РМЖ – рак молочной железы;
ЦОК – циркулирующие опухолевые клетки.
Общеизвестно, что тактика лечения РМЖ, как и любого другого онкологического процесса, определяется степенью распространенности опухолевого процесса, т.е. стадией заболевания. Стандартными клиническими показателями являются размер первичной опухоли, состояние регионарных лимфатических узлов и наличие или отсутствие отдаленных метастазов. Однако, по данным литературы приблизительно 25 % пациенток с первично локализованным РМЖ без поражения регионарных лимфоузлов выявляются отдаленные метастазы после успешно проведенного лечения. Тогда как почти 30 % больных с первоначальными метастазами в подмышечные лимфоузлы наблюдаются без признаков рецидива заболевания в течение 5–10 лет [11; 7]. Таким образом, для назначения адекватной терапии рака молочной железы на различных стадиях заболевания и на разных этапах лечения, в том числе после удаления основной опухоли, необходим анализ, который позволил бы выявить единичные циркулирующие в крови опухолевые клетки.
Технология анализа в системе Cell Search™ основана на иммуномагнитном обогащении клеток при помощи металлических наночастиц, покрытых полимерным слоем, содержащим антитела к EpCAM молекулам (маркеры эпителиальных клеток), и иммунофлуоресцентной идентификации собранных в магнитном поле клеток. Процесс анализа состоит из нескольких этапов. Первый этап проводится на системе пробоподготовки – CellTracks®AutoPrep®. Максимальная разрешающая способность системы – детекция одной клетки в 7,5 мл крови. Уникальность предлагаемой технологии состоит в том, что система не только детализирует результаты мониторинга пациентов с метастазирующими формами рака без каких-либо инвазивных и болезненных процедур (все тесты проводятся на цельной крови), что позволяет проводить такие тесты регулярно, определяет генетические и фенотипические изменения опухоли, но и делает возможным количественную оценку единичных метастазных клеток после того, как основная опухоль была удалена.
Определение ЦОК является новым независимым прогностическим фактором прогноза РМЖ [3; 6; 10]. Прогностическая ценность выявления ЦОК была подтверждена в ряде исследований [5; 15]. Особо значимая корреляция с прогнозом заболевания была отмечена при РМЖ [12; 13]. При этом проведенные исследования показали информативность метода как при метастатическом РМЖ [4] так и при неметастатическом [9]. При этом частота выявления ЦОК у больных РМЖ без отдаленных метастазов колеблется от 10 до 60 % при различных методиках Cell Search (Veridex, Raritan, NJ) [2; 13; 14], и даже при ранних РМЖ (Т1-Т2) составляет 31 % [8]. Несмотря на то, что диагностически значимым уровнем является 5 клеток на 7,5 мл, проведенные исследования показали, что наличие даже одной ЦОК ухудшает показатели бессобытийной и общей выживаемости больных неметастатическим РМЖ. Более того, показано, что увеличение количества ЦОК до 3 клеток и более прогрессивно ухудшает эти показатели. При этом никакой корреляции количества ЦОК с поражением подкрыльцовых лимфоузлов выявлено не было [9]. Собственные исследования показали, что по всей вероятности при начальных стадиях заболевания порог позитивности определения циркулирующих опухолевых клеток, в частности при раке молочной железы, может быть снижен до 3–4 клеток, что в дальнейшем может служить маркером опухолевой прогрессии и потребует более тщательного наблюдения больных [1].
