Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Пшеничная Н.Ю. 1 Кузнецова Г.В. 1 Колпаков Д.С. 2

---

1 ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

2 Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Для установления взаимосвязи между развитием тромбоцитопении у больных с хроническим гепатитом С (ХГС) и дефектами рецепторного аппарата тромбоцитов изучена частота мутаций W 515K и W 515L в гене Mpl, кодирующего рецепторы тромбоцитов к тромбопоэтину. Исследование выполнено у больных ХГС с наличием тромбоцитопении (n = 29), у пациентов без таковой (n = 28) и здоровых лиц (n = 32). Определение мутации в гене Mpl (W 515K и W 515L) оценивали с помощью количественной ПЦР в реальном времени. У больных ХГС обеих групп сильная мутация W 515L регистрировалась значительно чаще, чем у здоровых лиц – 46,1 ± 14,3 % и 42,8 ± 13,7 % против 7,7 ± 7,7 %, р < 0,05. Аналогичная тенденция прослеживалась и в отношении мутации W 515K, но без статистической значимости. Сильные точковые мутации в рецепторах тромбоцитов к тромбопоэтину, вероятно, индуцированы воздействием вируса НCV.

Статья в формате PDF

304 KB

тромбоцитопения

хронический гепатит С

рецепторы к тромбопоэтину

1. Мембранные рецепторы тромбоцитов: функции и полиморфизм / Е.Н. Воронина, М.Л. Филипенко, Д. Сергеевичев, И.В. Пикалов // Вестник ВОГиС. – 2006. – Т. 10. – № 3. – С. 553–564.

2. Соколова Н.А. Изменения в представлении о патогенезе Ph-негативных миелопролиферативных заболеваний / Н.А. Соколова, М.И. Савина // Молодой ученый. – 2011. – № 5. – Т.2. – С. 216–219.

3. Andrew I. Schafer Thrombocytosis/I.Andrew Schafer // N Engl J Med. – 2004. – № 3. – Р. 1211.

4. Fitzgerald L.A., Philips D.R. Platelet membrane glycoproteins / L.A. Fitzgerald, D.R. Philips, R.W. Colman, J. Hirsh, V.J. Marder, E.W. Saizman // Hemostasis and Thrombosis: Basic Principles and Clinical Practice. JB Lippincott, Philadelphia. – 2nd ed. – 1987. – P. 572–593.

5. Fujii H.Life-threatening severe immune thrombocytopenia during alpha-interferon therapy for chronic hepatitis C/H.Fujii ,T.Kitada , T.Yamada , et al. // Hepatogastroenterology. – 200. – № 50. – Р. 841–842.

6. Hynes R.O. Integrins: a family of cell surface receptors / R.O. Hynes // Cells. – 1987. – Vol 48. – P. 549–554.

7. Passamonti F. Clinical relevance of JAK2 (V617F) mutant allele burden / F. Passamonti, E. Rumi // Haematologica. – 2009. – Vol. 9, № 1. – Р. 7–10.

8. Smyth S.S., Joneckis C.C., Parise L.V. Regulation of vascular integrins. / S.S. Smyth, C.C. Joneckis, L.V. Parise // Blood. – 1993. – Vol. 81. – P. 2827–2843.

9. Weksler B.B. Review article: the pathophysiology of thrombocytopenia in hepatitis C virus infection and chronic liver disease // AlimentPharmacolTher. – 2007. – № 26. – P. 13–19.

Многие аспекты патогенеза тромбоцитопении при ХГС остаются до конца не изученными. Так, например, уменьшение выработки тромбопоэтина и снижение его активности вследствие снижения функциональной активности гепатоцитов при ХГС является доказанным [5], однако роль рецепторов к тромбопоэтину в патогенезе развития тромбоцитопении при ХГС до настоящего времени еще не изучалась [1, 4, 6, 8].

