Важная роль в возникновении и прогрессировании эндометриоза принадлежит иммунной системе [4, 7, 15, 16]. Согласно современным взглядам, противоопухолевый иммунитет представляет собой комплекс иммунных реакций, протекающих при тесном кооперативном взаимодействии между Т- и В-лимфоцитами, естественными киллерами (ЕК) и макрофагами, которое регулируется посредством выработки клетками иммунной системы медиаторов межклеточных взаимодействий – цитокинов [2, 3, 10, 12]. Цитокины образуют сложную и многообразную, но в то же время единую систему, обеспечивающую процессы межклеточной кооперации, роста и дифференцировки лимфоидных клеток, ангиогенеза и нейроиммунноэндокринных взаимодействий [2, 3, 10, 11].
Особый интерес представляет изучение особенностей иммунитета в местах локализации эндометриоидных очагов – в яичниках и перитонеальной жидкости [1, 14, 18, 19].
В то же время при возникновении и прогрессировании эндометриоза в ПЖ больных увеличивается количество макрофагов и снижается количество CD3, CD4 (Т-хелперов), CD16 (естественных киллеров) и CD25 (активированных Т-лимфоцитов) клеток. Увеличение активности перитонеальных иммунокомпетентных клеток сопровождается продукцией ими факторов, обладающих не только цитотоксическим действием на клетки опухоли, но и активизирующих процессы ангиогенеза, а также стимулирующих адгезию клеток эндометрия к мезотелию брюшины.
Подобные нарушения иммунитета имеются при недифференцированной дисплазии соединительной ткани (НДСТ), вследствие чего при сочетании данных патологий возможно прогрессирование процесса. В настоящее время имеется множество работ, свидетельствующих о роли НДСТ в развитии гинекологических заболеваний [5, 6, 8, 17]. Однако в доступной литературе нами не найдена информация об особенностях изменений иммунитета при сочетании ЭКЯ и НДСТ.
Цель исследования – выявить особенности изменений местного иммунитета у больных эндометриоидными кистами яичников на фоне НДСТ.
Материалы и методы исследования
В исследование включены 100 женщин в возрасте от 18 до 40 лет, которые были разделены на несколько групп:
I основную группу составили 35 больных ЭКЯ, у которых было выявлено более 6-ти внешних фенотипических признаков НДСТ;
II группу сравнения составили 35 больных ЭКЯ с количеством признаков НДСТ 6 и менее.
В контрольную группу вошли 30 женщин репродуктивного возраста без НДСТ и сопутствующей гинекологической патологии, с двухфазным менструальным циклом, поступивших для выполнения хирургической стерилизации.
Всем пациенткам для исследования внешнего фенотипа применяли модифицированную фенотипическую карту, включающую 63 показателя [13]. Всем пациенткам проведено клинико-лабораторное и инструментальное исследование, лечебно-диагностическая лапароскопия. Диагноз ЭКЯ подтвержден гистологически.
Объем иммунологического исследования включал изучение относительного и абсолютного количества основных субпопуляций иммунокомпетентных клеток в ПЖ (лимфоциты, нейтрофилы, мононуклеарные фагоциты, CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD25 – лимфоциты), а также изучение уровня IL1b, IL2, IL4, IL6, IL8, TNFa, IFNg в нативной перитонеальной жидкости (ПЖ) пациенток исследуемых групп.
Определение состава субпопуляций МНК в ПЖ выполняли методом проточной цитометрии. На первом этапе проводили обработку клеток. Для этого к восьми образцам ПЖ объемом по 100 мкл каждый добавляли растворы антител, конъюгированных с флуоресциинизотиоционатом (FITC) и фикоэритрином (PE) («Caltag Laboratories», США) на проточном цитометре Bio Rad («Brute-HS», США).
Концентрацию IL1b, IL2, IL4, IL6, IL8, TNFa, IFNg в ПЖ определяли методом твердофазового иммуноферментного анализа (ИФА) на планшетном фотометре «Labsystems iEMS Reader MF» (Финляндия) с использованием наборов «ВекторБест» (Россия) согласно прилагаемым к наборам методикам.
