Атеросклероз и его осложнения в течение многих десятилетий сохраняет статус болезни номер один - как по смертности, так и по социальному и экономическому ущербу во всех странах мира. Большое разнообразие имеющихся в настоящее время методов лечения атеросклероза, говорит о недостаточной изученности этиологии и патогенеза заболевания, несовершенности и малой эффективности этих методов [Аронов Д.М. Лечение и профилактика атеросклероза. - М.: Триада - Х, 2000. - С . 9-18; 367-373.ф].
Цели и задачи исследования.
Разработка малоинвазивных способов улучшения микроциркуляции нижних конечностей кроликов при атерогенезе с помощью природных биополимеров.
Материалы и методы.
Эксперимент выполнялся на 36 кроликах массой 3,5-4 кг, мужского пола. Интактные животные содержались на стандартном рационе вивария (3ападнюк И.П. и соавт., 1983). 110 дней получали холестериновую диету состоящую из: отрубей и холестерина (в соотношении 0,8 грамм на кило грамм массы). Опытные животные получали в течение 110 дней холестериновую диету состоящую из: отрубей, холестерина (в соотношении 0,8 грамм на килограмм массы). Эксперимент выполнен с соблюдением "Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных" (1979). Условия проведения эксперимента были идентичными для интактных и опытных животных.
Для исследований были выбраны 3 биополи мера: болхит (первая группа), хитозан-сульфат (вторая группа) и 1% аскорбат-хитозан (третья груп па). Модель атерогенеза создавалась на 18 кроликах, по шесть в каждой группе. На 80, 100 и 110 сутки кормления холестериновой диетой было проведено измерение микроциркуляции в трех точках на левой и правой конечностях и забор крови для анализа липидного спектра. Через 80 дней с начала эксперимента в периартериальное фасциальное пространство левой конечности помещался биополимер (опыт) [патент РФ №2311139, 27.11.2007г.]. Правая конечность животного осталась без имплантации биополимера (контроль). Подопытные животные были выведены из эксперимента на 110 сутки, произведен забор тканей для окраски [Граменицкий Е.Н. При жизненная окраска клеток и тканей в норме и патологии. М.: Медицина, 1963. - 152 с.].
Интактной группой (четвертая группа) являлись 18 кроликов без холестериновой диеты, которым аналогичным способом в левую конечность вводился биополимер, а правая оставлена для сравнения. Производилось измерение микроциркуляции и липидного спектра до введения полимера, на 20 и 30 сутки.
Для исследования параметров микроциркуляции крови методом лазерной допплеровской флоуметрии использовался прибор ЛАКК-02. Измерялись следующие показатели микроциркуляции: ПМ - показатель микроциркуляции, отражающий средний уровень перфузии в единице объема ткани за единицу времени и ПШ - показатель шунтирования.
Исследование липидного спектра проводилось на базе ЦНИЛ КГМА с применением спектрофотометрии. Определялись следующие показатели крови: холестерин общий, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП, триглицериды, коэффициент атерогенности.
Результаты исследования:
Атеросклеротическая диета в течение 110 дней вызывала у кроликов гиперлипидемию, о чем свидетельствует увеличение показателя общего холестерина (ХН) в 29 раз (с 0,77 ммоль/л в интактной группе до 22,56 ммоль/л. при атеросклеротической диете), ЛПНП (липопродеиды низкой плотности) в 61 раз (с 0,29 ммоль/л до 17,82 ммоль/л), коэффициент атерогенности (КА) в 7 раз (с 1,71 ммоль/л до 11,17 ммоль/л). При окраске судан III под интимой определялось скопления липидов, что также подтверждает развитие атеросклеротического процесса.
У кроликов первой и третьей групп отмечено, что показатели микроциркуляции достоверно не меняются до операции, на 20 и 30 сутки после ведения биополимера. Хотя эти цифры достоверно различимы с цифрами, полученными у интактной группы (в этой группе показатели микроциркуляции выше, чем у животных получавших холестерин).
У кроликов второй группы на 20 сутки после введения биополимера отмечается увеличение показателя микроциркуляции на 43% (с 12,57 до 17,99) и показателя шунтирования на 23% (с 1,14 до 1,40) в опыте и контроле. На 30 сутки после введения биополимера (60 сутки холестериновой диеты) идет заметное снижение микроциркуляции крови как в опытной, так и в контрольной конечностях, но в опытной конечности ПМ остается больше на 26%, ПШ снижается, но остается больше на 15%, по сравнению с контрольной конечностью, это объясняется продолжающейся холестериновой диетой и снижением общего кровотока вследствие прогрессирующего атерогенеза.
Введение хитозан-сульфата в паравазальное пространство магистральной артерии конечности кроликам без холестериновой диеты не вызывает нарушений показателей микроциркуляции.
Таким образом, выявлено, что наиболее оптимальным биополимером для увеличения показателей микроциркуляции является хитозан-сульфат, заслуживающий дальнейшего изучения.