Для наиболее полного изучения гистотопографии лимфатического русла, а так же взаимоотношения его с кровеносными сосудами, из различных участков органов, и из регионарных лимфоузлов готовились гистологические срезы. Гистологический материал заливался в парафиновые блоки по методикам, описанным в руководствах Б. Ромейс (1954), В.Г. Елисеевым с соавт. (1967), Г.А.Меркуловым (1969), О.В.Волковой и Ю.К.Елецким (1982).
Из полученных блоков готовились продольные, поперечные и тангенциальные срезы толщиной от 3 до 7 мкм на санном микротоме МС-2. Готовые срезы окрашивались по Ван-Гизон, гематоксилин-эозином, на элластику по Вейгерту, азаном по Гейденгайну и серебром по методу Бильшовского-Грос.
Полученные гистологические препараты изучались под световым микроскопом "Биолам-М".
Для детального изучения архитектоники, гистотопографии и количества всех структурных элементов стенки лимфангионов интра- и экстраорганных лимфососудов и капсулы регионарных лимфоузлов, из них изготавливались тотальные препараты по безинъекционной методике, предложенной А.В. Борисовым (1973).
Для приготовления тотального препарата из лимфатического сосуда, вначале, под бинокулярной лупой МБС-2 отпрепаровывался с помощью глазных скальпеля, пинцета и ножниц и препаровальных игл нужный лимфососуд и фиксировался в 7-10% растворе формалина в течении 12-24 часов. Затем, под бинокулярной лупой сосуд очищался от соединительной ткани и рассекался продольно (мелкие сосуды, посткапилляры и капилляры не рассекались). После этого, препарат дополнительно фиксировался, промывался в проточной воде в течение 20-30 минут и окрашивался галлоцианин-хромовыми квасцами при температуре 37° С в течение 24-72 часов. Затем, препарат промывался в водопроводной воде, проводился через батарею спиртов возрастающей концентрации (по 20-30 минут в каждом), просветлялся в метиловом эфире салициловой кислоты и проводился через четыре порции ксилола (по 5-10 мин в каждой порции). Готовый препарат расправлялся на предметном стекле эндотелием кверху и заключался в полистерол.
По аналогичной схеме готовились тотальные препараты из капсулы лимфатических узлов.
На полученных препаратах определяли ориентацию миоцитов и производили подсчет их количества с помощью окулярной сетки С.Б. Стефанова (1974) в поле зрения микроскопа "Биолам-М" при окуляре 7 и объективе 40.
Для электронномикроскопического исследования отбирались кусочки лимфатических сосудов и слизистой оболочки органов овец размером 1х1мм, сразу после убоя животного. Затем материал фиксировался в 1% растворе четырехокиси осмия на фосфатном буфере с добавлением 4,5% сахарозы (рН=7,2), дегидрировался в этиловых спиртах возрастающей концентрации и заключался в эпон. После этого на ультрамикротоме LKB-8800, получали полутонкие (толщина 1мкм) и ультратонкие (толщина 35-45нм) срезы. Полутонкие срезы окрашивали толлуидиновым синим, заключали в полистерол и изучали под световым микроскопом. Ультратонкие срезы контрастировали в насыщенном водном растворе уранилацетата, окрашивали цитратом свинца по Рейнолдсу и изучали в электронном микроскопе JOEL-1010 при ускоряющем напряжении 100кВ.
Все полученные в ходе исследования данные протоколировались, обрабатывались вариационно-статистическим методом Е.К.Меркурьева (1964) с помощью ЭВМ.
Библиографическая ссылка
Складнева Е.Ю., Медкова А.Е., Новицкий М.В., Кудашова Е.А., Романов В.М., Назарова Е.М. БЕЗИНЪЕКЦИОННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛИМФАТИЧЕСКОГО РУСЛА НЕКОТОРЫХ ОРГАНОВ ОВЕЦ // Фундаментальные исследования. – 2004. – № 2. – С. 155-156;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=4091 (дата обращения: 19.04.2024).