Статистическая обработка полученных данных проводилась на компьютере PENTIUM IV с использованием программы «Statistica 6.0» [9]. В соответствии с целями и задачами исследования, а также с учетом специфики анализируемых переменных нами выполнялся расчет элементарных статистик (средние значения (M), ошибки средних (m), расчет долей (%), стандартной ошибки доли (N)); сравнение качественных параметров в исследуемых группах с помощью непараметрических методов χ2, критерия Фишера с поправкой Йейтса; сравнение количественных показателей с помощью непараметрического критерия Манна – Утни. Критерием статистической достоверности получаемых выводов считали общепринятую в медицине величину р < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
При анализе данных было установлено, что в ПЖ больных основной группы, по сравнению с пациентками без НДСТ и здоровыми женщинами, наблюдалось достоверно большее относительное (62,35 ± 1,59, 56,58 ± 1,43 и 37,82 ± 2,25 % соответственно) и абсолютное (1,62 ± 0,13•109/л, 1,54 ± 1,43•109/л и 0,61 ± 0,10•109/л соответственно) количество макрофагов, в то время как процентное содержание лимфоцитов (20,95 ± 1,39, 24,62 ± 1,10 и 43,40 ± 1,92 % соответственно) снижалось. Необходимо отметить, что снижение относительного числа лимфоцитов в ПЖ больных ЭКЯ как основной группы, так и группы сравнения не сопровождалось уменьшением их абсолютного количества, что связано с увеличением общей «клеточности» ПЖ при данном заболевании (табл. 1).
При изучении субпопуляционного состава МНК ПЖ было установлено достоверное снижение абсолютного количества CD4-лимфоцитов (0,22 ± 0,02•109/л, 0,28 ± 0,02•109/л и 0,37 ± 0,02•109/л соответственно), а также процентного (12,41 ± 0,95, 15,69 ± 0,91 и 24,00 ± 2,00 %, соответственно) и абсолютного (0,06 ± 0,01•109/л, 0,09 ± 0,01•109/л и 0,17 ± 0,01•109/л соответственно) количества CD16 и процентного (17,92 ± 1,34, 22,55 ± 1,43 и 32,10 ± 3,70 % соответственно) и абсолютного (0,10 ± 0,01•109/л, 0,15 ± 0,01•109/л и 0,22 ± 0,03•109/л соответственно) количества CD25-лимфоцитов в ПЖ больных ЭКЯ с НДСТ, чем у пациенток группы сравнения и здоровых женщин (табл. 2).
Относительное и абсолютное количество CD8- и CD19-лимфоцитов в ПЖ больных ЭКЯ не претерпевало существенных изменений вне зависимости от наличия НДСТ (табл. 2).
В ПЖ больных ЭКЯ с НДСТ по сравнению с больными группы сравнения и здоровыми женщинами, увеличивается уровень IL1β (519,40 ± 16,96 пкг/мл, 475,20 ± 13,30 пкг/мл и 131,60 ± 7,18 пкг/мл соответственно), TNFα (58,29 ± 4,38 пкг/мл, 46,44 ± 3,61 пкг/мл и 8,09 ± 1,32 пкг/мл соответственно), IL6 (98,09 ± 6,07 пкг/мл, 80,33 ± 6,06 пкг/мл и 44,52 ± 2,75 пкг/мл соответственно) и IL8 (274,30 ± 11,82 пкг/мл, 227,20 ± 19,88 пкг/мл и 23,30 ± 2,70 пкг/мл соответственно), снижается уровень IL2 (18,57 ± 1,16 пкг/мл, 22,28 ± 1,26 пкг/мл и 29,70 ± 1,60 пкг/мл соответственно) и IFNγ (50,18 ± 4,43 пкг/мл, 68,60 ± 5,41 пкг/мл и 121,30 ± 10,80 пкг/мл, соответственно), а уровень IL4 не изменяется (табл. 3).
