Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Шавлюгин Е.А. 1 Ханин М.А. 1

---

1 Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, Москва

Система комплемента играет исключительно важную роль в защите организма от патогенных микроорганизмов, инфицированных и трансформированных клеток. Известны три пути активации системы комплемента: классический, альтернативный и лектиновый. Однако в результате биохимических исследований получены результаты, свидетельствующие о возможности активации системы комплемента ферментами (фактор Хагемана и калликреин), входящими в контактную систему свертывания крови. Целью работы является исследование четвертого пути активации системы комплемента с участием контактной системы. Исследование проведено методом математического моделирования. Особенностью работы является теоретическое определение неизвестных кинетических констант с помощью оптимизационного метода. Исследована чувствительность системы комплемента к изменению кинетических констант и концентраций проферментов.

Статья в формате PDF

957 KB

система комплемента

фактор Хагемана

калликреин

математическая модель динамики активации

оптимизационная модель

теоретическое определение кинетических констант

1. Ghebrehiwet B., Silverberg M., Kaplan A.P. Activation of the classic pathway of complement by Hageman factor fragment // J. Exp. Med. – 1981. – №153. – Р. 665–676.

2. DiScipio R.G. The activation of the alternative pathway C3 convertase by human plasma kallikrein // Immunology. – 1982. – №45. – Р. 587–595.

3. Schmaier AH. The elusive physiologic role of Factor XII //J. Clin Invest. – 2008 Sep. – №118(9) . – Р. 3006–3009.

4. Defective thrombus formation in mice lacking coagulation factor XII / T. Renne, et al. // J.Exp.Med. – 2005. – №202. – Р. 271–281.

5. Tyurin K.V., Khanin M.A. Optimality principle and determination of kinetic constants for biochemical reactions // Math. Med. Biol. – 22 (2005). – №1. – Р. 217–229.

6. Korotaevskiy A.A., Hanin L.G., Khanin M.A. Non-linear dynamics of the complement system activation // Math.Biosci. – 222 (2009). – №127. – Р. 3197–3205.

7. Silverberg M., Kaplan A.P. Enzymatic activities of activated and zymogen forms of human Hageman factor (factor XII) // Blood. – 1982 Jul. – №60(1). – Р. 64–70.

8. Complement-mediated serum sensitivity among spirochetes that cause Lyme disease–Infect / A.P. van Dam, A. Oei, R. Jaspars, C. Fijen, B. Wilske, L. Spanjaard, J. Dankert // Immun. – 65 (1997). – №228. – Р. 101–108

9. Kochi S.K., Johnson R.C. Role of immunoglobulin G in killing of Borreliaburgdorferi by the classical complement pathway // Infect. Immun. – 56 (1988). – Р. 249–255.

10. Renné T., Nieswandt B., Gailani D. The intrinsic pathway of coagulation is essential for thrombus stability in mice // Blood Cells Mol Dis. – 2006 Mar-Apr. – №36(2). – Р. 148–51.

Система комплемента является чрезвычайно важной частью иммунной системы. Ее физиологическая роль заключается в уничтожении патогенных микроорганизмов или трансформированных клеток путем индукции осмотического лизиса. Известны 3 механизма активации системы комплемента: классический, альтернативный и лектиновый пути. Однако имеются результаты биохимических исследований, свидетельствующие о том, что контактная система свертывания крови также может активировать систему комплемента. Было показано, что дважды активированный фактор Хагемана (фактор beta-XIIa) способен активировать комплемент С1 [1]. Кроме того, калликреин активирует комплементы C3 и С5 [1, 2]. С другой стороны, известно, что фактор Хагемана активируется на отрицательно заряженных поверхностях. К числу таких поверхностей относятся мембраны некоторых патогенных микроорганизмов. Таким образом, имеются основания высказать гипотезу, согласно которой контактная система свертывания крови способна инициировать активацию системы комплемента, формируя четвертый путь активации этой системы.

