Philadelphia: Saunders. - 1989. - P. 1476-1494.
8. Kulre M.H. Carcinoid tumors / M.H. Kulre, R.J. Mayer // New Engl. J. Med. - 1999. - Vol. 340. - P. 858.
9. Vorland L.H. Antimicrobal peptides as part of the innate immune defense system // Folia Otorhinolaryng et Pathol Respiratoriae. - 1996. - № 2: 1 - 2: 13 - 21.
10. Zancanaro C., Merigo F., Creso C. et al. Immunohistochemical evidence suggests intrinsic regulatory activity of human eccrine sweat glands / C. Zancanaro, F. Merigo, C. Creso // J Anat. - 1999. - Vol. 194 (Pt 3). - P. 433-444.

Рецензент ‒

Алексеев В.В., д.б.н., профессор, декан факультета естествознания и дизайна среды ГОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет им. И.Я. Яковлева», Чебоксары.