Таблица 1
Популяционный состав иммунокомпетентных клеток ПЖ больных ЭКЯ в зависимости от наличия НДСТ
Показатель |
Здоровые женщины (n = 30) |
Больные ЭКЯ |
|
Есть НДСТ (n = 35) |
Нет НДСТ (n = 35) |
||
Номер группы |
1 |
2 |
3 |
M ± m* |
|||
Лейкоциты, •109/л |
1,60 ± 0,12 |
2,55 ± 0,15 |
2,60 ± 0,16 |
Достоверность отличий** |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,820 |
|
Нейтрофилы, % |
14,60 ± 0,75 |
13,24 ± 0,36 |
13,42 ± 0,26 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,107 P1-3 = 0,142 |
P2-3 = 0,686 |
|
Нейтрофилы, •109/л |
0,23 ± 0,01 |
0,29 ± 0,03 |
0,30 ± 0,04 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,062 P1-3 = 0,094 |
P2-3 = 0,842 |
|
Макрофаги, % |
37,82 ± 2,25 |
62,35 ± 1,59 |
56,58 ± 1,43 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,009 |
|
Макрофаги, •109/л |
0,61 ± 0,10 |
1,62 ± 0,13 |
1,54 ± 0,11 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,001 |
|
Лимфоциты, % |
43,40 ± 1,92 |
20,95 ± 1,39 |
24,62 ± 1,10 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,042 |
|
Лимфоциты, •109/л |
0,69 ± 0,12 |
0,54 ± 0,04 |
0,63 ± 0,05 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,240 P1-3 = 0,646 |
P2-3 = 0,164 |
Примечания:
* M – среднее значение; m – среднее отклонение;
** – различия между группами достоверны при p < 0,05, критерий Манна – Уитни.
Таблица 2
Субпопуляционный состав МНК ПЖ больных ЭКЯ в зависимости от наличия НДСТ
Показатель |
Здоровые женщины (n = 30) |
Больные ЭКЯ |
|
Есть НДСТ (n = 35) |
Нет НДСТ (n = 35) |
||
1 |
2 |
3 |
4 |
Номер группы |
1 |
2 |
3 |
M ± m* |
|||
CD3, % |
72,50 ± 5,50 |
57,03 ± 1,38 |
57,16 ± 1,43 |
Достоверность отличий ** |
P1-2 = 0,008 P1-3 = 0,009 |
P2-3 = 0,948 |
|
CD3, •109/л |
0,50 ± 0,07 |
0,31 ± 0,02 |
0,35 ± 0,02 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,011 P1-3 = 0,043 |
P2-3 = 0,162 |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
CD4, % |
53,00 ± 1,00 |
41,34 ± 1,00 |
42,12 ± 1,11 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,603 |
|
CD4, •109/л |
0,37 ± 0,02 |
0,22 ± 0,02 |
0,28 ± 0,02 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,038 |
|
CD8, % |
25,50 ± 1,50 |
26,84 ± 1,19 |
27,79 ± 1,19 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,486 P1-3 = 0,236 |
P2-3 = 0,574 |
|
CD8, •109/л |
0,18 ± 0,02 |
0,14 ± 0,01 |
0,18 ± 0,01 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,078 P1-3 = 1,000 |
P2-3 = 0,078 |
|
CD16, % |
24,00 ± 2,00 |
12,41 ± 0,95 |
15,69 ± 0,91 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,015 |
|
CD16, •109/л |
0,17 ± 0,01 |
0,06 ± 0,01 |
0,09 ± 0,01 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,038 |
|
CD19, % |
23,00 ± 2,00 |
21,09 ± 0,86 |
20,25 ± 0,78 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,383 P1-3 = 0,205 |
P2-3 = 0,472 |
|
CD19, •109/л |
0,16 ± 0,04 |
0,12 ± 0,01 |
0,13 ± 0,01 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,335 P1-3 = 0,469 |
P2-3 = 0,482 |
|
CD25, % |
32,10 ± 3,70 |
17,92 ± 1,34 |
22,55 ± 1,43 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,019 |
P2-3 = 0,021 |
|
CD25, •109/л |
0,22 ± 0,03 |
0,10 ± 0,01 |
0,15 ± 0,01 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,030 |
P2-3 = 0,001 |
Примечания:
* M – среднее значение, m – среднее отклонение;
