Введение. В настоящее время все большее значение приобретают условно-патогенные микроорганизмы, которые ассоциированы с развитием многих заболеваний, коморбидных и внутрибольничных инфекций [1, 5, 6, 10]. Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов при ревматических заболеваниях во многом базируется на изучении гуморальных ответных реакций организма больных на бактериальные антигены. Микробиологические и иммунологические исследования выявили связь между Klebsiella pneumoniae и анкилозирующим спондилоартритом, Proteus mirabilis и ревматоидным артритом [6, 4]. Высокие титры антител классов IgM и IgA к Proteus mirabilis и антитела класса IgM к Escherichia coli связаны с ранним серопозитивным ревматоидным артритом [7, 9]. Наряду с этим, изучение уровня антибактериальных антител позволяет выявить особенности формирования адаптивного иммунитета и развитие защитных иммунных реакций у больных с ревматическими заболеваниями.
Целью представленной работы явилось изучение уровня антител к условно-патогенным бактериям у больных с различными нозологическими формами ревматических заболеваний.
Материалы и методы
Обследовано 82 человека, из них 24 больных ревматоидным артритом, 14 больных системной красной волчанкой, 12 больных системной склеродермией и 32 практически здоровых человека группы сравнения. Средний возраст обследованных лиц был 52,92 ± 13,15 лет. Диагноз ревматоидного артрита (РА), системной красной волчанки (СКВ) и системной склеродермии (ССД) устанавливали согласно критериям, принятым в ревматологии. Среди больных РА преобладали пациенты с I‒II рентгенологической стадией (75 %) и у 25 % была III рентгенологическая стадия поражения суставов. По ревматоидному фактору больные РА были серопозитивны в 83,3 % случаев. Обследованы больные СКВ I (42,9 %) и II (57,1 % больных) степени активности, с подострым (57,1 %) и хроническим (42,9 % больных) течением заболевания. У всех больных ССД отмечена лимитированная форма заболевания, умеренная степень активности патологического процесса, подострое течение - у 25 % больных, хроническое - у 75 % больных.
Выявление антител к условно-патогенным бактериям проведено иммуноферментным методом (ИФА) на основании одновременного определения IgG антител к бактериальным антигенам, полученным из клеток микроорганизмов: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus spp., Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Salmonella (O-12), Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae. При выявлении антител использована скрининговая иммуноферментная система для определения антител к условно-патогенным бактериям производства НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН. Исследованы рабочие разведения сывороток от 1:100 до 1:1600. Регистрацию результатов ИФА проводили на спектрофотометре «Multiskan» при длине волны 450 нм. Об активности антител судили по разности оптической плотности (ОП) анализируемой сыворотки и контрольной отрицательной сыворотки (дОП).
Статистический анализ данных выполнен на IBM PC совместимом компьютере с помощью программы STATISTICA ® (Data analysis software system, StatSoft) версия 7.0. Результаты исследований представлены в виде средней ± стандартное отклонение (М ± s). Сравнение непрерывных величин с нормальным распределением проводилось с помощью t-критерия Стъюдента. Дискретные величины сравнивались с использованием критерия χ2. Различия между группами считались статистически значимыми при p < 0,05.
Работа одобрена этическим комитетом Ярославской государственной медицинской академии.
Результаты и обсуждение
Изучение антител в сыворотках больных ревматическими заболеваниями показало, что частота выявления антител к условно-патогенным бактериям у здоровых лиц составляет 37,8 %. Достоверно чаще (p < 0,0001) были обнаружены антитела у больных РА (45,8 %), СКВ (51 %) и ССД (64,6 %).