В последние годы в научной литературе активно обсуждается вопрос о физиологической роли контактной подсистемы системы свертывания крови [3]. Было показано, что у мышей, нокаутированных по фактору XII, не наблюдаются геморрагии [10]. С другой стороны, у этих мышей не формируются патологические тромбы [4]. Таким образом, есть серьезные основания считать, что контактная система не вносит существенного вклада в формирование гемостатических тромбов. В поиске физиологического назначения контактной системы первое место занимает исследование эффективности этой системы как инициатора активации системы комплемента. Целью работы является исследование динамики активации системы комплемента, инициируемой контактной системой, являющейся частью внутреннего пути свертывания крови. Исследование проведено методом математического моделирования.

Взаимодействие этих систем осуществляется путем активации комплементов C1, C3 и C5 активированными факторами контактной системы (XIIa и калликреин). Первично происходит активация фактора XII на отрицательно заряженных мембранах патогенных микроорганизмов. Далее активируется прекалликреин с участием высокомолекулярного кининогена в качестве кофактора. Реакция активации прекалликреина является реципрокной, т.е. калликреин, формирующийся при активации прекалликреина, в свою очередь, способен активировать фактор Хагемана. Часть схемы, приведенной на рис. 1 и относящейся к системе комплемента, аналогична схеме системы, приведенной в работе [6]. Система комплемента представляет собой каскад ферментативных реакций, дополненный реакциями второго порядка. В итоге активации системы комплемента формируется мембрано-атакующий комплекс. Терминальной структурой мембрано-атакующего комплекса является «кольцо», состоящее из комплементов C9. Мембрано-атакующий комплекс обладает способностью создавать поры в клеточной мембране. Когда число пор достигает некоторого критического значения, клетка-мишень погибает в результате осмотического лизиса.

Материалы и методы исследования

Основным методом исследования, примененным в предлагаемой работе, является математическое моделирование динамики сложных биохимических систем.

Описание математической модели

В приложении приведена математическая модель динамики активации системы комплемента с учетом инициирующей роли контактной системы. Математическая модель представляет собой систему обыкновенных нелинейных дифференциальных уравнений первого порядка. В модели учтены ферментативные реакции, реакции второго порядка (формирование комплексов, ингибирование), а также конкуренция субстратов за фермент. В табл. 1 приведены кинетические константы биохимических реакций системы комплемента.

Таблица 1

Величины кинетических констант

Источниками информации о численных значениях кинетических констант являются результаты биохимических исследований, а также величины, полученные с помощью оптимизационного метода в работе [6]. Неизвестными являются следующие кинетические константы: , , , , , . В табл. 2 приведены концентрации проферментов контактной системы и системы комплемента в начальном (т.е. фоновом) состоянии.

Таблица 2

Концентрации проферментов

Таким образом, для конкретизации модели оказывается необходимым определение указанных неизвестных констант с помощью оптимизационного (теоретического) метода.

Оптимизационный метод определения численных значений неизвестных кинетических констант

В работах [5‒6] был предложен метод определения неизвестных величин кинетических констант биохимических реакций, основанный на критерии минимального потребления белков биохимической системы. В рассматриваемом случае критерий оптимальности имеет вид

 (1)

В работе принята гипотеза, согласно которой кинетические константы системы комплемента определяются решением обратной оптимизационной задачи для классического и альтернативного путей системы комплемента, т.е. при активации комплемнета комплексом антиген-антитело. Эта гипотеза обосновывает возможность использования при решении рассматриваемой задачи величин кинетических констант, определенных в работе [6]. Таким образом, должны быть определены только кинетические константы биохимических реакций, входящих в систему комплемента ( , , , , , ),
а также кинетические константы биохимических реакций активации ключевых белков системы комплемента ферментами контактной системы. В число неизвестных констант не входит кинетическая константа автоактивации фактора Хагемана. Эта константа варьировалась вблизи известной величины, полученной в биохимических исследованиях, в которых инициатором автоактивации являлась поверхность декстран-сульфата. В табл. 1 приведены величины кинетических констант автоактивации фактора Хагемана, полученные различными авторами.