** – различия между группами достоверны при p < 0,05, критерий Манна – Уитни.
Таблица 3
Уровень цитокинов в ПЖ больных ЭКЯ в зависимости от наличия НДСТ
Показатель |
Здоровые женщины (n = 30) |
Больные ЭКЯ |
|
Есть НДСТ (n = 35) |
Нет НДСТ (n = 35) |
||
1 |
2 |
3 |
4 |
Номер группы |
1 |
2 |
3 |
M ± m* |
|||
IL1β, пкг/мл |
131,60 ± 7,18 |
519,40 ± 16,96 |
475,20 ± 13,30 |
Достоверность отличий** |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,043 |
|
TNFα, пкг/мл |
8,09 ± 1,32 |
58,29 ± 4,38 |
46,44 ± 3,61 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,041 |
|
IFNγ, пкг/мл |
121,30 ± 10,80 |
50,18 ± 4,43 |
68,60 ± 5,41 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,010 |
|
IL2, пкг/мл |
29,70 ± 1,60 |
18,57 ± 1,16 |
22,28 ± 1,26 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,034 |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
IL4, пкг/мл |
60,10 ± 5,10 |
55,94 ± 3,79 |
65,90 ± 4,15 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,515 P1-3 = 0,381 |
P2-3 = 0,081 |
|
IL6, пкг/мл |
44,52 ± 2,75 |
98,09 ± 6,07 |
80,33 ± 6,06 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,042 |
|
IL8, пкг/мл |
23,30 ± 2,70 |
274,30 ± 11,82 |
227,20 ± 19,88 |
Достоверность отличий |
P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 |
P2-3 = 0,046 |
Примечания:
* M – среднее значение, m – среднее отклонение;
** – различия между группами достоверны при p < 0,05, критерий Манна – Уитни.
Заключение
Резюмируя полученные данные, можно утверждать, что на уровне перитонеального микроокружения у больных ЭКЯ развивается иммунологическая дисфункция, которая характеризуется увеличением активности макрофагов и снижением активности Т-лимфоцитов и ЕК. Обозначенные изменения усугубляются у больных ЭКЯ в сочетании с НДСТ, на что указывает уменьшение в ПЖ количества CD4-лимфоцитов в 1,3 раза по сравнению с пациентками без НДСТ и в 1,7 раза по сравнению со здоровыми женщинами, CD16-лимфоцитов – в 1,5 и в 2,8 раза соответственно, и CD25-лимфоцитов – в 1,5 и в 2,2 раза соответственно, а также увеличение количества макрофагов в 2,7 раза по сравнению со здоровыми женщинами.
Изменение состава МНК ПЖ больных ЭКЯ при НДСТ, по сравнению с больными ЭКЯ без НДСТ и здоровыми женщинами, закономерно сопровождается увеличением уровня провоспалительных цитокинов, обладающих проангиогенным действием: содержание IL1β увеличивается в 1,1 и 3,9 раза соответственно, TNFα – в 1,3 и 7,25 раз соответственно, IL6 – в 1,2 и 2,2 раз соответственно, IL8 – в 1,2 и 11,7 раз соответственно. Кроме того, при ЭКЯ в сочетании с НДСТ в нативной ПЖ наблюдается снижение уровня противоопухолевых цитокинов IL2 в 1,2 раза и IFNγ в 1,36 раз по сравнению с пациентками без НДСТ. Подобные изменения в цитокиновом составе ПЖ, наряду со снижением количества иммунокомпетентных клеток, обладающих противоопухолевой цитотоксичностью, определяют увеличение проангиогенной и снижение противоопухолевой активности, что может являться одной из предпосылок для увеличения частоты рецидивов ЭКЯ при наличии у пациенток сопутствующей НДСТ. Полученные данные требуют дальнейшего изучения.
Рецензенты:
Рыжков В.В., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой акушерства и гинекологии ФПДО, Ставропольский государственный медицинский университет, г. Ставрополь;
Чарышкин А.Л., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой факультетской хирургии, ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет», г. Ульяновск.
Работа поступила в редакцию 04.09.2014.
Библиографическая ссылка
Алексанова Е.М., Аксененко В.А., Пилавова О.М. ИЗМЕНЕНИЯ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА У ПАЦИЕНТОК С ЭНДОМЕТРИОИДНЫМИ КИСТАМИ ЯИЧНИКОВ НА ФОНЕ НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ ДИСПЛАЗИИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ // Фундаментальные исследования. – 2014. – № 10-2. – С. 245-250;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=35325 (дата обращения: 10.12.2024).