Введение
Фитопрепараты, предназначенные для лечения заболеваний кожи, как правило, включают в себя растительные экстракты, содержащие комплекс биологически активных веществ, которые в большинстве случаев нетоксичны, не оказывают раздражающего действия, не вызывают аллергических реакций. Особый интерес представляют растительные экстракты, проявляющие активность в отношении штаммов микроорганизмов, устойчивых к некоторым антибиотикам и синтетическим лекарственным препаратам [2].
Лекарственные препараты хлорофиллипта находят широкое применение в медицине (стоматологии, хирургии, гинекологии, ЛОР-терапии, дерматологии). Проведенные ранее исследования по изучению химического состава «Хлорофиллипта, экстракта густого» показали, что основными действующими веществами, проявляющими антимикробную активность в отношении антибиотикоустойчивых форм стафилококков, являются фенолоальдегиды (эуглобали) - терпеновые производные, обладающие бактерицидным действием [3].
Учитывая предполагаемую область применения и действия разрабатываемого лекарственного препарата (противовоспалительное, антибактериальное действие при заболеваниях кожи), целью данного исследования являлось определение антимикробной активности гелевых композиций с «Хлорофиллиптом, экстрактом густым» на разных основах.
Экспериментальная часть
Изучение антимикробной активности гелевых композиций с «Хлорофиллиптом, экстрактом густым» проводили в соответствии с требованиями ГФ XII изд., ч.1. (in vitro методом диффузии в агар) [1]. В качестве носителей для геля были изучены современные гидрофильные, гидрофильно-липофильные и липофильные основы, способные обеспечивать легкое нанесение, смываемость и одновременно исключающие раздражение кожи.
Ранее проведенные биофармацевтические исследования позволили остановить выбор на четырех составах гелей, которые использовали для изучения антимикробной активности [4].
Технология состава №1. Приготовление композиции №1 основывается на набухании основообразователя (редкосшитый сополимер акриловой кислоты и аллиловых эфиров пентаэритрита - «Карбопол 940» (США) (ТУ 2219-005-290593342-97) на воде очищенной. Композицию после набухания полимера загущали 0,8 мл гидроксида натрия 10 %. «Хлорофиллипт, экстракт густой» распускали в масле льняном и добавляли к полученной основе, диспергировали до образования однородной гелеобразной массы.
Технология состава №2. В качестве основообразователя использовали метиловый эфир целлюлозы (МЦ-ТУ 6-05-1857-78). МЦ растворяется в холодной воде, однако растворение протекает быстрее и легче, если предварительно основу обработать при тщательном перемешивании горячей водой (t = 80-900 °С), взятой в количестве 1/2 части от требуемого объема. После набухания МЦ добавляли холодную воду до получения однородного геля. Фитоэкстракт также распускали в масле льняном и добавляли к полученной основе, диспергировали до образования однородной гелеобразной массы.
Технология состава №3. Навеску аэросила равномерно распределяли по поверхности масла льняного и оставляли на 1,5-2,0 часа при комнатной температуре для набухания с периодическим перемешиванием. После образования прозрачной гелевой основы добавляли «Хлорофиллипт, экстракт густой» и гомогенизировали до получения однородной массы.
Технология состава №4. При изготовлении эмульсионной основы эмульгатор Т-2 сплавляли с вазелином на водяной бане и при постоянном перемешивании приливали горячую воду очищенную (t = 80-90 °С). Основу перемешивали до получения однородной массы и оставляли при комнатной температуре для созревания. После охлаждения основы вводили экстракт, предварительно распустив его в масле льняном. Диспергировали до получения однородной массы.
Технология состава №5. В мини-реактор последовательно загружали при включенной мешалке полиэтиленоксид-400 (ПЭО-400), «Хлорофиллипт, экстракт густой», твин-80 и поливинилпироллидон (ПВП), перемешивали при нагревании до получения однородной массы изумрудно-зеленого цвета. В реактор тонкой струйкой добавляли раствор солодки экстракта густого в воде очищенной. Смесь гомогенизировали озвучиванием в ультразвуковой ванне до получения эмульсии зеленовато-коричневого цвета.