Материалы и методы исследования
В исследование были включены 13 пациенток, получавших лечение в ФГБУ «РНИОИ» Минздрава РФ по поводу верифицированного рака молочной железы различных стадий. У 11 пациенток анализ выполнялся на этапе оперативного лечения (IIa-IIIa стадии). Этим больным анализ выполнялся дважды: до операции и на первые сутки после. У других 2 пациенток детекция ЦОК проводилась однократно до начала неоадъювантной полихимиотерапии после проведенного нерадикального хирургического лечения в других медицинских учреждениях. Отсутствие отдаленных метастазов у всех пациенток, которым выполнялось исследование, подтверждалось при СРКТ органов грудной клетки, брюшной полости, малого таза и головного мозга. Все исследования выполнялись после письменного согласия больных на передачу биологического материала и обработку персональных данных. Кровь в объёме 8–10 мл забиралась в пробирки СellSave Preservative Tube, содержащие антикоагулянт ЭДТА, а также реагент для сохранения жизнеспособности опухолевых клеток. Для отделения клеток крови и опухолевых от плазмы кровь смешивалась с рабочим буфером из набора реагентов CellSearch® СТС kit и центрифугировалась при ускорении 800g в течение 10 минут. После этого образцы переносились в аппарат CellTracks® AutoPrep® System, который в автоматическом режиме, удаляя плазму крови и форменные элементы, иммуномагнитно обогащал образец микрочастицами железа, покрытыми антителами к маркёрам адгезии эпителиальных клеток EpCAM, CD45 и цитокератинам 8, 18, 19. Качество работы системы оценивали с использованием стандартного контроля СТС control kit. Материал сканировался в анализаторе CellTracks® Analyzer II®. С учетом морфологических характеристик и экспрессии маркеров регистрировались циркулирующие опухолевые клетки. Общее число выявленных опухолевых клеток являлось конечным результатом.
Результаты исследования и их обсуждение
Среди пациенток, у которых детекция ЦОК определялась на этапе хирургического лечения, у 8 женщин степень распространенности заболевания соответствовала стадии T2N0M0, у 1 – стадии T2N1M0 и у 2 – стадии T2N2M0. Кроме одной пациентки с центральным расположением опухоли у всех больных локализация – верхне-наружный квадрант. До операции у двух больных выявлены ЦОК, что составило 18,1 % от общего числа. Обе пациентки имели стадию T2N0M0 (IIa), в возрасте 66 и 73 лет находились в постменопаузе и локализацию опухоли в верхне-наружном квадранте. У одной пациентки была инфильтрирующая карцинома, а у другой сочетание инфильтрирующей карциномы и тубулярного рака. При этом, если у одной пациентки уровень ЦОК – 1 клетка оставался таковым и после операции, то у второй он увеличился с 2 клеток до 4. У обеих пациенток, которым детекция ЦОК проводилась до начала неоадъювантной полихимиотерапии после нерадикального оперативного лечения, первоначальная локализация опухоли была на границе наружных квадрантов и гистологическая структура соответствовала инфильтрирующей карциноме. Одна пациентка 34 лет имела стадию заболевания IIa, T2N0M0, тройной негативный рак. У нее определялось 2 ЦОК. У второй больной 49 лет, находящейся в перименопаузе и имеющей стадию заболевания T3N2M0 определялись 3 ЦОК.
Несмотря на небольшое количество наблюдений, наше исследование показывает, что ЦОК могут определяться у больных РМЖ и не имеющих признаков генерализации. Полученные нами результаты согласуются с заявленными ранее в литературе. Интересным, на наш взгляд, является повышение уровня ЦОК у одной больной через сутки после операции по сравнению с исходным уровнем. Это подтверждает тот факт, что операция сама по себе может способствовать выбросу опухолевых клеток в кровеносное русло. Об этом же свидетельствует и обнаружение ЦОК у больных после нерадикально выполненных оперативных вмешательств. Конечно, необходимы дальнейшие исследования, которые бы показали прогностическую значимость повышения уровня ЦОК после операции. Возможно, что именно факт детекции ЦОК у этих пациенток будет играть важную роль для выбора тактики дальнейшего лечения.
Рецензенты:
Каймакчи О.Ю., д.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, г. Ростов-на-Дону;
Шихлярова А.И., д.б.н., профессор, главный научный сотрудник Южного научного центра РАН, г. Ростов-на-Дону.
Работа поступила в редакцию 06.03.2014.
Библиографическая ссылка
Кит О.И., Шатова Ю.С., Новикова И.А., Бахтин А.В., Никипелова Е.А., Габараева В.М. ОПЫТ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК НА АППАРАТЕ Verydex II Cell Search™ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ БЕЗ ОТДАЛЕННЫХ МЕТАСТАЗОВ // Фундаментальные исследования. – 2014. – № 3-4. – С. 747-749;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=33747 (дата обращения: 20.04.2024).