Вопросы профилактики и лечения тромбогеморрагических заболеваний и синдромов приобретают особое значение в связи со значительной их частотой, особенностями течения и тяжелыми отдаленными последствиями. Тромбоз является результатом сложных взаимоотношений и взаимодействий разнообразных этиологических факторов и патогенетических механизмов. Основным звеном первичного гемостаза являются тромбоциты, регулирующие агрегатное состояние крови за счет способности изменять гемостатический потенциал, который способствует сохранению жидкого состояния крови в норме или гемокоагуляции при определенных патологических состояниях [1].
Производные ксантина нашли широкое применение в качестве средств, корректирующих активность сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза [2]. Одним из современных направлений в разработке новых лекарственных средств является синтез аналогов и производных применяемых лекарственных препаратов. В ранее опубликованных работах [3, 4] представлены данные, характеризующие зависимость «структура-активность» для применяемых в медицине производных ксантина. Эти результаты лежат в основе дальнейшего поиска корректоров функциональной активности тромбоцитов среди производных ксантина для создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов.
Цель: оценить влияние 8 синтезированных производных ксантина на систему гемостаза in vitro и сравнить с применяемыми в медицине лекарственными препаратами.
Объекты исследования - лекарственные препараты: пентоксифиллин, кофеин бензоат натрия, эуфиллин, а также производные ксантина, впервые синтезированные на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета.
Материал и методы исследования
Исследование влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили in vitro по методу Born на агрегометре «Thromlite-1006A» на донорской крови человека [7]. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл, производства «Технология-Стандарт», г. Барнаул (рис. 1А). Определение активности исследуемых производных проводили в концентрации 2⋅10-3 М/л. При анализе агрегатограмм обращали внимание на спонтанную агрегацию тромбоцитов, вызванную введением исследуемого вещества в плазму, рассчитывали степень подавления или усиления агрегации под действием производных ксантина, оценивали дезагрегационный эффект соединений [5].
Исследование антикоагуляционной активности проводили in vitro стандартными коагуляционными методами на турбометрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 на донорской крови человека. Проводилось определение активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A. Clauss [6]. Определение антикоагуляционной активности исследуемых производных проводили в конечной концентрации 10-3 г/мл.
Препараты сравнения: в качестве антикоагулянта использовали «Гепарин натрия» (производства ОАО «Синтез», Россия), в качестве антиагрегантов - пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин (ОАО «Дальхимфарм», Россия). Определение влияния на функциональную активность тромбоцитов и плазменный компонент гемостаза проводили на 6 пробах крови разных доноров для каждого соединения. Данные показателей статистически обрабатывали с применением t-критерия Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты исследования влияния производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов представлены в табл. 1.
Из табл. 1 видно, что все производные ксантина в данной концентрации проявляют антиагрегационную активность. Среди препаратов сравнения наибольшую активность оказал пентоксифиллин. При предварительной инкубации пентоксифиллина в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 мин, происходило снижение агрегации в среднем на 50,0 % относительно контроля (рис. 1б).
Среди впервые синтезированных производных ксантина наибольшую активность проявило соединение М-23. Введение 2⋅10-3 М/л вещества в кювету агрегометра за 3 мин до индуктора приводит к подавлению агрегации тромбоцитов в среднем на 20,0 % относительно контроля (рис. 2а). Это превышает показатели антиагрегационной активности препаратов сравнения - кофеин-бензоат натрия и эуфиллина.
Таблица 1
Влияние производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов
|
№ пп |
Шифр |
АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов в присутствии соединения ( % к контролю) |
|
1. |
М-29 |
91,7±2,7 |
|
2. |
М-38 |
90,2±1,9 |
|
3. |
М-28 |
93,4±2,1 |
|
4. |
М-31 |
98,4±1,6 |
|
5. |
М-37 |
95,7±2,2 |
|
6. |
М-23 |
79,9±2,3 |
|
7. |
М-25 |
93,1±2,4 |
|
8. |
М-32 |
93,1±2,5 |
|
9. |
Пентоксифиллин |
48,1±2,7 |
|
10. |
Кофеин-бензоат натрия |
84,8±1,9 |
|
11. |
Эуфиллин |
92,8±1,7 |
Примечание: данные достоверны (р < 0,05).