Частота обнаружения у больных ревматическими заболеваниями IgG антител к бактериальным антигенам, полученным из клеток различных условно-патогенных микроорганизмов, представлена в табл. 1. При СКВ достоверно чаще выявлялись антитела к S. aureus (57,1 %), Streptococcus spp. (85,7 %), E. coli (71,4 %), Salmonella (35,7 %), K. pneumoniae (100 %); у лиц контрольной группы частота обнаружения аналогичных антител составляла соответственно 18,7; 53,1; 25, 6,2 и 62,5 % (p < 0,05). Вместе с тем у больных СКВ снижалась частота обнаружения IgG-антител к менее патогенным коагулазоотрицательным эпидермальным стафилококкам (71,4 %), а к сапрофитическим стафилококкам антитела не обнаруживались вовсе, в то время как у здоровых лиц антитела к S. epidermidis выявлены в 100 % случаев, а к S. saprophyticus - в 46,9 % (р < 0,05). При ССД чаще, чем у здоровых лиц (р < 0,05), определялись IgG-антитела к S. aureus (75 %), S. saprophyticus (91,7 %), S. pneumoniae (91,7 %), E. coli (83,3 %), P. vulgaris (75 %), Salmonella (75 %). У больных РА антитела к E. coli, Salmonella (O-12), H. influenzae, K. pneumoniae были выявлены в 100 % случаев, в то время как у лиц группы сравнения частота обнаружения этих антител была существенно ниже. В то же время у больных РА существенно реже определялись антитела к S. epidermidis (33,3 %) и не обнаруживались антитела к S. saprophyticus, тогда как у лиц группы сравнения эти показатели равнялись 100 и 46,9 % соответственно.
При ревматических заболеваниях в сыворотке крови пациентов обнаруживались IgG- антитела к бактериальным антигенам, существенно отличавшиеся по уровню от аналогичных данных у здоровых лиц (табл. 2). По сравнению с данными группы контроля при СКВ был достоверно увеличен уровень антител к антигенам S. aureus, S. epidermidis, E. coli и K. pneumoniae, в то время как к антигенам S. pneumoniae уровень антител был снижен, а к антигенам S. saprophyticus антитела у пациентов не выявлялись вообще. У больных ССД высокий уровень антител был отмечен к антигенам P. vulgaris и Salmonella. Наряду с этим уровень антител к Streptococcus spp. был снижен и не обнаруживались антитела к P. aeruginosa. У больных РА наблюдалось достоверное увеличение уровня антител к Streptococcus spp., E. coli и K. pneumoniae на фоне отсутствия антител к S. saprophyticus, S. pneumoniae, P. aeruginosa.
Таблица 1
Частота обнаружения IgG-антител к бактериальным антигенам у больных
ревматическими заболеваниями
|
Антигены |
Группы обследованных |
|||||||
|
Здоровые |
Больные СКВ |
Больные ССД |
Больные РА n = 24 |
|||||
|
Частота определения IgG антител |
||||||||
|
абс. |
% |
абс. |
% |
абс. |
% |
абс. |
% |
|
|
S. aureus |
6 |
18,7 |
8* |
57,1 |
9* |
75 |
6 |
25 |
|
S. epidermidis |
32 |
100 |
10* |
71,4 |
10 |
83,3 |
8* |
33,3 |
|
S. saprophyticus |
15 |
46,9 |
0* |
0 |
11* |
91,7 |
0* |
0 |
|
S. pneumoniae |
10 |
31,3 |
5 |
35,7 |
11* |
91,7 |
0 |
0 |
|
Streptococcus spp. |
17 |
53,1 |
12* |
85,7 |
4 |
33,3 |
16 |
66,7 |
|
M. luteus |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
Ps. aeruginosa |
5 |
15,6 |
2 |
14,3 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
E. coli |
8 |
25 |
10* |
71,4 |
10* |
83,3 |
24* |
100 |
|
P. vulgaris |
10 |
31,3 |
8 |
57,1 |
9* |
75 |
6 |
25 |
|
Salmonella (O-12) |
2 |
6,2 |
5* |
35,7 |
9* |
75 |
24* |
100 |
|
H. influenzae |
20 |
62,5 |
11 |
78,6 |
10 |
83,3 |
24* |
100 |
|
K. pneumoniae |
20 |
62,5 |
14* |
100 |
10 |
83,3 |
24* |
100 |
Примечание. * - достоверность различий в частоте определения IgG антител с группой сравнения (р < 0,05), данные χ2.
