Лектины - белки с сахаросвязывающей активностью. Они обнаружены на всех уровнях развития живых организмов. Свойство лектинов проявлять митогенную и иммуномодулирующую активность широко используется в экспериментальных исследованиях.
Целью работы явилось изучение влияния лектина клещевины (ЛК) на митотическую активность мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) в культурах периферической крови здоровых доноров.
МЛ выделяли из стабилизированной гепарином периферической крови 20 здоровых доноров. Кровь, разведенную средой 199, центрифугировали в градиенте плотности фиколла-урографина. МЛ, образовавшие интерфазное кольцо, собирали пипеткой и трехкратно отмывали в среде 199.
Оценку жизнеспособности и митотической активности МЛ проводили с использованием морфологического теста (реакции бласттрансформации лимфоцитов - РБТЛ) традиционным способом в стерильных условиях. Среду с клеточной взвесью вносили в лунки культурального планшета по 1 мл в лунку, затем добавляли митоген - ЛК в концентрации от 0.005 до 0,02 мкг/мл. После 72-часовой инкубации из осадка клеточной суспензии готовили мазки и окрашивали их азуром II и эозином по Романовскому-Гимза. Подсчитывали количество бластных клеток на 500 клеточных форм. Результат выражали как индекс стимуляции (ИС), представляющий собой отношение процента бластных клеток в стимулированной митогеном культуре лимфоцитов к проценту спонтанных бластных форм в контроле без его добавления.
Оценка пролиферативной активности МЛ крови человека при культивировании с ЛК показала, что дозы от 0,005 до 0,015 мг/мл на порядок повышали содержание бластных форм по сравнению с контролем и происходил экспоненциальный рост ИС при действии ЛК в данной концентрации. Жизнеспособность МЛ оставалась в пределах 95-99%. Однако повышение дозы ЛК до 0,02 мг/мл приводило к падению числа бластных форм и снижению ИС почти в 3 раза.
Нами выявлено, что только в определённых концентрациях ЛК оказывает митогенное действие на МЛ крови человека. Доказано, что это происходит в результате экспрессии генов интерлейкина-2 и его рецептора, что служит проявлением активности Т-клеток и предпосылкой их вступления в митоз. Ранее также было установлено, что превышение оптимальной концентрации лектина клещевины в культурах мононуклеарных лейкоцитов человека даже в незначительных пределах ведёт к резкому падению митотической способности лимфоцитов. Вероятно, введение более высоких доз ЛК в культуры МЛ периферической крови человека приводит к чрезмерной активации иммунокомпетентных клеток и повышению секреции цитокинов, особенно фактора некроза опухолей, который в высоких концентрациях вызывает апоптоз клеток.
Таким образом, активизация митотической активности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека в культурах может происходить только под влиянием оптимальных доз лектина клещевины.
Библиографическая ссылка
Лебединская О.В., Ахматова Н.К., Киселевский М.В., Лебединская Е.А., Шехмаметьев Р.М., Мелехин С.В. ВЛИЯНИЕ ЛЕКТИНА КЛЕЩЕВИНЫ НА МИТОТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ В КУЛЬТУРАХ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ // Фундаментальные исследования. – 2006. – № 1. – С. 29-29;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=4608 (дата обращения: 18.04.2024).