По данным ВОЗ, осложнения артериальной гипертензии вызывают 9,4 млн смертельных случаев в мире ежегодно [2]. При этом нарушения функции тромбоцитов служит причиной тромботических осложнений, связанных с гипертензией [3, 6].
Крысы линии SHR являются адекватной экспериментальной моделью для изучения механизмов формирования артериальной гипертензии и поиска новых лекарственных средств ее коррекции [1, 5]. Анализ литературы показал, что в настоящее время отсутствуют исследования, в которых изучена последовательная динамика изменения количественных показателей тромбоцитов у крыс с артериальной гипертензией по сравнению с нормотензивными животными от начала возрастания артериального давления до развития стойкой артериальной гипертензии.
В связи с этим целью нашего исследования являлось изучение количественных показателей и морфологических параметров тромбоцитов у линии SHR последовательно в процессе формирования артериальной гипертензии.
Материалы и методы исследования
Эксперименты проведены на 40 крысах-самцах линии SHR (spontaneously hypertensive rats) и 40 крысах-самцах линии Wistar-Kyoto (WKY) категории SPF, полученных из вивария ИБХ РАН, г. Пущино (Сертификат здоровья животных от 04.09.2014). В виварии НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга животные содержались в неполной барьерной системе при следующих параметрах окружающей среды: температура – + 22 ± 2 °С, относительная влажность – 50 ± 20 %, воздухообмен 12–15 объемов помещения в час, световой режим – 12:12 ч. Содержание животных и уход за ними осуществлялись в соответствии с правилами, изложенными в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Протокол исследования утвержден комиссией по контролю за содержанием и использованием лабораторных животных НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга (протокол № 72052014). Животные каждой линии были разделены по возрасту на 8 возрастных групп, соответствующих 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 неделям жизни, по 5 крыс в каждой группе.
Артериальное давление (АД) у крыс регистрировали неинвазивным методом на хвосте с помощью системы измерения артериального давления у мелких животных NIBP200A («Biopac Systems, Inc.», США). Данная система предназначена для измерения АД в реальном времени у бодрствующих животных. Запись и обработка данных производилась на компьютере с помощью программы «AcqKnowledge 4.2 for MP150».
Общее количество тромбоцитов (PLT, 109/л крови), средний объем тромбоцитов (MPV, fl) показатель анизоцитоза тромбоцитов (PDW) и тромбокрит (PCT) определяли с помощью автоматического гематологического анализатора «Mythic vet 18» (PZ CORMAY S.A.). Кровь забирали из насечек на хвосте в капиллярные пробирки «Microvette Sarstedt» (Германия) с K3EDTA.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ «Statistica 8.0». Данные представлены в виде M ± m, где M – среднее значение, m – стандартная ошибка среднего значения. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрические критерии Краскела-Уоллиса и Манна-Уитни.
Результаты исследования и их обсуждение
АД у крыс линии WKY в период с 5-й по 12-ю недели жизни оставалось стабильным: средние значения систолического артериального давления (САД) в эти сроки составляло 126 ± 2 мм рт. ст., диастолического артериального давления (ДАД) – 95 ± 2 мм рт. ст. Наблюдаемые в течение данного временного периода колебания АД не являлись значимыми, что подтверждается результатами статистического анализа (p = 0,08) (рисунок).
У крыс линии SHR была выявлена этапность формирования артериальной гипертензии. У 5-недельных крыс линии SHR АД не отличалось от показателей крыс WKY того же возраста. Начиная с 6-й недели жизни, наблюдалось увеличение АД у крыс линии SHR по сравнению с нормотензивными животными. Вместе с тем между 6 и 8 неделями жизни у крыс SHR, несмотря на повышенные величины АД, оно оставалось стабильным, что подтверждается отсутствием достоверных различий в этот период (p = 0,25). Среднее значение САД составляло 162 ± 3 мм рт. ст., ДАД – 133 ± 2 мм рт. ст. Начиная с 9-й недели жизни у крыс SHR наблюдалось прогрессивное повышение АД. К 12-й неделе жизни величина САД составляла 211 ± 7 мм рт. ст., ДАД – 171 ± 6 мм рт. ст.
Таким образом, подъем артериального давления у крыс линии SHR наблюдался с 6-й недели жизни и до конца исследования и происходил не монотонно, а ступенчато. Мониторинг артериального давления с 5-й по 12-ю неделю жизни у животных линии SHR позволил выделить два этапа повышения артериального давления: с 5-й по 6-ю неделю и с 9-й по 10-ю неделю.
В течение всего периода наблюдения общее количество тромбоцитов крови у крыс линии SHR статистически значимо не отличалось от значений у крыс линии WKY за исключением 9 недели (таблица). Тромбокрит у животных линии SHR достоверно не отличался от значений у крыс WKY в течение всего периода исследования. На 5-ю неделю жизни показатель анизоцитоза тромбоцитов у животных линии SHR и крыс линии WKY достоверно не отличался. Начиная с 6-й недели и до конца всего периода исследования наблюдалось статистически значимое увеличение PDW на 21–67 % у животных линии SHR по сравнению со значениями у крыс WKY. Повышение показателя анизоцитоза тромбоцитов у животных линии SHR совпадает с первым этапом возрастания артериального давления. Средний объем тромбоцитов у крыс линии SHR в период с 5-й по 8-ю недели жизни достоверно не отличался от значений у нормотензивных животных. С 9-й по 12-ю недели жизни было выявлено статистически значимое увеличение MPV у крыс линии SHR на 12–17 % по сравнению с крысами линии WKY. Достоверное увеличение среднего объема тромбоцитов у спонтанно гипертензивных животных относительно нормотензивных крыс линии WKY совпадало со вторым этапом повышения артериального давления и сохранялось до конца исследования (9–12 недели).