Таким образом, при решении обратной оптимизационной задачи необходимо определить 5 кинетических констант на основе условия совпадения эмпирических и оптимальных (теоретических) величин двух концентраций. Другими словами, система уравнений, решение которых определит кинетические константы, является недоопределенной. В связи с этим для решения задачи был применен метод наименьших квадратов Гаусса, т.е. было использовано дополнительное условие: сумма квадратов отклонений -  > min.

При поиске условного экстремума были использованы следующие ограничения:

(i) условие выполнения биохимической системой ее физиологического назначения;

(ii) устойчивость начального (фонового) состояния системы.

Физиологическое назначение системы комплемента заключается в уничтожении клеток-мишеней за достаточно короткий промежуток времени с тем, чтобы скорость уничтожения существенно превышала скорость размножения популяции клеток-мишеней. Для случая borreliaburgdorferi [8, 9] время, за которое уничтожается популяция в неразведенной сыворотке крови, было равно 2,3 мин. Эта величина получена путем пересчета экспериментальных данных, соответствующих действию сыворотки крови, разведенной в 5 раз.

Для рассматриваемой задачи уравнения Лагранжа имеют вид:

 (2)

где 

 - зависимость времени достижения критической концентрации мембрано-атакующих комплексов от векторов концентраций (С) и кинетических констант (К). Функция  определяется решением системы обыкновенных дифференциальных уравнений первого порядка, приведенных в AppendixB;

 - время, за которое СК уничтожает популяцию патогенных микроорганизмов, определенное экспериментальными методами. В рассматриваемой задаче были использованы результаты исследований бактерицидного эффекта СК на популяции borrelia burgdorferi [9]. В цитированной работе исследование проводилось на разведенной сыворотке крови, которая использовалась как источник белков системы комплемента и антител, направленных против антигенов borrelia burgdorferi. Затем математическая модель, представленная в Appendix 1, позволила определить время уничтожения популяции под действием неразведенной сыворотки; λ - множитель Лагранжа; C - вектор концентраций проферментов (XII, PK, C5);

K - вектор кинетических констант биохимических реакций активации ключевых белков системы комплемента активированными факторами контактной системы (калликреином и фактором Хагемана).

В предлагаемом исследовании оптимизационный метод был применен для определения неизвестных кинетических констант. Для формулировки первого ограничения были использованы результаты исследования действия системы комплемента на популяцию бореллиябургсдорфери (возбудитель болезни Лайма). Константы, определенные с помощью оптимизационного метода, приведены в табл. 1.

Результаты исследования и их обсуждение

Влияние кинетической константы автоактивации фактора Хагемана на мембране клетки-мишени на формирование мембрано-атакующих комплексов

Представляется очевидным, что константа активации фактора Хагемана на мембранах патогенных микроорганизмов может изменяться в широких пределах в зависимости от особенностей популяций микроорганизмов. На рис. 1 представлена зависимость концентрации мембрано-атакующих комплексов от константы автоактивации фактора Хагемана.

Рис. 1. Зависимость времени достижения критического числа мембрано-атакующих комплексов от константы автоактивации фактора Хагемана

Как видно из рис. 1, при увеличении кинетической константы автоактивации фактора XII в 60 раз время достижения критического числа МАКов уменьшается в 3 раза. Малая чувствительность к изменению кинетических констант и концентраций проферментов является общим свойством биохимических систем организма. Приведенные данные свидетельствуют о том, что в рассмотренных пределах изменения кинетической константы активации фактора Хагемана находятся возможные реальные величины этой константы для случая активации фактора XII на отрицательно заряженных мембранах различных популяций патогенных микроорганизмов. При константе скорости автоактивации фактора Хагемана порядка 10 min-1 достигается реальное время порядка
2-3 мин [9].

Влияние изменения концентраций прекалликреина, C1inh, фактора Хагемана и C5 на время достижения критического числа мембрано-атакующих комплексов

Рис. 2-5 иллюстрируют чувствительность основной физиологической функции системы комплемента к дефицитам проферментов контактной системы и белков С3 и С5, входящих в систему комплемента.