Таблица 2
Уровень IgG-антител к бактериальным антигенам у ревматических больных
|
Антигены бактерий |
Группы обследованных |
|||
|
Здоровые n = 32 |
Больные СКВ n = 14 |
Больные ССД n = 12 |
Больные РА n = 24 |
|
|
Уровень IgG антител, ед. опт. плотности, M ± s |
||||
|
S. aureus |
0,15 ± 0,04 |
0,21 ± 0,04* |
0,17 ± 0,10 |
0,17 ± 0,04 |
|
S. epidermidis |
0,21 ± 0,06 |
0,30 ± 0,08* |
0,23 ± 0,04 |
0,18 ± 0,06 |
|
S. saprophyticus |
0,20 ± 0,11 |
0* |
0,19 ± 0,05 |
0* |
|
S. pneumoniae |
0,13 ± 0,01 |
0,06 ± 0,03* |
0,14 ± 0,11 |
0* |
|
Streptococcus spp. |
0,13 ± 0,07 |
0,16 ± 0,08 |
0,03 ± 0,01* |
0,21 ± 0,08* |
|
M. luteus |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
Ps. aeruginosa |
0,05 ± 0,04 |
0,06 ± 0,05 |
0* |
0* |
|
E. coli |
0,07 ± 0,02 |
0,17± 0,08* |
0,09 ± 0,01 |
0,12 ± 0,02* |
|
P. vulgaris |
0,08 ± 0,03 |
0,10 ± 0,06 |
0,17 ± 0,09* |
0,08 ± 0,02 |
|
Salmonella (O-12) |
0,06 ± 0,04 |
0,08 ± 0,02 |
0,15 ± 0,01* |
0,08 ± 0,02 |
|
H. influenzae |
0,16 ± 0,07 |
0,18 ± 0,04 |
0,14 ± 0,05 |
0,22 ± 0,03* |
|
K. pneumoniae |
0,20 ± 0,06 |
0,30 ± 0,04* |
0,22 ± 0,08 |
0,28 ± 0,04* |
Примечание. * - достоверность различий в уровне IgG антител с группой сравнения (р < 0,05).
Таким образом, при ревматических заболеваниях существенно изменяется как частота выявления, так и уровень IgG-антител к различным бактериальным антигенам. Для СКВ, ССД и РА характерно повышение частоты обнаружения и уровня антител к условно-патогенным бактериям, что может быть обусловлено изменением микробиоценоза различных биотопов и колонизацией организма больных условно-патогенной микрофлорой [2]. В свою очередь повышение уровня IgG антител к бактериальным антигенам свидетельствует о снижении колонизационной резистентности индигенной микрофлоры и развитии дисбиоза. Следует отметить существенное увеличение уровня антител к K. pneumoniae при ревматических заболеваниях, достигающее диагностических значений и отражающее повышение активности гуморального иммунитета к условно-патогенным бактериям [3]. Высокий уровень IgG антител к нескольким видам условно-патогенных бактерий (S. aureus, E. coli, P. vulgaris, Streptococcus spp., K. pneumoniae) может свидетельствовать как о поликлональной стимуляции иммунного ответа при РЗ [3], так и об усилении иммунного ответа на возросшее антигенное воздействие условно-патогенных микроорганизмов в результате развития дисбактериоза. В то же время снижение уровня антител и даже их отсутствие (например к S. saprophyticus, S. pneumoniae, P. aeruginosa) у больных отдельными ревматическими заболеваниями может быть связано с уменьшением соответствующей антигенной нагрузки в результате развития выраженных дисбиотических нарушений в организме пациентов.