Измерение среднего объема тромбоцитов и показателя анизоцитоза является простым и легким способом оценки функции тромбоцитов [4, 7, 8]. Повышение MCV свидетельствует о наличии в кровотоке крупных тромбоцитов. По сравнению с более мелкими клетками, крупные тромбоциты содержат больше гранул, активнее агрегируют [4, 7, 8]. Повышение показателя анизоцитоза тромбоцитов также связано с увеличением функциональной активности тромбоцитов. E. Vagdatli и соавторы [8] связывают увеличение PDW у пациентов, имеющих достоверно высокую агрегацию тромбоцитов, с образованием у активированных клеток псевдоподий и изменением их размеров.
Таким образом, у крыс линии SHR выявлено, что изменение морфологических параметров, отражающих функциональную активность тромбоцитов связано с этапами повышения артериального давления. На первом этапе повышения артериального давления у крыс линии SHR наблюдалось увеличение показателя анизоцитоза тромбоцитов по сравнению с крысами WKY, что может свидетельствовать о появлении некоторого количества активированных тромбоцитов. Начиная со второго периода повышения артериального давления наряду с высоким уровнем анизоцитоза тромбоцитов у крыс линии SHR также происходило увеличение среднего объема тромбоцитов по сравнению с данным показателем у крыс линии WKY.
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (соглашение № 14-25-00017).
Динамика общего количества тромбоцитов (PLT, 109/л крови), тромбокрита (PCT), среднего объема тромбоцитов (MPV, fl) и показателя анизоцитоза тромбоцитов (PDW) у нормотензивных крыс линии WKY и спонтанно гипертензивных крыс линии SHR
Возраст |
Группа |
PLT, 109/л крови |
PCT |
MPV, fl |
PDW |
5-я неделя |
WKY |
879,0 ± 86,9 |
0,55 ± 0,10 |
6,14 ± 0,49 |
21,36 ± 1,55 |
SHR |
765,6 ± 81,6 |
0,50 ± 0,08 |
6,80 ± 0,29 |
26,50 ± 2,23 |
|
6-я неделя |
WKY |
934,1 ± 57,6 |
0,52 ± 0,04 |
5,60 ± 0,29 |
20,33 ± 0,91 |
SHR |
960,7 ± 37,7 |
0,54 ± 0,02 |
5,64 ± 0,07 |
24,56 ± 0,90* |
|
7-я неделя |
WKY |
1058,8 ± 70,8 |
0,57 ± 0,04 |
6,99 ± 0,36 |
16,85 ± 1,00 |
SHR |
894,8 ± 73,5 |
0,56 ± 0,03 |
5,85 ± 0,07 |
28,22 ± 2,14* |
|
8-я неделя |
WKY |
885,2 ± 33,9 |
0,54 ± 0,04 |
6,01 ± 0,24 |
19,01 ± 1,02 |
SHR |
823,9 ± 39,9 |
0,46 ± 0,02 |
5,67 ± 0,15 |
26,59 ± 1,41* |
|
9-я неделя |
WKY |
815,5 ± 24,26 |
0,44 ± 0,01 |
5,38 ± 0,10 |
23,38 ± 0,58 |
SHR |
645,3 ± 30,93* |
0,38 ± 0,02 |
6,02 ± 0,08* |
36,39 ± 2,10* |
|
10-я неделя |
WKY |
844,1 ± 65,6 |
0,43 ± 0,03 |
5,09 ± 0,05 |
25,92 ± 1,14 |
SHR |
726,0 ± 54,1 |
0,38 ± 0,05 |
5,81 ± 0,17* |
36,16 ± 2,00* |
|
11-я неделя |
WKY |
861,7 ± 62,1 |
0,43 ± 0,03 |
4,98 ± 0,03 |
25,35 ± 0,86 |
SHR |
757,2 ± 54,4 |
0,42 ± 0,03 |
5,63 ± 0,07* |
36,72 ± 1,68* |
|
12-я неделя |
WKY |
763,5 ± 42,8 |
0,41 ± 0,02 |
5,25 ± 0,11 |
25,89 ± 2,11 |
SHR |
618,8 ± 83,7 |
0,38 ± 0,05 |
6,12 ± 0,19* |
36,96 ± 2,84* |
Примечание. * – p < 0,05 по сравнению со значениями у крыс линии WKY того же возраста.
А)
Б)
Систолическое (А) и диастолическое (В) артериальное давление у нормотензивных крыс линии WKY и спонтанно гипертензивных крыс линии SHR в период с 5-й по 12-ю неделю. Примечание. * – p < 0,05 по сравнению со значениями у крыс линии WKY того же возраста
Рецензенты:
Суслов Н.И., д.м.н., профессор, заведующий лабораторией фитофармакологии и специального питания, НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга, г. Томск;
Плотникова Т.М., д.б.н., профессор, профессор кафедры фармакологии, ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России, г. Томск.
Библиографическая ссылка
Сидехменова А.В., Алиев О.И., Анищенко А.М., Шаманаев А.Ю., Федорова Е.П. ТРОМБОЦИТЫ У КРЫС ЛИНИИ SHR В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ФОРМИРОВАНИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ // Фундаментальные исследования. – 2015. – № 1-7. – С. 1439-1442;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=37987 (дата обращения: 17.08.2024).