Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,222

ЭТИЛМЕТИЛГИДРОКСИПИРИДИНА СУКЦИНАТ И МОРФОЛИНИЙ 3-МЕТИЛ-1,2,4,-ТРИАЗОЛИЛ-5-ТИОАЦЕТАТ: ВЛИЯНИЕ НА ПРОТЕОЛИЗ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ КРЫС

Ходос О.А. 1
1 Витебский государственный медицинский университет
Проведено исследование влияния лекарственных средств этилметилгидроксипиридина сукцинат и морфолиний 3-метил-1, 2, 4,-триазолил-5-тиоацетат на интенсивность протеолиза в сыворотке крови крыс при хронической интоксикации этанолом. Модель хронической алкогольной интоксикации воспроизводилась путем предоставления экспериментальным животным 15 % раствора этанола ad libitum в качестве единственного источника питья. Длительность потребления животными раствора этанола составляла 29 недель. Активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов изучали спектрофотометрически. Исследования проводились с использованием хромогенного субстрата N-α-бензоил-D, L-аргинин-пара-нитроанилида (БАПНА). Показано, что этанол при длительном употреблении приводит к нарушению протеиназо-ингибиторного баланса в сыворотке крови. Введение лекарственных средств этилметилгидроксипиридина сукцинат и морфолиний 3-метил-1, 2, 4,-триазолил-5-тиоацетат способствует нормализации протеиназо-ингибиторного баланса сыворотки крови экспериментальных животных.
этанол
этилметилгидроксипиридина сукцинат
морфолиний 3-метил-1
2
4
-триазолил-5-тиоацетат
протеолиз
сыворотка крови
1. Буров Ю.В., Ведерникова Н.Н. Нейрохимия и фармакология алкоголизма. – М.: Медицина, 1985. – 240 с.
2. Высокогорский В.Е., Арзамасова О.А., Тютикова Д.М. Уровень гликопротеинов в сыворотке крови и ткани печени крыс, перенесших внутриутробную алкогольную интоксикацию // Сибирский медицинский журнал. – 2011. – № 2. – С. 41–44.
3. Захарова Н.В. Взаимосвязь динамики показателей антиоксидантной системы и перекисного окисления липидов при лечении болезни Легга-Кальве-Пертеса с применением мексидола // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2011. – № 4 (80). – С. 69–72.
4. Егоров Е.А., Давыдова Н.Г., Романенко И.А. Мексидол в комплексном лечении глаукомы // Клиническая офтальмология. – 2011. – № 3. – С. 107–111.
5. Карягина И.Ю. Зарембский Р.А., Балябина М.Д. Использование метода комплексного определения активности трипсиноподобных протеиназ, α1-антитрипсина и α2-макроглобулина в гастроэнторологической клинике // Лабораторное дело. – 1991. – № 2. – С. 10–13.
6. Хватов В.Б., Белова Т.А. Ускоренный метод определения основных ингибиторов протеиназ в плазме крови человека: Метод. Рекомендации. – М., 1981. – 27 с.
7. Чурикова М.С. Коррекция функциональной активности печени, перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у пациенток с воспалительными заболеваниями органов малого таза // Медицинский альманах. – 2012. – № 5 (24). – С. 74–77.
8. Ходос О.А., Гидранович Л.Г., Сачек М.М. Действие этилметилгидроксипиридина сукцината и тиотриазолина на протеолиз в эксперименте in vitro // Вестник Витебского государственного медицинского университета. – 2011. – Т.10, № 4. – С. 168–172.
9. Erlanger B.F., Kokowsky N., Cohen M. The preparation and properties of two new chromogenic substrates of trypsin // Arch Biochem. Biophys. – 1961. – Vol. 95, № 2. – Р. 271–278.
10. Lenney J.F. Thermostable endogenous inhibitors of cathepsins B and H // Eur J Biochem. – 1979. – Vol. 101, № 1. – Р. 153–161.

Активация протеолиза является причиной развития многих патологических процессов [2]. При очевидной важности данной проблемы выбор лекарственных средств, способных оказывать воздействие на систему протеолиза, в настоящее время весьма ограничен. Этилметилгидроксипиридина сукцинат и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат широко используются при различных патологических процессах, в том числе и при интоксикации алкоголем. В настоящее время доказана антиоксидантная активность данных лекарственных средств [3, 4, 7], но их действие на протеолиз не изучено.

Цель работы – исследовать влияние этилметилгидроксипиридина сукцината и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетата на протеолиз при хронической алкогольной интоксикации.