Наличие антител к антигенам условно-патогенных бактерий может также свидетельствовать о наличии носительства микробов в организме, а также о существовании явных или скрытых очагов бактериальной инфекции, отражать тригерную роль данных микроорганизмов при ревматических заболеваниях и их возможное участие в развитии коморбидных инфекций в условиях применения препаратов с иммуносупрессивным эффектом [1, 8].
Выводы
1 В сыворотке крови больных СКВ, РА, ССД достоверно повышена частота выявления IgG-антител к условно-патогенным бактериям, преимущественно к S.aureus, E.coli, Salmonella и K. pneumoniae.
2. При ревматических заболеваниях существенно возрастает уровнь IgG антител к антигенам S. aureus, S. epidermidis, E.coli и K. pneumonia у больных СКВ, Salmonella и P. vulgaris - ССД, Streptococcus spp., E. coli, H. influenza, K. pneumonia - у больных РА.
Список литературы
- Инфекции и ревматические болезни: взгляд на проблему в начале XXI века / Б.С. Белов, Р.М. Балабанова, С.Г. Манукян [и др.] // Вестник Российской АМН. - 2008. - №. 6. - С. 14-18.
- Микрофлора организма больных при системных заболеваниях соединительной ткани / В.А. Романов, Н.П. Шилкина, М.Ю. Гульнева [и др.] // Вестник Российской АМН. - 2008 - № 4. - С. 10-14.
- Ястребова, Н.Е. Характеристика скрининг-иммуноферментного теста для определения антител к условно-патогенным бактериям / Н.Е. Ястребова., Н.П. Ванеева., Н.В.Цветкова // Аллергия, астма и клинич. иммунол. - 1999. - № 9. - С. 148-151.
- Antibodies to Klebsiella O-antigens in patients with seronegative spondyloarthropaties / B. Nowak, V. Kowalski, B. Maczyrńska // Pol. Arch. Med. Wewn. - 2006. - Vol. 115, №3. - P. 203-209.
- Autoantibodies that bind glomeruli: cross-reactivity with bacterial antigen / I.A. Chowdhry, C. Kowal, J. Hardin [et al.] // Arthritis Rheum. - 2005. - Vol. 52, № 8. - P. 2403-2410.
- Ebringer A., Wilson C. HLA molecules, bacteria and autoimmunity // J. Med. Microbial. - 2000. - Vol. 49, №4. - P. 305-311.
- Elevated levels of IgM and IgA antibodies to Proteus mirabilis and IgM antibodies to Escherichia coli are associated with early rheumatoid factor (RF)-positive rheumatoid arthritis / M.M. Newkirk, R. Goldbach Mansky, B.W. Senior // Rheumatology (Oxford). - 2005. - Vol. 44, № 11. - P. 1433-1441.
- Infections and treatment of patients with rheumatic diseases / F. Atzeni, K. Bendtzen, F. Bobbio-Pallavicini [et al.] // Clin. Exp. Rheumatol. - 2008. - Vol. 26, № 48. - Р. 67-73.
- Rheumatoid arthritis patients have elevated antibodies to cross-reactive and non cross-reactive antigens from Proteus microbes / T. Rashid, K.S. Jayakumar, A. Binder // Clin. Exp. Rheumatol. - 2007. - Vol. 25, №2. - P. 259-267.
- Safdar N., Maki D. Risk factors for nosocomial colonization and infection with antimicrobial resistant S. aureus, Enterococcus spp., gram-negative bacilli, C. difficile and Can-
dida // Annals of Int. Med. - 2002. - №11. - P. 341-365.
Рецензенты:
Благов Николай Алексеевич, д.м.н., профессор, зав. кафедрой инфекционных болезней ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Росздрава»;
Шорманов Сергей Венедиктович, д.м.н., профессор кафедры патологической анатомии ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Росздрава».