Инфекция вирусами папилломы человека достаточно широко распространена среди населения и у подавляющего большинства женщин проходит бессимптомно. Этиологию неопластических заболеваний шейки матки в настоящее время многие связывают с инфицированием ее тканей вирусом папилломы [5]. Апоптоз (программируемая гибель клетки) при интегративной вирусной инфекции высокого онкогенного риска, такой, как папилломавирусная инфекция (ВПЧ), является одним из защитных механизмов [4]. Существует несколько механизмов запуска апоптоза, в том числе через рецепторы к иммуноцитокинам (ФНО-α) и через специфические «рецепторы смерти». Семейство ФНО, кроме ФНО-α и β, включает Fas (СD95), FasL, TRAIL, СD40L, CD27L, OX30L, DR4 (TRAIL-R1), DR5 (TRAIL-R2) и др. [1,3]. ФНО-α - один из основных цитокинов, способных оказывать прямое повреждающее действие на клетки-мишени, а также является индуктором апоптоза и воспринимается рецепторами, по структуре напоминающими Fas [1]. При некоторых хронических вирусных инфекциях выявлены изменения уровня ФНО-α, коррелирующие с тяжестью течения заболевания [2]. Целью исследования было определить уровень системных и локальных показателей ФНО-α, sFas, и TRAIL у больных с папилломавирусной инфекцией разного онкогенного риска в динамике инфекционного процесса на фоне проводимой стандартной терапии.
Материалы и методы
Под наблюдением находились пациенты (94 человека в возрасте от 19 до 44 лет, 16 мужчин, 78 женщин) с папилломавирусной инфекцией человека (ВПЧ) в сыворотке крови и отделяемом половых органов, у которых исследовали уровень ФНО-α, sFas и TRAIL. Группа подразделялась на 2 п / гр.: а) с ВПЧ высокого онкогенного риска 16,18 типов - 54 человека (муж. - 5; жен. - 49); б) с ВПЧ низкого онкогенного риска 10,13 типов - 40 человек (муж. - 11; жен. - 29). У пациентов ВПЧ-инфекция подтверждалась ПЦР-анализом. В группу контроля вошли 30 здоровых доноров, не имеющих антител к ВПЧ-16,18, ВПЧ-10,13 типам и другим хроническим вирусным инфекциям. Оценку содержания сывороточного и локального растворимого Fas-рецептора (sFas) проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием стандартной тест-системы human sAPO-1 / Fas ELISA BMS245 (Bender MedSystems, USA). Уровень TRAIL измеряли с использованием тест-системы human TRAIL ELISA (Biosource, USA). Исследование уровня ФНО-α проводили с помощью тест-системы «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург, Россия). Все пробы исследовались в динамике (в течение 30 дней): с момента поступления в стационар и спустя месяц после проводимой комплексной терапии (с подключением ациклических нуклеозидов и иммуномодуляторов - препараты интерферонов, индукторы интерферонов). Статистическую обработку проводили стандартными методами.
Результаты
Для оценки активности апоптоза были исследованы ФНО-зависимые лиганды TRAIL, sFas, ФНО-α у пациентов с папилломавирусной инфекцией разного онкогенного риска. При поступлении в стационар у пациентов с ВПЧ-16, 18 типа высокого онкогенного риска уровень ФНО-α в отделяемом половых органов увеличен на 15,4± 0,5 % у женщин и на 13,3± 0,5 % у мужчин. На 30-е сутки терапии уровень ФНО-α в локальном биологическом материале нормализуется. Существенное повышение концентрации - на 94,4± 8,5 % и отсутствие динамики на фоне терапии наблюдалось в этой же п / группе пациентов (ВПЧ-16, 18 типа) в сыворотке крови. У женщин и мужчин с ВПЧ-10, 13 типа низкого онкогенного риска локальные показатели ФНО-α сопоставимы с показателями донорской группы как при поступлении в стационар, так и после 30 дней лечения. Системные показатели ФНО-α у пациентов с низким онкогенным риском при поступлении выше на 111,1±10,5 %, а через 30 суток на 105,6± 4,5 % относительно контроля. Таким образом, локальный уровень ФНО-α практически не изменен (p>0,05), что свидетельствует, во-первых, об отсутствии воспаления и, во-вторых, может служить одной из причин снижения активности апоптоза, так как в рецепторзависимом пути запуска апоптоза задействована группа ФНО-рецепторов. Уровень sFas понижен на 25,0±0,5 % при поступлении, на 20,0±2,5 % после терапии в вагинальном отделяемом у пациентов с ВПЧ - 16,18. В уретральном отделяемом sFasl в момент рецидива снижен на 30,7±2,5 % и на 23,0±0,5 % после лечения. Системный показатель sFasl ниже контроля на 21,6±1,5 % и понижается на фоне терапии на 24,0±0,5 %. Положительная динамика локального sFasL наблюдается у женщин с ВПЧ-10,13: ниже на 25,5±0,5 % при поступлении, после терапии стал выше на 10,5±1,5 % относительно донорской группы (p<0,05). Тогда как системный уровень sFasl и локальный у мужчин равен уровню донорской группы до и после лечения. Сниженное количество sFas приводит к уменьшению возможности клетки запустить апоптоз, что увеличивает жизнеспособность вируса. Локальные и системные концентрации TRAIL у больных с ВПЧ высокого онкогенного риска существенно снижены (на 58-64 %, на 55 %, соответственно) (р<0,001) и не нормализуются, несмотря на проведенную терапию. У больных с ВПЧ низкого онкогенного риска как локальные, так и системные показатели до и после лечения в пределах нормы. Отсутствие TRAIL-рецепторного апоптоза может быть одной из причин онкогенеза.
Вывод
Среди изученных групп пациентов наиболее снижена возможность организма элиминировать интегративный вирус у пациентов с ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18 типа), что выявлено по сниженному уровню sFasL и TRAIL. Уровень sFas и TRAIL коррелирует с тяжестью течения инфекционного процесса, что позволяет использовать их в качестве диагностического критерия при скрытых инфекциях.
Работа выполнена при поддержке гранта НК-193П Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009- 2013 годы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Барышников. А. Ю. и др. Иммунологические проблемы апоптоза. - М.:УРСС, 2002.- 327 с.
- Хараева З. Ф., Аппаева Б. Т. Маркеры апоптической активности при герпетической инфекции // Цитокины и воспаление.-2008. - Т. 7. - № 3. - С. 34-35.
- Bodmer J. TRAIL receptor-2 signals apoptosis through FADD and caspase-8 // Nature Cell Biology.- 2000.- V. 2.- P. 241- 243.
- Hardwick J. M. Virus-induced apoptosis // Adv. Pharmacol.-1997.- V. 41.- P. 295- 336.
- Kim C. Y. Selection of human cervical epithelial cells that possess reduced apoptotic potential to low-oxygen conditions / C. Y. Kim, M. H. Tsai, C. Osmanian et al // Cancer Res.- 1997.- V. 57, № 19.- P. 4200-4204.