Материалы и методы исследования

Для проведения экспериментов использовали половозрелых самцов крыс линии Wistar средней массой 360 г. Животные содержались в стандартных условиях специализированного вивария НИЛ УО «Витебский государственный медицинский университет». Для эксперимента отбирали животных, предрасположенных к добровольному потреблению алкоголя. Разделение животных по степени мотивации потребления алкоголя осуществляли с помощью теста «этанолового наркоза» путем однократного внутрибрюшинного введения 25 % раствора этанола [1]. Модель хронической алкогольной интоксикации воспроизводилась путем предоставления животным 15 % раствора этанола ad libitum в качестве единственного источника питья [1]. Животным контрольных групп в качестве источника питья предоставляли водопроводную воду. Длительность потребления животными раствора этанола составляла 29 недель. Введение лекарственных средств опытным группам крыс осуществлялось в хвостовую вену в следующих дозах: этилметилгидроксипиридина сукцинат – 10 мг/кг массы тела животного, морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат – 50 мг/кг массы тела животного. Контрольным группам животных внутривенно вводили эквиобъемное количество физиологического раствора. Интенсивность протеолиза в сыворотке крови экспериментальных животных изучали через 1, 3 и 7 суток после отмены этанола.

Исследование интенсивности протеолиза в сыворотке крови крыс осуществляли с использованием высокостабильного в растворе, низкомолекулярного хромогенного субстрата N-α-бензоил-D,L-аргинин-пара-нитроанилида (БАПНА). Для определения общей протеолитической активности сыворотки крови применяли метод, описанный Erlanger B. и др. [9]. При изучении активности α1-протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина сыворотки крови использовали методики, предложенные Хватовым Т.А. и соавт. и Карягиной И.Ю. и соавт. [5, 6]. При исследовании активности эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в сыворотке крови применяли метод Lenney J.F. [10].

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью непараметрических методов (тесты Манна – Уитни и Краскела – Уоллиса, применялась поправка Бонферрони).

Результаты исследования и их обсуждение

При хронической алкогольной интоксикации установлено снижение активности α1-протеиназного ингибитора в течение 7 суток после отмены этанола (на 11,44 %, р = 0,0027 и 9,49 %, р = 0,0027 через 3 и 7 суток соответственно) (таблица). Аналогичные изменения были отмечены и для α2-макроглобулина во все периоды наблюдений: снижение его активности на 1 сутки составило 52,63 % (р = 0,0044), 3 сутки – на 42,98 % (р = 0,0027), 7 сутки – 48,24 % (р = 0,0027). В то время как общая протеолитическая активность сыворотки крови и активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ не подвергались изменениям. Снижение активности α1-протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина может быть обусловлено повышенной потребностью ингибиторов вследствие активации протеолиза. Таким образом, с учетом того, что при хронической алкогольной интоксикации имеет место нарушение протеиназо-ингибиторного баланса, данное состояние может служить моделью для того, чтобы оценить способность этилметилгидроксипиридина сукцината и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетата оказывать влияние на систему протеолиза.

Активность протеолитических ферментов и их ингибиторов в сыворотке крови

Показатель

Контрольная группа (n = 7)

1 сутки после отмены этанола (n = 6)

1 сутки после отмены этанола + этилметил-гидроксипиридина сукцинат (n = 6)

1 сутки после отмены этанола + морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат (n = 6)

3 суток после отмены этанола (n = 6)

3 суток после отмены этанола + этилметил-гидроксипиридина сукцинат (n = 6)

3 суток после отмены этанола + морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат (n = 6)

7 суток после отмены этанола (n = 6)

7 суток после отмены этанола + этилметил-гидроксипиридина сукцинат (n = 6)

7 суток после отмены этанола + морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат (n = 6)

Общая протеолитическая активность сыворотки крови, нмоль/с·л.

23,37

37,39

34,80

50,125

23,63

21,56

26,750

20,78

31,17

34,023

(19,93–33,65)

(30,63–45,41)

(15,72-60,46)

(23,484–71,745)

(14,25 – 41,50)

(14,85-37,78)

(18,345–33,770)

(11,83–40,28)

(18,08-45,98)

(16,431–52,999)

Активность α1-протеиназного ингибитора сыворотки крови, мкмоль/с·л.

5,72

5,43

5,35

5,241

5,07*

5,21*

5,110*

5,18*

5,33

5,016*

(5,47–5,80)

(5,31–5,57)

(5,26-5,57)

(4,908–5,536)

(4,97–5,20)

(4,93-5,39)

(4,982–5,400)

(4,79–5,31)

(4,89-5,59)

(4,723–5,329)

Активность α2-макроглобулина, мкмоль/с·л.

0,23

0,11*

0,12*

0,093*

0,13*

0,11*

0,151

0,12*

0,21

0,176

(0,18–0,27)

(0,09–0,12)

(0,09-0,17)

(0,056–0,175)

(0,10–0,15)

(0,08-0,16)

(0,106–0,181)

(0,09–0,14)

(0,11-0,26)

(0,109–0,226)

Активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ, отн. ед.