Основным регулятором процесса образования тромбоцитов является тромбопоэтин, в основном вырабатываемый клетками печени. В плазме крови он частично связывается с рецепторами с-Mpl, расположенными на тромбоцитах, а оставшаяся его часть оказывает стимулирующее влияние на пролиферацию мегакариоцитов в костном мозге. Синтез данных рецепторов кодируется геном Mpl [3]. У больных ХГС вследствие снижения функциональной активности гепатоцитов имеет место уменьшение выработки тромбопоэтина и снижение его активности [5]. С другой стороны, в гене Mpl описаны частые соматические мутации W515L иW515K, которые в гетерозиготном состоянии приводят к возникновению эссенциальной тромбоцитемии. Точковая мутация тромбопоэтинового рецептора встречается у 5–10 % больных с эссенциальной тромбоцитопенией [2, 7]. Поэтому механизм развития тромбоцитопении у больных ХГС, возможно, связан не только со снижением синтеза тромбопоэтина в печени, но и с дефектом экспрессии рецептора с-Mpl на тромбоцитах.

Оценка функциональной активности тромбоцитов, а именно состояния их рецепторов к тромбопоэтину, позволила бы более углубленно оценить механизмы формирования тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С и расширить современные представления о патогенетических аспектах этого заболевания.

Целью исследования явилось определение выраженности мутаций в рецепторах тромбоцитов к тромбопоэтину, а также установление взаимосвязи исследуемых показателей с развитием тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С.

Материалы и методы исследования

Объектом настоящего исследования явились больные ХГС, находившиеся на обследовании и лечении в условиях инфекционного боксированного отделения для взрослых № 4 МБУЗ ГБ№ 1 им. Н.А. Семашко г. Ростова-на-Дону.

В исследование вошли 58 больных с ХГС (РНК НCV+), не леченных ранее с использованием комбинированной противовирусной терапии, со степенью фиброза по данным непрямой эластометрии печени не выше F2 и отсутствием явных клинико-лабораторных признаков аутоиммунных заболеваний. Пациенты были разделены на 2 группы в зависимости от наличия (n1 = 29) или отсутствия у них тромбоцитопении (n2 = 28). По основным клинико-лабораторным параметрам (возраст, пол, активность АлАт и АсАт, генотип вируса, уровень виремии, степень выраженности фиброза) группы оказались практически идентичными, что позволило провести их дальнейший статистический анализ. В группу сравнения вошли практически здоровые лица в возрасте от 22 до 55 лет (n3 = 32).

Во всех группах проводилось количественное определение частоты мутаций в гене Mpl (W 515L и 515К), кодирующего с-Mpl рецептор тромбоцитов к тромбопоэтину, с предварительным выделением ДНК тромбоцитов, осуществлялось с помощью количественной ПЦР в реальном времени (RQ-PCR)по технологии TagMAN с использованием Mpl W 515L и 515К-тестов производства «ГеноТехнология». Определялось исходное число копий нормального гена и число копий гена с мутацией W 515L и 515К. Все исследования выполнялись в лаборатории на базе ФБУН «РостовНИИ микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора.

Результаты исследованияи их обсуждение

Состояние с-Mpl рецепторов тромбоцитов к тромбопоэтину при ХГС

Функциональное состояние с-Mpl рецепторов тромбоцитов к тромбопоэтину оценивали по частоте и экспрессии соматических мутаций W515L и W515K в гене Mpl. В группе здоровых лиц, также как и у больных ХГС обеих групп, точковые мутации W515L и W515K встречались практически с одинаковой частотой (рисунок). Их выявление свидетельствовало о возможной предрасположенности к развитию тромбоцитопении. Доминировала во всех группах мутация W515L, составляя соответственно 69,2 % от суммарной частоты встречаемости обеих мутаций у больных ХГС с тромбоцитопенией, 71,4 % у больных ХГС без тромбоцитопении 76,9 % у здоровых лиц.

