Актуальность. В настоящее время широко применяется вакцинопрофилактика различных инфекционных заболеваний собак. Известно, что не всегда ветврачи получают нужный результат -стойкий иммунный ответ на введение вакцины. Часто вакцинируются животные с иммунодефицитами на фоне латентнопротекающих инфекционных заболеваний - в результате наступают по ствакцинальные осложнения.
Проблема профилактики хламидиоза у собак очень важна, так как в современных ассоциированных вакцинах для собак (эурикан, гексадог, нобивак, мультикан, биовак, дюрамун) штаммов хламидий нет. В результате проведенного эпизо-отологического анализа по г. Перми выявлено, что у каждой третей собаки, исследованной на хламидиоз методом иммуноферментного анализа или полимеразной цепной реакцией, приходит положительной ответ. С особой остротой эта проблема касается животных, участвующих в племенном разведении. Поэтому свой выбор мы остановили на поливалентной инактивированной вакцине «Хламикон». Ветеринарные врачи часто в практике во время иммунизации одномоментно с вакциной используют иммуномодуляторы, чтобы обеспечить более высокий уровень защиты против инфекций.
10% анандин инъекционный (1,2;5,6-ди-о-изопропиреден-N,N-диметил-аминопропил-диме-тиламинопропилкарбокридон) при введении в организм индуцирует образование эндогенных цитокинов: интерферона, ряда интерлейкинов, TNF-L, активирует клеточный и гуморальный иммунный ответ (Th1/Th2), усиливает функциональную активность Т- и В-лимфоцитов, нейтрофильный гранулоцитоз, активирует фагоцитоз.
Цель. Разработать оптимальную схему совместного использования анандина и вакцины «Хламикон» во время вакцинаторного процесса.
Свой выбор мы остановили на этом препарате, так как он широко применяется в ветеринарной практике, относительно недорогой, хорошо переносится животными.
Материалы и методы. Исследования проходили in vitro и in vivo. Эксперименты в системе in vivo выполнены на белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 грамм и собаках в возрасте от 1,5 до 7 лет. В опытах использовались клинически здоровые животные. Эксперимент проводили с добровольного согласия владельцев животных.
Вакцина «Хламикон» содержит штаммы Chlamydia psittaci K-1 и Chlamydia psittaci C-1, представляет собой слегка опалесцирующую желто-розовую жидкость с серовато-белым рыхлым осадком, легко разбивающимся при встряхивании в гомогенную взвесь. Вакцина выпускается в стеклянных ампулах по 1 мл. Производство «Вет-ЗвероЦентра» (Россия).
Экспериментальные животные содержались в стандартных условиях вивария и питомника собаководства. Все эксперименты выполнены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.
Животные (белые крысы, собаки) были разбиты на 4 группы: 1-я - контрольная, 2-я - иммунизация «Хламиконом», 3-я - иммунизация «Хламиконом» вместе с анандином, 4-я - 10% раствор анандина за 14 дней до иммунизации «Хламиконом» животным вводили внутримышечно в область бедра.
В течение вакцинального процесса за экспериментальными животными (собаками) проводилось динамическое клиническое наблюдение с явкой к ветеринарному врачу два раза в неделю.
Крысы также наблюдались ежедневно в условиях экспериментально-биологической клиники (вивария). Ежедневное наблюдение за животными включало в себя регистрацию поведения, внешнего вида животных, физиологических функций.
В каждой группе до начала эксперимента (исходный фон) и через 14 дней после иммунизации забирали плазму крови.
Показатели фагоцитоза оценивали методом В. Н. Каплина в качестве объектов фагоцитоза были взяты формалинизированные эритроциты бара на (фагоцитарное число, процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс).
Входе эксперимента изучали гематологические параметры (число эритроцитов, концентрацию гемоглобина) и лейкоформулу крови. Забор крови у крыс осуществляли из хвостовой вены.
У собак для оценки показателей фагоцитоза, гематологических параметров получали кровь из вены предплечья до начала эксперимента; во 2-ой, 3-ей и 4-ой группах через 30 мин. после иммунизации и спустя 14 дней.
Крыс выводили из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Во время проведения аутопсии забирали органы (селезенка, костный мозг, тимус, пейеровы бляшки, лимфатические узлы) для проведения гистологического исследования.
Материал для гистологических исследований фиксировали в 10 %-ном нейтральном формалине. Гистологические препараты готовили по стандартной методике с заливкой в парафине. Срезы толщиной 3 мкм получали на ротационном микротоме, окрашивали гемотоксилином и эозином, микроскопировали в проходящем свете светового микроскопа при увеличении 150 и 600.
В опытах in vitro определяли влияние анандина на фагоцитарную активность лейкоцитов в разных дозировках для выбора оптимальной рабочей дозы. В опытах использовали 4 разведения препаратов 10:1, рабочая доза, 1:10, 1:100 и контроль.
