Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Осипова Ю.Л. 1 Булкина Н.В. 1 Кропотина А.Ю. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития», Саратов

Цель исследования определить показатели клеточного обновления эпителиоцитов десны при воспалительных заболеваниях пародонта у больных неэрозивной формой гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (НФГЭРБ). Обследовано 120 больных. 60 больных НФГЭРБ с гингивитом и пародонтитом, 40 больных эрозивной формой (ЭФГЭРБ) с гингивитом и пародонтитом. Группу сравнения составили 20 практически здоровых лиц. Установлено, что гингивит и пародонтит являются последовательными стадиями нарушения клеточного обновления эпителиоцитов десны, усилением процессов пролиферации и замедлением процессов апоптоза. Успешно проведенное лечение улучшает показатели клеточного обновления.

Статья в формате PDF

290 KB

пародонтит

гингивит

гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ)

пролиферация эпителиальных клеток

апоптоз

1. Булкина Н.В. Хронический пародонтит при заболеваниях органов пищеварения: клинико-инструментальные, морфологические и иммуногистохимические критерии возникновения и прогнозирования течения: дис. … д-ра мед. наук. – Волгоград, 2004. – С. 89–117.

2. Булкина Н.В., Косачев М.А., Осадчук М.А. Заболевания пародонта при патологии органов пищеварения. – Самара: ООО «Офорт», 2006. – С. 48–85.

3. Осадчук А.М., Коган Н.Ю., Кветной И.М. Показатели пролиферации и апоптоза в патогенезе и прогнозировании течения заболеваний желудка, ассоциированных H. Pylori // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. – 2007. – Т. 17, №4. – С. 20–24.

4. Осадчук А.М., Детюченко В.П., Милова-Филиппова Л.А. Влияние антигеликобактерной терапии на показатели клеточного гомеостаза (Ki-67, Bcl-2 и апоптоз) эпителиоцитов желудка при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // Рос.журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. – 2008. – Т18, №4. – С. 41–47.

5. Jorge O., Cuello Carridin F.D., Jorge A. Helicobacter pylori infection affects the expression of PCNA, p53, cerbB-2 and Bcl-2 in the hyman gastric mucosa // Rev. Esp. Enferm. Dig. – 2003. – Vol. 95, №2. – P. 89–104.

6. Moss S.F., Calan J., Agarwal B. et al. Induction of gastric epithelial apoptosis by Helicobacter pylori // Gut. – 1996. –

Vol. 38. – P. 498–501.

7. El-Zimaiti H.M., Grahan D.Y., Genta R.M. et al. Sustained increase in gastric antral epithelial cell proliferation despite cure of Helicobacter pylori infection // Am. J. Gastroenterol. – 2000. – Vol. 95, № 4. – P. 930–935.

Широкая распространенность воспалительных заболеваний пародонта, склонность к длительному и прогрессирующему течению определяют разработку вопросов этиопатогенеза, совершенствования методов лечения как одну из главных проблем современной стоматологии. В формировании воспалительных заболеваний пародонта существенное значение имеют системные изменения организма в целом и, в частности, заболевания органов пищеварения [1]. Частое сочетание гингивита, пародонтита с заболеваниями пищевода и желудка говорит о закономерности этой связи и об универсальности механизмов их развития.

Важную роль в прогрессировании нарушений клеточного гомеостаза эпителиоцитов слизистой полости рта при воспалительных заболеваниях пародонта на фоне гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ) принадлежит Ki-67, антиапоптозной молекуле Bcl-2 и апоптозу [2, 3, 4, 5]. Однако характер и степень изменений этих показателей при прогрессировании пародонтита на фоне катарального эзофагита недостаточно изучены. Данные, характеризующие соотношение пролиферации и апоптоза при различных степенях тяжести пародонтита на фоне ГЭРБ, в литературе немногочисленны. В свою очередь, решение данных вопросов позволило бы улучшить раннюю диагностику, оптимизировать лечение и повысить качество жизни этой категории больных.