Частота выявления соматических точковых мутаций W 515L и W 515К гена Mpl в исследуемых группах

Таким образом, различий в частоте встречаемости и типе соматической мутации гена Mplво всех исследуемых группах не обнаружено. Вместе с тем совершенно иные данные были получены при изучении степени экспрессии точковых мутаций у здоровых лиц и больных ХГС. Интенсивность мутации оценивалась по частоте замены аминокислоты триптофан в положении W515 на лейцин (W515 L) или лизин (W515 K) и выражалась в процентах. Мутация в пределах 0,0001–1,0 % считалась слабой, от 1,0–50 % – средней и свыше 50 % – сильной мутацией (таблица).

Выраженность соматических мутаций гена Mpl у больных в исследуемых группах (абс./ Х ± S, %)

Оказалось, что в обеих группах больных ХГС (как с тромбоцитопенией, так и без таковой), значительно чаще, чем у здоровых лиц, встречалась сильная мутацияW515L (46,1 ± 14,3 и 42,8 ± 13,7 % против 7,7 ± 7,7 % соответственно, p < 0,05). В отношении мутации W515К прослеживалась та же тенденция, но в связи с тем, что она встречалась значительно реже, достоверных отличий в исследуемых группах установить не удалось.

Полученные данные дают основание предполагать, что вирус гепатита С, попадая в организм человека, может усиливать мутацию гена Mpl, кодирующего рецепторы тромбопоэтина у лиц, уже имевших ранее точковые мутации W515L или W515К.

Под воздействием вируса слабая мутация может трансформироваться в выраженную и снижать опосредованное через c-Mpl рецептор связывание тромбоцитов с тромбопоэтином. В этом случае теоретически более значительное количество тромбопоэтина должно идти на стимуляцию пролиферации мегакариоцитов в костном мозге, но в связи с тем, что синтез тромбопоэтина в печени при ХГС снижен [5, 9], стимулирующий эффект по принципу «обратной связи» практически оказывается нивелированным. Объяснимо и отсутствие разницы в частоте выявления выраженных мутаций в группе больных с тромбоцитопенией и без таковой. В данном случае вирус способствует увеличению количества клеток, несущих данные мутации, усиливая выраженность дефектов в рецепторном аппарате тромбоцитов к тромбопоэтину. Проявятся ли эти нарушения клинически, иными словами, разовьется ли у данного конкретного пациента с ХГС тромбоцитопения, зависит не только от выраженности экспрессии данных точковых мутаций гена Мpl, но и от множества других эндогенных факторов, вносящих вклад в развитие тромбоцитопении.

У больных ХГС с тромбоцитопенией отмечались также изменения в коагулограмме. В 86,2 ± 6,52 % случаев (25 больных) эти сдвиги проявлялись в виде удлинения протромбинового времени до 12,20 ± 0,37 с и в 41,38 ± 9,31 % (12 больных) – снижения АЧТВ до 31,50 ± 0,54 с. У всех этих пациентов выявлялись антитела к рецепторам тромбоцитов. Следует отметить, что у больных со сниженным АЧТВ зарегистрировано и удлинение протромбинового времени.

У больных ХГС без тромбоцитопении указанные изменения протромбинового времени и АЧТВ регистрировались соответственно в 21,42 ± 7,90 % (6 больных) и 14,29 ± 6,74 % (4 больных) случаях, что было существенно меньше, чем у пациентов с тромбоцитопенией (p < 0,05 и p < 0,01 соответственно).

Заключение

Под влиянием вируса гепатита С экспрессия точковых мутаций W515L и W515К гена Mpl может усиливаться. Дефект экспрессии рецептора с-Mpl на тромбоцитах приводит к нарушению связывания тромбопоэтина, что в свою очередь ведет к снижению образования тромбоцитов. Вследствие этого наличие точковых мутаций в данном гене у больных ХГС можно рассматривать как один из прогностических факторов по развитию тромбоцитопении.

Рецензенты:

Харсеева Г.Г. д.м.н., профессор, зав.кафедрой микробиологии и вирусологии № 2, ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава РФ, г. Ростов-на-Дону;

Яговкин Э.А. д.м.н., с.н.с. заместитель директора Ростовского научно-исследовательского института микробиологии и паразитологии, г. Ростов-на-Дону.

Работа поступила в редакцию 17.04.2013.

Библиографическая ссылка