Рис. 2. Зависимость концентрации
мембрано-атакующих комплексов от времени. Кривые 1-5 относятся к относительным концентрациям фактора C3, равным 1,0; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 соответственно

Рис. 3. Зависимость концентрации
мембрано-атакующих комплексов от времени. Кривые 1-5 относятся к относительным концентрациям фактора C5, равным 1,0; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 соответственно

Рис. 4. Зависимость концентрации
мембрано-атакующих комплексов от времени. Кривые 1-5 относятся к относительным концентрациям фактора XII, равным 1,0; 0,8; 0,6; 0,4; 0.2 соответственно

Рис. 5. Зависимость концентрации
мембрано-атакующих комплексов от времени. Кривые 1-5 относятся к относительным концентрациям калликреина, равным 1,0; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 соответственно

Для проферментов: фактора С5, прекалликреина и фактора Хагемана чувствительность к дефициту оказывается сравнительно небольшой. При уменьшении концентрации профермента в 5 раз время (tкр), необходимое для достижения критического числа МАК, возрастает от 2,3 до 3,5 мин (на 30-40 % в зависимости от профермента). Исключение составляет комплемент С3, для которого t в тех же условиях возрастает менее чем на 1 %.

Заключение

Биохимические системы организма должны обладать высокой надежностью. В ходе эволюции возникли различные способы обеспечения надежности биохимических систем:

(i) обеспечение слабой чувствительности биохимических систем к дефициту концентраций субстратов, а также к изменению величин кинетических констант;

(ii) включение в схему биохимической системы нескольких параллельных ветвей;

(iii) наличие нескольких альтернативных механизмов активации системы.

Поскольку бактерицидная функция иммунной системы чрезвычайно существенна с точки зрения выживания популяции, представляется естественным наличие нескольких параллельных путей активации системы комплемента. Предлагаемая работа подтверждает возможность функционирования четвертого пути активации системы комплемента (помимо классического, альтернативного и лектинового) - контактного пути, инициируемого автоактивацией фактора Хагемана на отрицательно заряженных мембранах патогенных микроорганизмов.

Известны три биохимические реакции активации системы комплемента ферментами, входящими в состав контактной системы свертывания крови [1, 2]. В работе [3] приведен обзор результатов, полученных в этой области. Именно, было установлено, что два фермента, участвующих в контактной системе - фактор Хагемана и калликреин, ‒ способны активировать белки системы комплемента - C1, C3 и C5, которые являются ключевыми участниками каскада ферментативных реакций, образующего систему комплемента. Представляется интересным исследование активации системы комплемента контактной системой свертывания крови при наличии в плазме крови патогенных микроорганизмов с отрицательно заряженными мембранами. Поскольку численное значение константы скорости автоактивации фактора Хагемана на мембранах бактерий неизвестно, в предлагаемой работе эта величина варьирована вблизи значения, измеренного на декстран-сульфате. Установлено, что при величинах констант активации С1, С3, С5 ферментами контактной системы, определенных с помощью оптимизационной модели, четвертый путь активации комплемента играет сопоставимую роль с другими путями активации (классическим и альтернативным).

Контактная система может активироваться при контакте фактора Хагемана и коллагена. Таким образом, при активации внешнего пути коагуляции активируется также и внутренний путь, что приведет и к активации системы комплемента. Это взаимодействие систем коагуляции и комплемента представляется физиологически оправданным, т.к. при повреждении сосуда может возникнуть потребность в иммунной защите от проникших в рану патогенных бактерий.

Система уравнений динамики активации системы комплемента при инициации контактной системой

Модель контактной системы:

Уравнения динамики активации белков системы комплемента С1, С3, С5.

Рецензенты:

Домницкая Т.М., д.м.н., профессор кафедры функциональной диагностики ФПК МР РУДН, г. Москва;

Якобовский М.В., д.ф.-м.н., зав. сектором Института прикладной математики им. М.В. Келдыша РАН, г. Москва.

Работа поступила в редакцию 23.11.2011.

Библиографическая ссылка