Результаты экспериментов подвергали статистической обработке с применением программного пакета Biostat. Характеризуя выборку, определяли среднее арифметическое и стандартное отклонение, сравнение выборок между собой проводили при помощи критериев Манна-Уитни и Уилкоксона.
Результаты исследования.
Результаты исследования эффективности вакцинации у крыс. В течение эксперимента не отмечено случаев гибели животных. Поведение, аппетит, физиологические функции у животных опытных групп не отличались от таковых у жи вотных группы контроля.
При анализе лабораторных показателей выявлены изменения в лейкоформуле крови, отмечено абсолютное увеличение лимфоцитов у экспериментальных животных группы 2 в 1,12 раз по сравнению с исходным фоном (P>0,05) и в 1,26 по сравнению с контролем (P>0,05). У животных группы 3 абсолютное количество лимфоцитов периферической крови увеличилось в 1,9 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,58 по сравнению с контролем (P<0,05). У животных 4 группы абсолютное количество лимфоцитов периферической крови возросло в 1,6 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,69 по сравнению с контролем (P<0,05).
Фагоцитарная активность лейкоцитов у крыс опытной группы 3 увеличилась в 1,28 раз по сравнению с исходным фоном и 1,4 раза по сравнению с контролем. Фагоцитарная активность лейкоцитов у опытной группы 4 увеличилось в 2,14 раз по сравнению с исходным фоном и в 1,48 раз по сравнению с контролем. У опытной группы 2 значимых изменений фагоцитарной активности лейкоцитов не отмечено.
При проведении гистологического исследования установлено, что у опытной группы 2 в органах иммуногенеза выявлено увеличение количества макрофагов и плазматических клеток по сравнению с контролем (макрофагально-плазмоцитарная реакция). Отмечался отек стромы. Наблюдалось появление в большом количестве бластных клеток. В селезенке наблюдалось увеличение удельного объема белой пульпы, увеличение светлых центров в фолликулах.
У животных опытной группы 3 также наблюдалось увеличение количества макрофагов, плазмоцитов и бластных клеток. При этом у животных опытной группы 4 макрофагально-плазмоцитарная реакция в органах иммугенеза была в значи тельной степени более выражена по сравнению с животными других опытных групп.
Таким образом, при использовании анандина во время вакцинации «Хламиконом» отмечено изменение неспецифической защиты иммунитета в периферической системе крови (увеличение абсолютного количества лимфоцитов и фагоцитарной активности лейкоцитов) и выраженная активность местной реакции (макрофагально-плазмацитарная реакция в органах иммуногенеза).
Результаты исследования эффективности вакцинации у собак.
При анализе лейкоформулы крови у собак опытной группы 2 отмечается изменение абсолютного количества лимфоцитов периферической крови в 1,18 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,22 по сравнению с контролем (P<0,05). При этом абсолютное количество лимфоцитов у животных опытной группы 3 увеличилось в 1,8 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 2,05 по сравнению с контролем (P<0,05). У животных опытной группы 4 абсолютное количество лимфоцитов увеличилось в 1,59 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,63 по сравнению с контролем (P<0,05).
Количество эритроцитов и гемоглобина у обследуемых групп находились в пределах нормы. Также не выявлено отличий по данным показателям между группами.
У опытной группы 2 значимых изменений фагоцитарной активности лейкоцитов не отмечено.
Фагоцитарная активность лейкоцитов у опытной группы 3 увеличилась в 1,4 раза по сравнению с исходным фоном и 1,3 раза по сравнению с контролем. В опытной группе 4 фагоцитарная активность лейкоцитов увеличилась в 2,12 раз по срав нению с исходным фоном и в 2,6 раз по сравнению с контролем.
В результате проведенных исследований с анандином было установлено: препарат в рекомендуемой производителем дозе значительно увеличивает фагоцитарную активность лейкоцитов у собак; при снижении дозы в 10 и 100 соответственно фагоцитарная активность лейкоцитов снижается, но все же выше, чем в группе контроля. Кроме стимулирующего действия на фагоцитоз 10% раствор анандина также усиливает функцию поглощения.
Следовательно, как при проведении эксперимента, так и в клинических наблюдениях было установлено, что при использовании анандина во время вакцинации «Хламиконом» происходит запуск не специфического ответа в периферической системе крови (увеличение абсолютного количества лимфоцитов и фагоцитарной активности лейкоцитов).
Таким образом, в экспериментальных исследованиях in vitro установлено, что введение анандина животным стимулирует фагоцитарную активность лейкоцитов. При использовании анандина необходимо очень внимательно относиться к расчету доз, так как неправильная дозировка препарата может привести к угнетению фагоцитарного звена иммунитета у животных.
В эксперименте in vivo эффективность применения анандина значительно возрастает при введении иммуномодулятора за 14 дней до вакцинации.