Цель исследования - определить параметры клеточного обновления эпителиоцитов десны при воспалительных заболеваниях пародонта у больных неэрозивной формой гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

Материалы и методы исследования

Всего обследовано 120 больных, из них 60 пациентов с заболеваниями пародонта на фоне неэрозивной форме гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (НФГЭРБ), 40 пациентов с эрозивной формой (ЭФГЭРБ) и воспалительными заболеваниями пародонта, группы сравнения составили 20 практически здоровых лиц. Больные и здоровые обследованы в динамике по единой программе, включающей клинические методы исследования. Диагностику заболеваний пародонта проводили в соответствии с терминологией и классификацией болезней пародонта, утвержденными на XVI Пленуме Всесоюзного общества стоматологов (1983). Больным проводили комплексное клинико-рентгенологическое обследование тканей пародонта. Оценивали изменение цвета слизистой оболочки десны; степень кровоточивости десен [Muhlemann, 1971]; глубину пародонтальных карманов (ВОЗ, 1989); патологическую подвижность зубов [Fleszar T.J. et al., 1980]. Также проводили индексную оценку состояния тканей пародонта, используя упрощенный индекс гигиены по Грину - Вермильону (1965); папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс (РМА) [Parma G., 1960]; пародонтальный индекс (ПИ), [Russel A., 1967]. Проводили рентгенологическое обследование зубочелюстной системы. Диагноз ГЭРБ устанавливался на основе результатов комплексного клинико-морфологического обследования и базировался на рекомендациях, принятых в 1997 г. в Генвале (Бельгия) международной группой по изучению рефлюксной болезни. Наблюдение за больными проводили по единой программе, включающей общеклиническое обследование, ультразвуковое исследование органов брюшной полости, фиброгастродуоденоскопию (ФГДС), общее морфологическое и цитологическое, иммуногистохимическое исследования.

Для морфологической диагностики проводили биопсию слизистой оболочки маргинального края десны, десневых сосочков, а также слизистой оболочки в области переходной складки десны. Биопсийный материал фиксировался в 10 % забуференном нейтральном формалине, по Лилли, в течение 24 часов с последующей промывкой в проточной воде в течение суток. После фиксации материал обезвоживался и заливался в парафин. Для обзорного гистологического изучения депарафинированные серийные срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином-эозином. Парафиновые срезы толщиной 4-6 мкм помещали на предметные стекла, покрытые пленкой из поли-L-лизина (Sigma). Для выявления апоптозных ядер исследуемый материал импрегнировали по Мозеру (1995). Иммуногистохимическое исследование проводили с использованием моноклональных мышиных антител к маркеру пролиферирующих клеток - Ki-67 (1:100, Novocastra) и к антиапоптозному белку Вcl-2 (1:100, Novocastra). В качестве вторых антител использовали универсальный набор, содержащий биотинилированные анти-мышиные иммуноглобулины. Визуализацию окрасок проводили с применением комплекса авидина с биотинилированной пероксидазой (ABC-kit), с последующим проявлением пероксидазы хрена диаминобензидином (все реагенты от Novocastra).

Морфологические изображения, поступающие через оптическую систему микроскопа Nikon Eclipse 400 (увеличение х320: объектив 40, окуляр 10, фильтр 0,8), регистрировались цифровой цветной видеокамерой Nikon DXM1200, вмонтированной в тубус микроскопа, и передавались в компьютер Pentium-4. Количество Ki-67 и Bcl-2 - иммунопозитивных ядер клеток автоматически подсчитывалось в 10 рандомизированных полях зрения. При указанном увеличении и цифровые данные пересчитывались на 1 мм2 с помощью пакета прикладных морфометрических программ «Видеотест-Морфология 4.0».

Гибель клеток в форме апоптоза определяли по индексу апоптоза (I_АПТ) по формуле I_АПТ ( %) = N (число апоптозных ядер, окрашенных по методу Мозера)/N(общее число ядер)∙100. Нами введен показатель Ki-67/I_АПТ, наилучшим образом характеризующий состояние клеточного гомеостаза.

Результаты исследования и их обсуждение

В соответствии с результатами обследования состояния пародонта, среди пациентов с НФГЭРБ преобладали лица с генерализованным пародонтитом легкой степени (41,2 %) или генерализованным катаральным гингивитом (28,0 %), а среди пациентов с ЭФГЭРБ - с генерализованым пародонтитом средней и тяжелой степени тяжести (41,8 %) В результате проведенного иммуногистохимического исследования установлено, что в норме эпителиоциты слизистой полости рта проявляют низкий потенциал пролиферативной и антиапоптозной активности - I_Ki-67 10,5 ± 0,7; I _Bcl-2 - 2,1 ± 0,6; I_АПТ соответствует пролиферативной активности эпителиоцитов и составляет 0,50 ± 0,02. При хроническом гингивите как на фоне НФГЭРБ (I _Ki-67 12,3 ± 1,2), так и ЭФГЭРБ (I _Ki-67 12,7 ± 1,5) изменения показателей пролиферативной способности и апоптоза эпителиальных клеток десны не существенны. У пациентов с хроническим пародонтитом на фоне НФГЭРБ установлено достоверное повышение пролиферативной способности и увеличение процента гибели эпителиальных клеток десны в форме апоптоза (I _Ki-67 34,6 ± 2,0; I _Bcl-2- 12,1 ± 0,7; I_АПТ 0,65 ± 0,04)по сравнению со значениями у практически здоровых и у пациентов с хроническим гингивитом (I _Ki-67 12,3 ± 1,2; I _Bcl-2- 3,1,1 ± 0,7; I_АПТ 0,45 ± 0,05).