Технология состава №6. В мини-реактор последовательно загружали Empilan KM 25 F, «Хлорофиллипт, экстракт густой» и твин-80. Перемешивали при нагревании до получения прозрачной однородной массы изумрудно-зеленого цвета. В реактор приливали тонкой струйкой раствор солодки экстракта густого в воде очищенной и тщательно перемешивали до получения гомогенной эмульсии зеленовато-коричневого цвета.
При изучении антимикробной активности для большей достоверности получаемых результатов испытание с каждой культурой производили параллельно на трех чашках. Засеянные чашки оставляли при комнатной температуре на 1-2 часа, а затем на 16-18 часов помещали в термостат при 36 ± 1°С вверх дном, чтобы избежать попадания конденсационной воды на поверхность посевов. Антибактериальное вещество геля диффундировало в агар, формируя вокруг диска зону угнетения роста чувствительных к нему бактерий, четко выделяющуюся на фоне сплошного микробного роста. Величина зоны угнетения определяла степень чувствительности микроба к антибактериальной смеси. Измерение зоны угнетения производили с помощью миллиметровой бумаги с точностью до 0,1 мм.
Между степенью чувствительности микроба к антибактериальному компоненту и размером диаметра зоны угнетения используются следующие соотношения: менее 10 мм - слабая чувствительность;
10 мм - умеренная чувствительность; более 10 мм - высокая чувствительность.
Результаты оценивали путем измерения диаметра зон задержки роста микроорганизмов вокруг «колодца» с исследуемыми образцами, включая диаметр самого колодца. Результаты представлены в таблице.
Высокую чувствительность по отношению к штамм-культурам проявляют составы №1, № 3, № 6, которые проявляют выраженную антимикробную активность в отношении стафилококковых тест-культур и протея (Staphylococcus aureus (209), Staphylococcus aureus (Макаров), Staphylococcus aureus (Type), Staphylococcus epidermidis Wood-46, Proteus vulgaris).
Вывод. В результате исследования определена антимикробная активность лекарственных препаратов с фитоэкстрактом. Высокий антимикробный эффект в отношении микроорганизмов оказывали олеогель и спрей №6.
Результаты определения антимикробной активности гелевых композиций
с «Хлорофиллиптом, экстрактом густым»
|
Номер состава |
Диаметр зоны задержки роста тест-культур |
||||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
|
|
№1 |
16 |
14 |
18 |
16 |
13 |
11 |
14 |
12 |
10 |
15 |
18 |
|
№2 |
9 |
8 |
10 |
11 |
15 |
14 |
15 |
11 |
15 |
10 |
13 |
|
№3 |
29 |
15 |
20 |
17 |
13 |
12 |
11 |
9 |
18 |
15 |
20 |
|
№4 |
10 |
13 |
12 |
10 |
5 |
8 |
16 |
10 |
8 |
9 |
14 |
|
№5 |
13 |
12 |
12 |
13 |
6 |
9 |
9 |
13 |
12 |
12 |
15 |
|
№6 |
17 |
15 |
16 |
16 |
5 |
7 |
10 |
16 |
17 |
18 |
15 |
Список литературы
- Государственная фармакопея. - XII изд. Ч. 1. - М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2007. - 697 с.
- Зеликсон Ю.И. Перспективы рынка дерматологических препаратов / Ю.И. Зеликсон, Э.А. Коржавых // Новая аптека. Эффективное управление. - 2007. - №4. - С. 77‒78.
- Зилфикаров И.Н. Технология и стандартизация хлорофиллипта / И.Н. Зилфикаров, О.В. Северцева, С.А. Абейдулина // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения. Фитофарм 2006: материалы Х Междунар. съезда. - СПб., 2006. - С. 109‒111.
- Теунова Е.А. Технологические исследования по обоснованию состава геля хлорофиллипта / Е.А. Теунова, З.Д. Хаджиева // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. - Пятигорск, 2010. - Вып. 65. - С. 232-233.