4030,73

4089,83

3894,79

3701,298

4036,64

3770,69

3889,610

4143,03

3766,23

4162,337

(3791,39–168,76)

(3884,31–4423,02)

(3642,99-4122,97)

(3236,857–4200,370)

(3843,40–4206,24)

(3512,04-4163,29)

(3720,967–4092,884)

(3576,209–4477,39)

(3672,88-3850,93)

(3759,055–4409,775)

Примечания:

1. Данные представлены в виде медианы (–95...+95 %) – доверительный интервал.

2. * – статистически значимые различия показателей по отношению к контролю.

Этилметилгидроксипиридина сукцинат нормализовал активность α1-протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина до уровня контроля к 7 суткам после отмены этанола (р = 0,0222, р = 0,5203).

При использовании морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетата активность α1-протеиназного ингибитора оставалась сниженной (к 3 суткам на 10,67 %, р = 0,0082 и к 7 суткам на 12,32 %, р = 0,0027). Активность α2-макроглобулина на фоне введения морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетата нормализовалась до контрольных значений на 3 и 7 сутки (р = 0,0124 и р = 0,1160 соответственно).

Ни этилметилгидроксипиридина сукцинат, ни морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат не оказали влияния на общую протеолитическую активность сыворотки крови и активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ.

В сыворотке крови крыс контрольной группы этилметилгидроксипиридина сукцинат и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат не вызывали изменений в системе протеолиза. При моделировании процесса in vitro нами установлено, что внесение в инкубационную смесь этилметилгидроксипиридина сукцината и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетата не оказало влияния на активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов в сыворотке крови [8]. Полученные результаты могут свидетельствовать о том, что этилметилгидроксипиридина сукцинат и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат не обладают прямым эффектом на изучаемые показатели in vitro, что не исключает возможности регуляции активности протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов in vivo опосредованным путем.

Возможный механизм влияния этилметилгидроксипиридина сукцината на протеолиз может быть связан с тем, что данное лекарственное средство ингибирует процессы перекисного окисления липидов, уменьшает уровень оксида азота в тканях, а также увеличивает активность антиоксидантных ферментов (в том числе супероксиддисмутазы), что способствует нормализации процессов свободно-радикального окисления и восстановлению функционирования липидного слоя биологических мембран, ионных каналов, рецепторов, мембранно-связанных ферментов, что оказывает модулирующее влияние на активность ферментов и может способствовать восстановлению протеиназо-ингибиторного баланса в тканях.

Морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат снижает гиперпродукцию лактата и уменьшает явления некомпенсированного ацидоза, увеличивает активность антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутаза, каталаза), что также способствует сохранению структурно-функциональной целостности биологических мембран и угнетению процессов окислительной модификации белковых структур рецепторов, ионных каналов и ферментов. С другой стороны, морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат предупреждает обратимую и необратимую модификацию метиониновых и цистеиновых фрагментов белков, снижает интенсивность процесса накопления свободных аминокислот, увеличивает уровень содержания РНК и стимулирует адаптивный синтез белков, что также может способствовать восстановлению нормального физиологического баланса активности протеиназ и их эндогенных ингибиторов.

Таким образом, этилметилгидроксипиридина сукцинат и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат однонаправлено изменяют активность α1-протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина и способствуют нормализации протеиназо-ингибиторного баланса в сыворотке крови крыс в модели хронической алкогольной интоксикации. Несмотря на то, что при введении морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолин-5-тиоацетата через 7 суток после отмены этанола не отмечено достижения уровня контроля, при этом степень выраженности изменений не отличалась при применении этилметилгидроксипиридина сукцината и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетата.

Выводы

1. Этанол при длительном употреблении приводит к нарушению протеиназо-ингибиторного баланса в сыворотке крови.

2. Этилметилгидроксипиридина сукцинат и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолил-5-тиоацетат способствуют нормализации протеиназо-ингибиторного баланса сыворотки крови экспериментальных животных.

Рецензенты:

Питкевич Э.С., д.м.н., профессор, зав. кафедрой лечебной физкультуры и спортивной медицины УО «Витебский государственный университет имени П.М. Машерова», г. Витебск;

Осочук С.С., д.м.н., зав. НИЛ УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», г. Витебск.

Работа поступила в редакцию 01.04.2014.


Библиографическая ссылка

Ходос О.А. ЭТИЛМЕТИЛГИДРОКСИПИРИДИНА СУКЦИНАТ И МОРФОЛИНИЙ 3-МЕТИЛ-1,2,4,-ТРИАЗОЛИЛ-5-ТИОАЦЕТАТ: ВЛИЯНИЕ НА ПРОТЕОЛИЗ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ КРЫС // Фундаментальные исследования. – 2014. – № 5-6. – С. 1229-1232;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=34073 (дата обращения: 20.02.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252