Из полученных данных видно, что изменение индекса пролиферации было однотипным и характеризовалось его достоверным повышением соответственно тяжести пародонтита. Обращает на себя внимание тот факт, что при хроническом пародонтите пролиферативная активность эпителиоцитов десны повышалась в большей степени (в 3,4 раза по сравнению со значением в группе практически здоровых лиц), чем показатель их апоптоза, увеличение которого было менее значимым (в 1,3 раза).

Следовательно, в эпителии десны, при хроническом генерализованном пародонтите преобладают пролиферативные процессы. Высокий уровень пролиферации обусловлен не только ее прямой стимуляцией, но и включением механизмов отрицательной обратной связи. Это подразумевает, что ускоренная гибель клеток приводит к их повышенному новообразованию. В свою очередь, усиленная пролиферация активирует апоптоз. Однако в отношении взаимосвязи пролиферации и апоптоза пока сложно определить, что является первичным. У пациентов с заболеваниями пародонта количество иммунопозитивных bcl-2-ядер в эпителии десны было увеличено соответственно тяжести поражения пародонта и пищевода: на фоне НФГЕРБ (I _Bcl-2- 3,1,1 ± 0,7 гингивит до I _Bcl-2 - 12,1 ± 0,7; средне-тяжелое течение пародонтита) и соответственно ЭФГЭРБ от I _Bcl-2 - 4,0,1 ± 0,8 гингивит до I _Bcl-2 - 15,1 ± 0,7; средне-тяжелое течение пародонтита). Полученные данные позволяют предположить, что в основе дисбаланса между процессами апоптоза и пролиферации при пародонтите на фоне эзофагеальной рефлюксной болезни лежит генетически детерминированные или приобретенные нарушения синтеза белка bcl-2. Кроме того, высокий индекс bcl-2-положительных ядер способствует задержке апоптоза воспалительных клеток, которые дольше остаются в тканях пародонта, продуцируют чрезмерное количество цитокинов, способствуя, тем самым, прогрессированию деструкции пародонта.

Проведенные через 2 месяца после эрадикационной терапии иммуногистохимические исследования показали значимое улучшение показателей клеточного обновления у всех обследованных групп пациентов: при гингивите - I _Ki-67 13,5 ± 1,2; I _Bcl-2 - 3,0 ± 0,5; I_АПТ 0,43 ± 0,06; при пародонтите I _Ki-67 16,6 ± 1,2; I _Bcl-2 - 3,3 ± 0,7; I_АПТ 0,63 ± 0,06. Происходило резкое снижение пролиферативного потенциала эпителиоцитов, на фоне относительно небольшого сокращения I_АПТ. Улучшение показателей клеточного гомеостаза после проведенной противовоспалительной терапии заболеваний пародонта и эрадикационной терапии пищевода объясняется падением активности воспалительного процесса в слизистой оболочке полости рта и пищевода и, как следствие этого, уменьшением альтеративных процессов, так как скорость пролиферации находится в прямой зависимости от степени повреждения клеток.

Выводы

Клеточное обновление эпителиоцитов при воспалительных заболеваниях пародонта на фоне эрозивной и неэрозивной форм ГЭРБ характеризуется прогрессирующим отставанием апоптоза эпителиоцитов слизистой оболочки полости рта от скорости пролиферативных процессов. При воспалительных заболеваниях пародонта в эпителии десны преобладают гиперпролиферативные процессы, обусловленные ускоренной гибелью клеток. Комплексная противовоспалительная и эрадикационная терапия достоверно улучшает показатели клеточного обновления в тканях пародонта, что сопровождается уменьшением отношения пролиферации к апоптозу через 2 месяца после проведенного лечения.

Рецензенты:

Лепилин А.В., д.м.н., профессор, зав. кафедрой хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского», г. Саратов;

Михальченко В.Ф., д.м.н., профессор, зав. кафедрой стоматологии терапевтической ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет», г. Волгоград.

Работа поступила в редакцию 16.01.2012.

Библиографическая ссылка