а б
Рис. 1: а - агрегация тромбоцитов индуцированная АДФ (контроль);
б - агрегация тромбоцитов в присутствии пентоксифиллина
Эуфиллин проявил в данной концентрации наименьшую антиагрегационную активность среди применяемых в настоящее время метилксантинов и уступает ряду впервые синтезированных соединений (рис. 2б).
Результаты исследования влияния соединений на плазменный компонент гемостаза представлены в табл. 2.
Соединения показали различное влияние на плазменный компонент гемостаза, проявляющееся в изменении показателя внутреннего пути свертывания крови - АПТВ. На показатели ПВ и концентрацию фибриногена в данной концентрации значимого влияния соединений не регистрировалось.
а б
Рис. 2: а - агрегация тромбоцитов в присутствии М-23;
б - агрегация тромбоцитов в присутствии эуфиллина
Таблица 2
Влияние производных ксантина на плазменный компонент гемостаза
|
№ пп |
Шифр |
АПТВ, % к контролю |
ПВ, % к контролю |
Фибриноген, % к контролю |
|
1. |
М-29 |
108,3 ± 3,1 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
2. |
М-38 |
106,9 ± 2,7 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
3. |
М-28 |
105,2 ± 2,2 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
4. |
М-31 |
104,1 ± 1,8 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
5. |
М-37 |
106,4 ± 2,1 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
6. |
М-23 |
104,2 ± 1,8 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
7. |
М-25 |
104,7 ± 1,6 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
8. |
М-32 |
108,7 ± 2,3 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
|
9. |
Гепарин |
154,7 ± 3,7 |
100,0 ± 0,0 |
100,0 ± 0,0 |
Примечание: данные достоверны (р < 0,05).
Среди впервые синтезированных производных ксантина найдены соединения, превосходящие по антиагрегационной активности ряд применяемых в настоящее время препаратов. Кроме этого, соединения оказывают влияние и на плазменный компонент гемостаза. Полученные результаты свидетельствуют о более широком антитромботическом потенциале новых производных ксантина.
Таким образом, установлено различное влияние впервые синтезированных производных ксантина на систему гемостаза, выявлены активные соединения. Полученные данные расширяют информационное поле предыдущих исследований и позволяют более детально анализировать зависимость «структура-активность» в перспективе, что в очередной раз убеждает в необходимости и актуальности дальнейших исследований среди производных ксантина.
Список литературы
- Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1988. - 528 с.
- Государственный реестр лекарственных средств. - М., 2004. - Т. 2. - С. 1141-1142.
- Поиск зависимости «структура-активность» производных ксантина в отношении адгезивно-агрегационной функции тромбоцитов / А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин, А.З. Саитгалина // Химия и медицина: тезисы докладов VIII Всероссийской конференции. - Уфа, 2010. - С. 96-97.
- Синтез солей (3-метилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, и их влияние на агрегацию тромбоцитов / Г.А. Тимирханова, А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин // Башкирский химический журнал. - 2008. - Т. 15, № 3. - С. 63-65.
- Поляков А.Е, Черняк В.А. Метод исследования агрегационной функции тромбоцитов // Лабораторное дело. - 1989. - № 10. - С. 19-20.
- Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ; под общ. ред. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - С. 461-476.
- Воrn G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal // Nature. - 1962. - Vоl. 194,48З2. - Р. 924-929.
Рецензенты:
Фазлыев М.М., д.м.н., профессор, начальник госпиталя ФГУЗ «Медико-санитарная часть МВД по Республике Башкортостан», г. Уфа;
Никитина И.Л., д.м.н., профессор, директор филиала ФГУ «Консультативно-методический центр лицензирования» Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития по Республике Башкортостан, г. Уфа.
Работа поступила в редакцию 28.04.2011.
Библиографическая ссылка
Камилов Ф.Х., Тимирханова Г.А., Самородова А.И., Муратаев Д.З., Халиуллин Ф.А. ПОИСК АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ СРЕДИ ПРОИЗВОДНЫХ 2-[3-МЕТИЛ-1-ЭТИЛ-7-(ДИОКСОТИЕТАНИЛ-3)КСАНТИНИЛ-8-ТИО] УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, ВЛИЯЮЩИХ НА СИСТЕМУ ГЕМОСТАЗА // Фундаментальные исследования. – 2011. – № 9-2. – С. 254-256;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=28136 (дата обращения: 03.12.2024).